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高效液相色谱法概述6

高效液相色谱仪构成及作用

检测器的分类

高效液相色谱法的分类

高效液相色谱法的应用

高效液相色谱仪的操作仪器分析

一、基本组成高效液相色谱仪具有稳定流量的流动相，通过高压输液系统将样品带入色谱柱，在色谱柱中不同待测组分得到分离，并先后从色谱柱中流出，经过检测器和数据获取与处理系统产生不同色谱峰和色谱数据。因此，它由高压输液系统、进样器、色谱柱、检测器、馏分收集器以及数据获取与处理系统（称为色谱工作站）等六部分组成。

思政：换一种氛围，多事物间的区分更清晰仪器分析

1.高压输液系统高压输液系统包括贮液罐、高压输液泵和梯度洗脱装置等。（1）贮液罐贮液罐是存放流动相或组成流动相的各种溶剂的容器，因此其对流动相必须是化学惰性的，常用的材质为玻璃。容积一般为0.5～2L。为了保持一定的输液静压差，贮液罐放置的位置要高于高压输液泵。

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1.高压输液系统流动相或组成流动相的各种溶剂放入贮液罐前应过滤和脱气。贮液罐在使用过程中应密闭，以防止由于溶剂蒸发引起流动相组成的变化，也可防止空气中的O2、CO2等气体重新溶解于已经脱气的流动相或组成流动相的各种溶剂中。仪器分析

（2）高压输液泵高压输液泵是高效液相色谱仪的重要部件之一，其作用是提供动力，以便在高压下连续不断地输送流动相到色谱柱中，使试样在色谱柱中完成分离，其性能的好坏直接影响高效液相色谱仪的整体性能，因此，输液泵应能提供恒定平稳的输液量。对它的性能要求有：流量稳定，流量精度应为1%左右；耐高压（30～60Mpa/cm2)且输出压力平稳；耐各种流动相。种类有输出压力恒定的恒压泵（液压隔膜泵和气动放大泵），输出流量恒定、无脉动的恒流泵。仪器分析

（3）梯度洗脱装置梯度洗脱装置是指流动相中有2种或2种以上不同溶剂，在分离分析2种以上待测组分时，连续或间断改变流动相中不同溶剂的比例（即流动相的组成），使每个待测组分均有合适的容量因子（k’），并使所有待测组分在最短的分析时间内，以适合的分离度获得圆满地选择性的分离。它的优点是可以提高色谱柱的柱效、缩短分析时间、改善检测器的灵敏度。它常以低压梯度（外梯度）和高压梯度（内梯度）两种方式进行洗脱。仪器分析

2.进样器进样器主要有四种：10Mpa/cm2以下的1～10μL微量注射器进样、停流进样、阀进样和自动进样器。阀进样较常用、较理想、体积可变也可固定，目前大多采用带有定量管的六通进样阀，先用微量注射器将样品在常压下注入样品管内，然后切换六通阀门到进样位置，由高压输液泵输送流动相将样品带入色谱柱内，优点是进样量可变范围大、进样量准确、重现性好、易于自动化，缺点是易造成谱峰柱前扩宽。自动进样器是由计算机自动控制定量阀，按预先编制的进样操作程序工作。它有利于重复操作，实现自动化分析。仪器分析

3.色谱柱色谱柱是高效液相色谱仪的核心部件，由柱管和固定相组成。柱管通常为内壁抛光的不锈钢管，形状几乎全为直形，长为10~30cm，内径为2～5mm。影响色谱柱寿命的因素有：①突然的压力波动以及机械或热冲击；②强吸附性的组分聚集在色谱柱的进口填料上；③键合相的稳定性，流动相的pH和过高的温度都会使键合相流失。仪器分析

4.检测器检测器是高效液相色谱仪的重要部件之一，其作用是将待测组分经色谱柱分离后的溶液浓度转换成光信号或电信号，检测后直接显示出来。它应具备检测效率高、速度高、灵敏度高、重复性好、范围广、噪音低、线性范围宽等特点。常用的检测器有二类，一类是选择性性检测器，另一类是通用检测器。检测器的主要性能指标有灵敏度、最低检出极限、线性范围、噪声和漂移。仪器分析

5.馏分收集器如果所进行的色谱分离不是为了纯粹的色谱分析，而是为了做其它波谱鉴定，或获取少量试验样品的小型制备，馏分收集是必要的，方法有2个：一是手工收集，少数几个馏分，手续麻烦，易出差错；二是馏分收集器收集，比较理想，由计算机操作系统控制，操作准确。

6.数据获取与处理系统数据获取与处理系统的作用是将检测器捕捉的信号转换成色谱数据或色谱图，以供分析之用。目前，通过色谱工作站实现。Contents目1

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高效液相色谱法概述6

高效液相色谱仪构成及作用

检测器的分类

高效液相色谱法的分类

高效液相色谱法的应用

高效液相色谱仪的操作仪器分析

二、高效液相色谱法分类高效液相色谱法的类型与经典液相色谱法相似，按分离机制可分为吸附色谱法、分配色谱法（包括化学键合相色谱法）、离子交换色谱法、离子对色谱法、凝胶色谱法等。

1.化学键合相色谱法化学键合相色谱法（BPC）是以化学键合相为固定相，利用样品组分在化学键合相和流动相中的分配系数不同而得以分离分析的色谱法。它是由液-液分配色谱法发展而来的，固定相和流动相均为液体，且互不相溶。将固定相的官能团通过化学反应共价键合到载体（硅胶）表面的游离羟基上，这种方法制得的固定相称为化学键合固定相，简称键合相。思政：换一种氛围，多事物间的区分更清晰仪器分析

化学键合固定相的特点是化学稳定性好、耐溶剂冲洗、热稳定性好、使用周期长、柱效高、重现性好、可使用的流动相和键合相种类多、分离的选择性高，并且可以通过改变键合有机官能团的类型来改变分离的选择性。根据化学键合固定相与流动相的相对极性强弱，可将化学键合相色谱法分为正相键合相色谱法（NBPC）和反相键合相色谱法（RBPC）。仪器分析

（1）正相键合相色谱法正相键合相色谱法的固定相（如表面具有胺基、腈基、醚键的极性键合相）极性比流动相极性大，流动相一般为非极性的疏水性溶剂（烷烃类如正已烷、环已烷），常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。分离时组分流出的顺序是，极性小的组分先流出柱子，极性大的组分后流出柱子。主要用于分离中等极性和极性较强的化合物（如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等），特别适于分离不同类型的化合物。仪器分析

（2）反相键合相色谱法反相键合相色谱法固定相的极性比流动相极性小，常用十八烷基硅烷键合硅胶作固定相（称为ODS柱)，流动相为水或缓冲液，常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。分离时组分流出的顺序是，极性大的组分先流出柱子，极性小的组分后流出柱子。由于反相键合相色谱法流动相的调整，适用于几乎所有类型化合物，如极性、非极性；水溶性、油溶性；离子型、非离子型；大分子、小分子；具有官能团差别或分子量差别的同系物等。分离分析范围