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文档简介

2025/7/211情境一

细胞传代培养任务二

Hela细胞传代培养过程四

传代

2025/7/211细胞传代培养2025/7/212职业领域癌症及抗癌药物研究榄香烯诱导HeLa细胞凋亡的实验研究.薏苡仁酯诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的实验研究.土贝母皂苷诱导人宫颈癌细胞周期阻滞和细胞凋亡。

科研用基因工程宿主细胞稳定高效表达p21WAF1/CIP1蛋白的Hela细胞株的建立.叶酸-脂质体制备及对HeLa细胞靶向作用2025/7/213细胞培养工掌握细胞生长条件（温度、渗透压、pH、气体环境、营养等）；细胞生长特点和培养方法；细胞复苏和冻存原理。有无菌意识和良好的无菌操作技术；会细胞计数；会细胞原复苏、传代和冻存。职业岗位（工种）岗位知识岗位技能2025/7/214任务与要求掌握细胞生长条件（温度、渗透压、pH、气体环境、营养等）。会高压蒸汽灭菌、紫外灭菌、过滤除菌、干热灭菌及其它细胞培养设备的使用；了解各种培养用液的作用和使用方法。了解Hela细胞的来源、特性和生长特点。了解Hela细胞的应用领域。2025/7/215任务与要求掌握无菌室使用规范；熟悉无菌操作技术；会常规细胞观察；会常用的细胞培养技术。2025/7/216材料1．Hela细胞2．Hanks液，0.25％胰酶，0.02%EDTA，培养基，青、链霉素，5.6%碳酸氢钠、0.4%w/vtrypanblue、75%乙醇、0.85％生理盐水2025/7/217材料3．小三角烧瓶，培养瓶，无菌吸液管（5ml及1m1)，废液缸、载玻片、盖玻片。4.倒置显微镜、计数器、血球计数板、离心机、恒温水浴锅、C02培养箱、超净台、离心管。2025/7/218操作过程2025/7/2191．选生长良好的Hela细胞一瓶，轻摇培养瓶数次，悬浮起附着在细胞表面的上的碎片，连同生长液一起吸出。2025/7/2110加入Hank’s液,洗一次;吸去Hank’s液。2025/7/2111Hanks2025/7/2112胰蛋白酶从无细胞面侧加入0.25％胰蛋白酶液4-5m1，翻转培养瓶，使消化液浸没细胞1min左右。

翻转培养瓶，37℃放置5～10min。2025/7/2113肉眼观察细胞面出现布纹状倒出消化液，沿细胞面加入适量新配制的培养基（含血清），洗下细胞，并用吸管吹打，使细胞分散。DMEM2025/7/2114按1:2或1:3分配传代培养2025/7/211537℃，5%CO2培养接种30min左右贴壁2025/7/2116DMEM48小时换生长液，3-4天可形成单层。2025/7/2117细胞长成单层后即可传代2025/7/2118注意事项

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