2025年分子克隆实验指南试题

分子克隆实验指南试题一、选择题1.在分子克隆实验中，以下哪种酶常用于切割DNA分子？（）[单选题]*A.DNA聚合酶B.RNA聚合酶C.限制性内切酶D.解旋酶E.连接酶答案：C。原因：限制性内切酶能够识别特定的DNA序列并在特定位置切割DNA分子，这是分子克隆中构建重组DNA的关键步骤，而DNA聚合酶主要用于DNA合成，RNA聚合酶用于RNA合成，解旋酶用于解开DNA双螺旋，连接酶用于连接DNA片段。2.分子克隆实验中，载体的功能不包括以下哪项？（）[单选题]*A.携带目的基因进入受体细胞B.提供目的基因表达的调控元件C.自我复制D.直接合成目的基因产物E.便于目的基因的筛选答案：D。原因：载体可以将目的基因带入受体细胞，自身能自我复制且带有调控元件有助于目的基因表达，还便于筛选，但它不能直接合成目的基因产物，目的基因产物是在目的基因在受体细胞中表达后的结果。3.对于分子克隆中感受态细胞的制备，以下说法正确的是？（）[单选题]*A.任何细胞都可直接用于转化无需特殊处理B.感受态细胞是具有稳定细胞壁结构的细胞C.常用化学方法如CaCl₂处理使细胞处于感受态D.感受态细胞制备后可长期保存而不影响转化效率E.感受态细胞只能用于植物细胞的分子克隆实验答案：C。原因：不是任何细胞都能直接用于转化，需要将细胞制备成感受态，感受态细胞的细胞壁通透性增加，常用CaCl₂处理等化学方法，感受态细胞制备后不能长期保存且转化效率会下降，感受态细胞可用于多种生物细胞的分子克隆实验，并非只用于植物细胞。4.在分子克隆实验的目的基因获取方法中，以下哪种方法可以从mRNA获取目的基因？（）[单选题]*A.化学合成法B.从基因组文库中筛选C.反转录法D.直接从细胞中提取DNAE.以上都不是答案：C。原因：反转录法是以mRNA为模板合成cDNA，从而获取目的基因，化学合成法是直接合成DNA，从基因组文库中筛选是从基因组DNA文库获取，直接从细胞中提取DNA不能直接从mRNA获取目的基因。5.分子克隆实验中，筛选阳性克隆常用的方法不包括？（）[单选题]*A.抗生素抗性筛选B.蓝白斑筛选C.荧光标记筛选D.显微镜直接观察筛选E.营养缺陷型筛选答案：D。原因：抗生素抗性筛选利用载体上的抗生素抗性基因筛选含有载体的细胞，蓝白斑筛选基于β-半乳糖苷酶的显色反应筛选重组子，荧光标记筛选通过荧光蛋白标记筛选，营养缺陷型筛选利用受体细胞营养缺陷型来筛选，而显微镜直接观察无法准确筛选出阳性克隆。6.以下哪些是分子克隆实验中常用的载体？（）[多选题]*A.质粒B.噬菌体C.酵母人工染色体D.腺病毒载体E.脂质体答案：ABCD。原因：质粒是最常用的载体，噬菌体可作为载体将外源DNA导入细菌，酵母人工染色体可用于克隆较大的DNA片段，腺病毒载体可用于真核细胞基因转移，而脂质体是一种用于基因传递的载体类似物，但不是分子克隆中的传统载体。7.在分子克隆实验连接目的基因和载体时，以下哪种连接酶最常用？（）[单选题]*A.T4DNA连接酶B.E.coliDNA连接酶C.热稳定DNA连接酶D.末端脱氧核苷酸转移酶E.以上都不是答案：A。原因：T4DNA连接酶可连接粘性末端和平末端，在分子克隆实验中广泛用于连接目的基因和载体，E.coliDNA连接酶连接效率低且对平末端连接能力弱，热稳定DNA连接酶主要用于一些特殊的PCR相关连接，末端脱氧核苷酸转移酶主要用于给DNA加尾，而不是连接目的基因和载体。8.分子克隆实验中，进行DNA琼脂糖凝胶电泳时，溴化乙锭（EB）的作用是？（）[单选题]*A.提供电流B.增加DNA的迁移速度C.与DNA结合并在紫外灯下显色D.中和DNA的电荷E.分解DNA答案：C。原因：溴化乙锭（EB）能够嵌入DNA双链之间，在紫外灯下发出荧光从而显示DNA条带的位置，它不能提供电流、增加DNA迁移速度、中和DNA电荷或分解DNA。9.分子克隆实验中，转化后的细胞需要在什么条件下培养？（）[单选题]*A.与转化前相同的普通培养基B.含有抑制未转化细胞生长物质的选择培养基C.高温高压处理后的培养基D.完全无营养物质的培养基E.只含有碳源的培养基答案：B。原因：转化后的细胞需要在选择培养基中培养，这种培养基含有抑制未转化细胞生长的物质如抗生素等，从而筛选出成功转化的细胞，普通培养基无法进行筛选，高温高压处理后的培养基如果没有选择特性也不行，完全无营养物质和只含碳源的培养基都不利于细胞生长和筛选。10.分子克隆实验中，对于目的基因表达的检测，以下哪种方法可以在转录水平检测？（）[单选题]*A.WesternblotB.酶活性测定C.NorthernblotD.免疫荧光检测E.蛋白质双向电泳答案：C。原因：Northernbl