DB44T 1163-2013 水中菌落总数复合酶底物检测方法

备案号：38763-2013水中菌落总数复合酶底物检测方法2013-08-24发布2013-11-24实施本标准附录A为规范性附录。本标准按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》的要求进行编写。本标准由广东省城镇供水协会提出。本标准由广东省分析测试标准化技术委员会(GD/TC22)归口。本标准主要起草单位：中山市供水有限公司、中山市住房和城乡建设局。本标准主要起草人：凌永平、孙东卫、陈飒、黄静美、陈冬贤、赵丹清、曾银东。本标准为首次发布。菌落总数复合酶底物法是指水样在一定条件下培养生长的细菌群组分解复合酶底物培养基上的物用SimPlate®100mL瓶装无菌培养基。可选购同类商业化产品，贮存于4℃-8℃冰箱中。3.2样品盘：含有84个孔穴。3.4培养箱：36℃±1℃。3.6紫外灯：6W,365nm。采样必须在无菌操作下进行，采样时应直接采集，不得用水样涮洗已灭菌的采样瓶，并避免手指和其他物品对瓶口的沾污。河流、湖泊等地表水可直接用无菌瓶采集。在桥上等地方采样时，可用适工2当的容器(如水桶、直立式采水器或带有坠子的采样瓶)系着绳子投入水中采集。采样后立即贴上标签，每件样品必须标记清楚(如样品名称、来源、数量、采样地点、采样人及采样时间等)。样品应尽快送往实验室，如果路途遥远，可将样品保存在1℃~4℃环境中，并尽量保证样品在8h内检测。如果样品不能在8h内检测，将样品在1℃~4℃保存，并在24h内检测。5.1用无菌水稀释培养基至刻度，摇匀并完全溶解，制成液体培养基。5.2用无菌吸管分别将1mL水样和9mL液体培养基加入到SimPlate样品盘中心，盖上样品盘盖子，轻轻转动样品盘将液体分配到每个孔中，同时用1mL无菌水代替样品作空白对照，若空白对照上检出5.3然后慢慢将盘子竖起90°~120°,将多余的液体吸到样品盘中的海绵上。5.4把样品盘缓慢倒置，放入36℃±1℃培养箱中，培养48h。5.5如怀疑样品结果超过上限值(738MPN/mL),则应以无菌操作方法用无菌水逐级稀释样品，并按5.2-5.4进行操作。6.1将培养48h后的样品盘取出，打开盘盖，置于6W,365nm紫外灯下13cm处观察。观察时佩戴防紫外线的护目镜。样品盘中的84个孔，无论荧光强弱，只要显荧光，即计入结果，但海绵条显荧6.2数出显荧光的孔数，对照表A.1查出孔数对应的每毫升样品中的菌落总数(MPN/mL)。如果样品进行了稀释，读取结果应乘以稀释倍数。结果以每毫升水中所含菌落总数表示(MPN/mL)。用无菌吸管分别将1mL无菌水和9mL液体培养基加入到样品盘中心，盖上样品盘样品盘将液体分配到每个孔中，其他操作步骤同5.3和5.4,结果和报告同6。如无荧光产生则为阴性。可选用市售的菌落总数质控标样，按其标准证书要求进行配制标准样品。操作步骤按5.2-5.4,结(规范性附录)菌落总数MPN检索表表A.1菌落总数MPN检索表(95%置信区间)阳性下限阳性下限0123424681235678946783广东省地方