有机氯农药残留的测定农产品食品检验员79课件

有机氯农药残留的测定主讲教师：王旭峰农产品食品检验员2学习目标掌握食品中有机氯农药残留量测定的原理；了解有机氯农药的特性及危害；掌握有机氯农药残留量测定的操作步骤；能够正确制备各类食品样品；能够熟知有机氯农药残留量测定过程中的注意事项。3一、检测依据目前现行的《食品中有机氯农药残留的测定》采用的国标是GB/T5009.19——2008《食品中有机氯农药多组分残留量的测定》，2008年12月3日发布，2009年3月1日实施。4一、有机氯农药概述有机氯农药（简称Ocp）是一类组成里含有氯的有机杀虫剂、杀菌剂。一般分为两大类：一类是滴滴涕类，称为氯代苯及其衍生物，包括滴滴涕及六六六等；另一类是氯化甲撑萘类，如艾氏剂、狄氏剂、异狄氏剂、七氯、氯丹及毒杀芬等。我国曾经使用较多的是滴滴涕和六六六。滴滴涕、六六六具有广谱、高效、价康、使用方便、中等毒性等优点，从20世纪40年代使用以来，使用量曾达到农药总量的60%~70%。但是其化学性质稳定，在自然界中不易分解，长期使用，会连年积累，致使土壤、水域、农产品中有机农药积累增多。我国已于1983年停止生产。5二、毛细管柱气相色谱法（一）原理试样中有机氯农药组分经有机溶剂提取、凝胶色谱层析净化，用毛细管柱气相色谱分离。电子捕获检测器检测，以保留时间定性，外标法定量。6二、毛细管柱气相色谱法（二）试剂（1）丙酮。分析纯，重蒸。（2）石油醚。沸程30~60℃，分析纯，重蒸。（3）乙酸乙酯。分析纯，重蒸。（4）环已烷。分析纯，重蒸。（5）正已烷。分析纯，重蒸。（6）氯化钠。（7）无水硫酸钠。无水硫酸钠置于干燥箱中，120℃干燥4h，冷却后密闭保存。（8）聚苯乙烯凝胶（Bio-BeadsS-X3）：200~400目，或同类产品。7二、毛细管柱气相色谱法（9）农药标准品。a-六六六、β-六六六、γ-六六六，δ-六六六、p，p'-滴滴伊、p，p'-滴滴滴、o，p'-滴滴涕、p，p'-滴滴涕、六氯苯、五氯硝酸苯、五氯苯胺、五氯苯基硫醚、艾氏剂、狄氏剂、异狄氏剂、异狄氏剂醛、异狄氏剂酮、七氯、环氧七氯、氧氯丹、反氯丹、顺氯丹、α-硫丹、β-硫丹、硫丹硫酸盐、灭蚁灵，纯度>98%。（10）农药标准溶液。分别准确称取或量取上述农药标准品适量，用少量苯溶解后，用正己烷稀释成一定浓度的标准储备溶液。量取标准储备液，用正已烷稀释为系列混合标准溶液。8二、毛细管柱气相色谱法（三）仪器（1）气相色谱仪。配电子捕获检测器（ECD）。（2）凝胶净化柱。长30cm，内径2.3~2.5cm具塞玻璃层析柱，柱底垫少许玻璃棉。用洗脱剂乙酸乙酯-环已烷（1+1）浸泡的凝胶，以湿法装入柱中，柱床高约26cm，凝胶始终保持在洗脱剂中。（3）全自动凝胶色谱系统。带有固定波长（254nm）紫外检测器。供选择使用。（4）旋转蒸发仪。（5）组织匀浆器。（6）振荡器。（7）氮气浓缩器。9二、毛细管柱气相色谱法（四）测定步骤1.试样制备蛋品去壳，制成匀浆；肉品去筋后，切成小块，制成肉糜；乳品混匀待用。2.提取与分配（1）蛋类：称取试样20g(精确到0.01g)于200mL具塞三角瓶中，加水5mL(视试样水分含量加水，使总水量约为20g。通常鲜蛋水分含量约75%，加水5mL即可)再加入40mL丙酮，振摇30min后，加入氯化钠6g，充分摇匀，再加入30mL石油醚，振摇30min。10二、毛细管柱气相色谱法（1）蛋类：静置分层后，将有机相全部转移至100mL具塞三角瓶中经无水硫酸钠干燥，并量取35mL于旋转蒸发瓶中，浓缩至约1mL，加入2mL乙酸乙酯-环已烷(1+1)溶液再浓缩，如此重复3次，浓缩至约1mL供凝胶色谱层析净化使用，或将浓缩液转移至全自动凝胶渗透色谱系统配套的进样试管中，用乙酸乙酯-环己烷(1+1)溶液洗涤旋转蒸发瓶数次，将洗涤液合并至试管中，定容至10mL。11二、毛细管柱气相色谱法2.提取与分配（2）肉类：称取试样20g(精确到0.01g)，加水15mL(视试样水分含量加水，使总水量约20g)。加40mL丙酮，振摇30min，以下按照蛋类试样的提取、分配步骤处理。（3）乳类：称取试样20g(精确到0.01g)，鲜乳不需加水，直接加丙酮提取。以下按照蛋类试样的提取、分配步骤处理。12二、毛细管柱气相色谱法2.提取与分配（4）大豆油样品：称取具有代表性试样1g（精确至0.01g），直接加入30mL石油醚，振摇30min后，将有机相全部转移至旋转蒸发瓶中，浓缩至约1mL，加2mL乙酸乙酯-环己烷（1+1）溶解再浓缩，如此重复3次，浓缩至约1mL，供凝胶色谱层析净化用。或将浓缩液转移至全自动凝胶色谱系统配套的进样试管中，用乙酸乙酯-环己烷（1+1）溶液洗涤蒸发瓶数次，将洗涤液合并至试管中，定容至10mL。13二、毛细管柱气相色谱法2.提取与分配（5）植物类：称取试样匀浆20g，加水5mL(视其水分含量加水，使总水量约20mL)，加丙酮40mL，振荡30min，加氯化钠6g，摇匀。加石油醚30mL，再振荡30min，以下按照蛋类试样的提取、分配步骤处理。14二、毛细管柱气相色谱法3.净化选择下列手动或全自动净化方法中的任何一种。（1）手动凝胶色谱柱净化。将试样浓缩液经凝胶柱以乙酸乙酯-环己烷（1+1）溶液洗脱，弃去0~35mL流分，收集35~70mL流分。将其用旋转蒸发器浓缩至1mL，再用凝胶柱以乙酸乙酯-环已烷（1+1）溶液洗脱，收集35~70mL流分。蒸发浓缩后，再用氮气吹除溶剂，用正已烷定容至1mL，供气相色谱分析用。15二、毛细管柱气相色谱法3.净化（2）全自动凝胶渗透色谱系统净化。试样由5mL试样环注入凝胶渗透色谱柱，泵流速5.0mL/min，以乙酸乙酯-环己烷（1+1）溶液洗脱，弃去0~7.5mL流分，收集7.5~15mL流分，15~20min冲洗凝胶渗透色谱柱，净收集的流分旋转蒸发浓缩至约1mL，再用氮气吹除溶剂，用正己烷定容至1mL，供气相色谱分析用。16二、毛细管柱气相色谱法

17二、毛细管柱气相色谱法4.测定（2）色谱分析。分别吸取1μL混合标准溶液及试样净化液注入气相色谱仪分离分析，记录色谱图，以保留时间定性，以试样和标准的峰高或峰面积比较定量。18二、毛细管柱气相色谱法

19三、填充柱气相色谱法（一）原理样品中六六六、滴滴涕经提取、净化后用气相色谱法测定，与标准比较定量。电子捕获检测器对于负电极强的化合物具有较高的灵敏度，利用这一特点，可分别测出微量的六六六和滴滴涕。不同异构体和代谢物可同时分别测定。20三、填充柱气相色谱法（二）试剂使用的试剂一般系分析纯，有机溶剂需经重蒸馏。（1）丙酮。（2）正已烷（3）石油醚。沸程30~60℃。（4）苯。（5）硫酸。（6）无水硫酸钠。（7）硫酸钠溶液（20g/L）。21三、填充柱气相色谱法

（8）六六六、滴滴涕标准储备溶液。准确称取甲、乙、丙、丁六六六四种异构体和p，p'-滴滴涕、p，p'-滴滴滴、p，p'-滴滴伊、o，p'-滴滴涕、（a-HCH、β-HCh、γ-HCH、δ-HCH、p，p'-DDT、p，p'-DDD、p，p'-DDE、o，p'-DDT）各10.0mg，溶于苯，分别移入100mL容量瓶中，加苯至刻度，混匀，每毫升含农药100.0μg，作为储备液存于冰箱中。

（9）六六六、滴滴涕标准使用液：分别量取上述标准储备液于同一容量瓶，以己烷稀释至适宜浓度，α-HCH、γ-HCH、δ-HCH的浓度为0.005μg/mL；β-HCH、p，p'-DDE的浓度为0.01μg/mL，o，p'-DDT浓度为0.05μg/mL，p，p'-DDD的浓度为0.02μg/mL、p，p'-DDT的浓度为0.1μg/mL。22三、填充柱气相色谱法（三）仪器（1）小型粉碎机。（2）匀浆机。可采用组织捣碎机。（3）电动振荡器。（4）离心机。（5）旋转浓缩蒸发器。（6）吹氮浓缩器。（7）气相色谱仪，具有电子捕获检测器（ECD）。23三、填充柱气相色谱法（四）测定步骤1.试样制备谷物制成粉末，其制品制成匀浆；食用油混匀后，待用。2.提取（1）称取具有代表性的样品匀浆20g，加水5mL（视水分含量加水，使总水量约20mL），加丙酮40mL，振荡30min，加氧化钠6g，摇匀。加石油醚30mL，再振荡30min，静置分层。取上清液35mL经无水硫酸钠脱水，于旋转蒸发器中浓缩至近干，以石油醚定容至5mL，加浓硫酸0.5mL，振摇0.5min，3000转离心15min，取上清液进行GC分析。24三、填充柱气相色谱法2.提取（2）称取具有代表性的粉末样品2.00g，加石油醚20mL，振荡30min，过滤，浓缩，定容至5mL，加浓硫酸0.5mL，振摇0.5min，3000转离心15min，取上清液进行GC分析。（3）称取具有代表性的均匀食用油样品0.50g，以石油醚溶解于10mL试管中定容至10.0mL，加浓硫酸1.0mL，振摇0.5min，3000转离心15min，取上清液进行GC分析。25三、填充柱气相色谱法3.气相色谱参考条件（1）色谱柱。内径3mm，长2m的玻璃柱，内装涂以1.5%OV-17和2%QF-1的混合固定液的80~100目硅藻土。（2）检测器。电子捕获检测器。汽化室温度：195℃；色谱柱温度：185℃；检测器温度：225℃。载气（氮气）流速：110mL/min。4.测定标准使用液及样品提取净化溶液的进样量为1~10μL，外标法定量。26三、填充柱气相色谱法

27三、填充柱气相色谱法结果的表述：报告平行测定的算术平均值的二位有效数。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差不得超过算术平均值的15%（即相对相差≤15%）。28三、填充柱气相色谱法（六）说明（1）有机氯农药为弱极性物质，因而提取选用弱极性溶剂——石油醚提取。此外，提取溶剂的沸点以45~80℃为宜，因为沸点太低，容易挥发，而沸点太高，则不易浓缩。在选择提取剂时，还要考虑溶剂的稳定性，即溶剂不能与样品发生作用，提取溶剂还不能含氯。29三、填充柱气相色谱法（2）磺化法是在提取液中，直接加入1/10量的浓硫酸，振摇后，其中油脂、色素等干扰物质，遇到浓硫酸就磺化为极性较大且易溶于水的化合物。利用这一反应，使提取液中主要干扰物质油脂、色素磺化后，与有机层分离而除去。磺化法主要用于对酸稳定性的滴滴涕、六六六等有机氯农药。它具有操作简便，不受任何影响的优点。此外，也可采用柱层析、液-液分配等操作净化，但这类净化步骤繁琐、有机溶剂用量大，农药也容易损失。30三、填充柱气相色谱法（3）采用离心法分离石油醚提取液较原有方法所采用的液液分配法，分离更彻底，能有效地消除水溶性杂质对测定的影响，保护色谱柱和检测器。原有的国家标准采用的在分液漏斗中进行液液分配，需要较长时间的静置分层。（4）有机氯农药易挥发，故挥干溶剂时温度勿高于60℃，最好50℃减压挥干。干后不能久置，应立即加入溶剂，否则回收率将降低。减压浓缩时，千万注意不要蒸至全干，如蒸至全干，结果偏低。31三、填充柱气相色谱法（5）样品经净化、浓缩、定容之后，不能含有水分，以免污染电子捕获检测器，降低灵敏度。若样品净化不干净或试剂有问题（必要时所用试剂要重蒸处理）时，检测器易受污染，其灵敏度即会降低，此时基流会明显下降，若用标准曲线法定量，此时应缓慢进行，让检测器自净片刻，基流回复原来水平后再进行，否则结果偏低（若用内标