T-SSESB 13-2025 基于环境DNA技术的水生入侵物种RPA快速检测方法

RPArapiddetectionmetho2025-04-25发布2025-04-25实施i 4 4 4 4 4 4 专利名称：基于RPA技术现场检测巴西龟的引物探专利名称：基于RPA技术现场检测齐氏罗非鱼的引物探针组合、试剂盒及专利名称：基于RPA技术现场检测食蚊鱼的引物探专利名称：塔玛亚历山大藻RPA检测试剂盒和RPA-LFD检测系统及检测方法本文件的发布机构对于该专利的真实性、有效性和人已向本文件的发布机构承诺，他愿意同任何申请人在合下，就专利授权许可进行谈判。该专利持有人的声明已在本文请注意，除上述专利外，本文件的某些内容仍可能涉及专本文件主要起草单位：上海海洋大学、上海市环境科学研院东海水产研究所、中国海洋大学、江西省水产科学研究究中心、江西省渔业资源生态环境监测中心）、上海之江东方国际集团上海环境科技有限公司、挪亚检测技术有限1基于环境DNA技术的水生入侵物种RPA快速检测方法本文件规定了利用环境DNA结合RPA技术检测外来入侵水生生物红耳彩龟zillii）和塔玛亚历山大藻（Alexandriumtamarense）的技术方本文件适用于湖泊、水库、河流、河口、海洋、海洋牧GB/T20201.1《标准化工作导则第GB/T603-2023化学试剂试验方法中所GB/T34797-2017核酸DB32/T4539-2023淡水生物环境DNA监HJ624-2011外来物种环境风险评估技SF/ZJD0105008-2018指存在于环境介质(水、土壤、沉积物、生物膜、空气等)或混合生物组织中的生物遗传物质(DNA)，包括但不限于生物体脱落的细胞、组织、分泌物、排泄物或2外来入侵水生生物invasivealienaquati影响生态环境，损害农林牧渔业可持续和生物多一种基于毛细作用驱动和固相免疫层析反应物，经侧流层析迁移至检测线（T线）时，生物素与固定化抗体结合显红色条带；剩余复合物于质控线（C线）被抗FAM抗体捕获，验证检测有效性。该技术通过恒3食蚊鱼（Gambusiaaffinis）、齐氏罗非鱼（Coptodonzillii）和塔玛亚历山大藻检测对象名称引物位置序列引物1上游引物5,-GCCCCTATCAATCAATTTAACCACGTAGCAT-3,6下游引物5,-TGTATGTTATTCGTTTGGATTTTAGTGGAGTTTCA-3,探针5,-6-FAM-TATTGTCCTAGTTCAATGATGGCTACTGTT/dSpacer/TAAAATTAACCCACAA-C3Spacer-3,引物2上游引物5,-CGACAAATTCTTTAAATACCTACTAATCTTCC-3,ND5下游引物5,-TTTAATGAGTTTGTTTTTGAAATGAGTCAGACC-3,探针5,-6-FAM-GATGGTGACGCGGCCGAGAAGATACACTCG/dSpacer/CATCAGCCTTAATAGC-C3Spacer-3,鱼引物1上游引物5,-TGAAGCTACGAATACACAGACTATGAAGACTTAAA-3,下游引物5,-GTCCTGGCACTGCGTCTATTTTGATTCCGAGGGAG-3,探针5,-6-FAM-TTCGACTCATATATAGTCCCCACCCAAGAA/dSpacer/CTCACCCCTGGCCAAT-C3Spacer-3,引物2上游引物5,-AACTATTCTTTGACCGGACTCTGCCCCCCTAAAGG-3,tRNA-Thr下游引物5,-AATGAGAGTTATGATAGGACAATTCAATTTCGTCA-3,探针5,-6-FAM-TAAAATAGTGTATCCCTACATTAATGAAAT/dSpacer/TTCAAAATTGTAGGA-C3Spacer-3,鱼引物1上游引物5,-CCTACTTGTACAAAGAAACATGAAACATTGGGGTG-3,下游引物5,-TGCGTTATCTACAGAGAAGCCCCCTCAGATTCACT-3,探针5,-6-FAM-CATCTCCACAGCCTTCTCCTCCGTGGCCCAT/dSpacer/ATCTGCCGAGATGTA-C3Spacer-3,藻引物1上游引物5,-TGTTGTGAACAATAAAGGTCAATGTTTTGCATTG-3,下游引物5,-ATTCAGCAGGTTTATGTGCTTCACTTCACG-3,探针5,6-FAM-CGTGGGGCAGACCTGTTTCGTCATTTGATGTTGATATTTGTAAAT-C3Spacer-3,b)Chelex-100树脂（10b)便携式离心机：0-2500rpm。推荐采用0.45μm混合纤维素酯膜真空抽滤≥500mL水样，同步设置阴性对照5生物废弃物在处理之前应采用高压灭菌、消毒或灼烧等方式7食蚊鱼扩增靶标参考序列（GenBank：NC00食蚊鱼扩增靶标参考序列（GenBank：NC00AACTATTCTTTGACCGGACTCTGCCCCCCTAAAGGACATGTATGTATTATCCCCTATTTTAACCATTTAAAATAGTGTATCCCTACATTAATGAAATTTCAAAATTGTATAATAACATTAAACATATCAAATAATCAATAAGGTAGACAAAAACCACTACCAACACTCCTGTAAATAACATGACGAAATTGAATTGTCCTATCAT齐氏罗非鱼扩增靶标参考序列（GenBan塔玛亚历山大藻扩增靶标参考序列（GenBank：JX173TGTTGTGAACAATAAAGGTC