小肠平滑肌生理特性的观察与分析

实验一

小肠平滑肌生理特性的观察与分

讨论一、实验目的1.学习哺乳动物离体肠标本制备及灌流方法。2.观察消化道平滑肌的一般生理特性及某些因素对舒缩活动的影响。二、实验原理

消化道平滑肌和骨骼肌、心肌一样，也具有兴奋性、传导性和收缩性，有些也具有自律性。相比之下消化道平滑肌的兴奋性低，收缩慢，伸展性大，具有紧张性收缩，对化学物质、温度变化及牵张刺激较敏感等特性。小肠离体后，置于适宜的溶液中，观察其收缩活动及环境变化的影响，观察分析上述生理特性。三、实验材料1、实验动物：家兔2、器械、药品：电热恒温水浴锅、浴槽、张力换能器(量程为25g以下)、BL-410生物记录系统、L型通气管、道氏袋、注射器、培养皿、温度计、烧杯、螺丝夹、三维调节器、台氏液、0.01%去甲肾上腺素、0.01%乙酰胆碱、1mol/LNaOH溶液、lmol/LHCl溶液、2%CaCl2溶液。四、实验方法和步骤

1、标本制备流程

2、仪器安装及调试

3、观察项目现象及解释1、标本制备流程：①击昏家兔→②剖开腹腔快速取出肠管→③制作离体肠标本①击昏家兔：用木槌猛击兔头枕部，使其昏迷。②剖开腹腔快速取出肠管：立即剖开腹腔，找出胃幽门与十二指肠交界处，快速取长20~30cm的肠管，先将与该肠管相连的肠系膜沿肠缘剪去，置于供氧台氏液中轻轻漂洗，把肠内容物基本洗净。③制作离体肠标本：将肠管分成数段，每段长2-3cm，两端各系一条线，保存于供氧的38℃左右的台氏液中2、仪器安装与调试

实验安装（如图）：恒温水浴锅控制加热，恒温工作点定在38℃。将充满氧气的道氏袋与通气钩相连接，将肠段一端系在通气管钩上，另一端与张力换能器相连。控制通气量，使氧气从通气管前端呈单个而不是成串逸出。仪器调试：BL-410系统的使用，选择“实验项目”中的“消化实验”选中“消化道平滑肌生理特性”。相关参数设置的参考值：时间常数t→DC，高频滤波F→30Hz，显速→4.00s/div，增益→100g。用鼠标左键单击工具条上的“开始”观察项目现象及1．待标本稳定后，记录小肠平滑肌收缩的对照曲线。2．乙酰胆碱的作用

用滴管吸入0.01%乙酰胆碱向灌流浴槽内滴1~2滴。观察到明显效应后，立即从排水管放出浴槽内含乙酰胆碱的台氏液，加入新鲜温台氏液，由此反复3次，以洗涤或稀释残留的乙酰胆碱，使之达到无效浓度，待小肠运动恢复后进行下一项。3．肾上腺素的作用按上述方法将0.01%肾上腺素加入浴槽内1~2滴，观察小肠运动的反应。当效果明显后，立即更换台氏液。4．氯化钙的作用加2%CaC12溶液2~3滴入灌流浴槽内，观察其反应，效果明显后迅速冲洗。5．盐酸的作用加1~2滴1mol/LHCl溶液入浴槽内，观察其反应。6．氢氧化钠的作用在(5)基础上加等容量的1mol/LNaOH溶液入浴槽内，观察其反应。按上述方法更换台氏液，反复冲洗。5、在浴槽中加入1mol/L盐酸溶液2滴后，离体肠管活动减弱，描记曲线出现收缩幅度降低，频率变慢。出现这一现象，目前认为其原因在于：①细胞外H+升高时，Ca2+通道的活性受到抑制，使得Ca2+内流减少。②H+升高能干扰肌肉的代谢和肌丝滑行的生化过程：H+能与Ca2+竞争钙调蛋白的结合位点而使肌球蛋白ATP酶活性降低（近期有理论认为是直接抑制作用而非竞争作用）；使肌原纤维对Ca2+的敏感性和Ca2+从肌质网的释放量减少。6、在加盐酸使平滑肌收缩减弱的基础上，再加2滴NaOH于浴槽中，则肠管活动出现相反的情况，即肠管活动增强。原因在于NaOH可以中和H+，改变了细胞外液的PH值，PH过高、过低，收缩幅度及张力都会降低，最适PH时收缩效果最好。7、浸浴小肠肠管的台氏液温度以38℃~40℃为宜，低于或高于这个温度，都会影响结果。因为肠管平滑肌对温度改变极为敏感，当温度降到30℃以下时，由于代谢水平的降低，兴奋性减弱，可出现收缩曲线基线下移，频率变慢，收缩幅度变小。有时可能会见到基线先上移后下降的现象。这是因为降温本身对肠管是一种刺激，也可短暂地加强代谢活动，所以肌张力升高。当温