（高清版）DB42∕T 1993.1-2023 《奶牛粪污中药物残留的测定高效液相色谱法 第1部分：5种磺胺类药物》

DB42湖北省市场监督管理局发布I V 2 2 2 3 3 5本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件起草单位：武汉市农业科学院、宜昌市夷陵区动物疫病预防控V——第2部分：4种四环素类药物。目的在于规范湖北省奶牛粪污中药物残留的测定高效液相色谱法本文件规定了奶牛粪污中5种磺胺类药物残留测定的原理、试剂材料、仪器设备、试样制备、测定步骤、结果计算和检测方法的灵敏度、准确度和精密度。本文件适用于奶牛粪污中5种磺胺类药物残留的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T25169畜禽粪便监测技术规范3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。奶牛粪污excrementandsewageofdairycows奶牛排泄的粪便、尿液的混合物。试样中磺胺类药物残留，用乙腈提取，0.1mol/L盐酸溶液进行溶剂置换，正己烷除脂，MCX固相萃取柱净化，高效液相色谱-紫外法测定，外标法定量。5试剂和材料5.2乙腈：色谱纯。5.3甲醇：色谱纯。5.4盐酸：分析纯。5.5氨水：分析纯5.6正己烷：分析纯。5.7氯化钠：分析纯。5.8乙酸：分析纯。5.92%氨水甲醇洗脱液：取氨水(5.5)2mL,用甲醇(5.3)溶解并稀释至100mL。5.100.1mol/L盐酸溶液：取盐酸(5.4)0.83mL,用水溶液并稀释至100mL。5.110.3%乙酸溶液：取乙酸(5.8)0.3mL,用水溶解并稀释至100mL。工25.120.3%乙酸-乙腈溶液：取0.3%乙酸(5.11)85mL,用乙腈(5.2)溶解并稀释至100mL。5.13磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺5.14100mg/L磺胺类药物单标储备液：分别精密称取5种磺胺类药物标准品(5.13)各0.01000g,用乙腈(5.2)溶解并稀释定容至100mL,配制成浓度为100mg/L的磺胺类药物单标储备液。置于冰箱-20℃避光保存，保质期6个月。5.1510mg/L磺胺类药物混合标准工作液：精密量取各单标储备液(5.14)10mL,用乙腈(5.2)稀释并定容至100mL,配制成浓度为10mg/L的磺胺类药物混合标准工作液，用时现配。5.16MCX固相萃取柱：60mg/3mL,或者性能相当者。6.1高效液相色谱仪：配紫外检测称取试样5.00g于50mL的离心管中，加水10mL,乙腈10mL,涡旋振荡5min,超声15min,加入3.0g氯化钠，涡旋振荡5min,4500r/min离心5min,取上清液于50mL离心管中，再重复提取一次，合并上清液，35℃旋转蒸发近干，用5mL0.1mol/L盐酸溶液溶解残渣，加入6mL正己烷去脂，取盐酸层，通过活化的MCX固相萃取柱，待过完柱子后，依次用3mL0.1mol/L盐酸水溶液、3mL水和3mL甲醇冲洗于40℃下氮气吹干，用0.3%乙酸-乙腈混合溶液(85:15,V/V)定容至1mL,过0.22μm滤膜，高效液相色38.3测定8.3.1液相色谱参考条件8.3.1.1色谱柱：Ci₈柱(250mm×4.6mm,5μm),或者性能相当者。8.3.1.2流动相：0.3%乙酸和乙腈，梯度洗脱，洗脱条件见表1。8.3.1.3流速：1.0mL/min。8.3.1.4柱温：30℃。表1梯度洗脱程序时间(min)0.3%乙酸(%)乙腈(%)08.3.2标准曲线的绘制精密量取10mg/L磺胺类药物混合标准工作液适量，用0.3%乙酸乙腈溶液稀释，配制成浓度为0、10、50、100、250、500、1000、2000、5000ng/mL的系列混合标准溶液，供高效液相色谱测定。以测得峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。8.3.3测定将混合标准工作溶液和试样溶液依次注入液相色谱仪中，以工作溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，依据标准曲线计算浓度。标准溶液和试样溶液中磺胺类药物响应值应在仪器检测的线性范围内。在上述色谱条件下，标准溶液和试样溶液的高效液相色谱图见附录A。8.4空白试验除不加试样外，按以上步骤同时进行空白试验。9结果计算和表述结果按式(1)计算：式中：X——试样中被测组分残留量，单位为微克每千克(μg/kg);c——从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL);V——试样溶液定容体积，单位为毫升(mL);m——试样溶液所代表试样的质量，单位为克(g)。10检测方法灵敏度、准确度和精密度45(资料性)5种磺胺类药物液相色谱图图A.1给出了5种磺胺类药物标准物质液相色谱图。磺胺间甲氧嘧啶磺胺间甲氧嘧啶05图A.15种磺胺类药物标准物质液相色谱图(1000ng/mL)图A.2给出了空白样品中5种