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T/NAIA0258-Technicalregulationsfordiagnosis,preventionandcontrolofBovinecoronavirusdisease2023-12-18发 2023-12-31实宁夏化学分析测试协 发T/NAIA0258-T/NAIA0258-GB/T1.1-20201部分：标准化文件的结构和起草规则》的规GB/T6682GB/T16568NY/T5030NY5047NY/T5049Bovine7～10虚弱、体温低，少数犊牛出现发热、卧地不起等症状，严重的犊牛会出现昏迷甚至死亡。成年牛常突然暴发，排出深褐色带血稀粪，伴有产奶下降、沉郁及厌食等症状。3mLPBS采样管中；也可无菌采集地上刚排出对于粪便样品，放入盛有3mLPBS管中，充分振荡，12000r/min4℃离心5min～8min，1g5mLPBS，混匀，8000r/min4℃离心5min，取上清备用。将上清于0.22µm滤器过滤，-80℃冰箱保存或直接接种细胞。RNA5.3.1RNA利用反转录试剂进行反转录（A.1,A.2）RPARPA方法进行病原核酸检测，BRV引物序列（A.3）RPA扩增℃20minRPA144bp大小的条带，且阴性对照不出现条带（B.1）。4.1、4.24.3可判定为牛冠状病毒病疑似病例。符合5.3.4加强饲养管理，保持卫生清洁。按照GB/T16568和NY/T5049初生犊牛及时哺喂初乳。犊牛出生后1hNY5047NY/T50305%100mL～200mL。附录表 反转录反应体RNase-free105×All-in-oneQrt4Enzyme15表 反转录反应程5015855表 轮状病毒基础RPA引物序列信引物序列片段大小BCoV-表 RPA反应体BRV-F1（101.2BRV-R1（101.2Rehydration14.7515.61.25附录

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