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T/NAIA0263-Technicalregulationsfordiagnosis,preventionandtreatmentofbovineendometritis2023-12-18发 2023-12-31实宁夏化学分析测试协 发T/NAIA0263-T/NAIA0263-GB/T1.1-20201部分：标准化文件的结构和起草规则》的规GB/T6682GB/T14926.42GB/T14926.43GB/T39759NY/T3234PCRBovineendometritis性或淋巴源性感染)道，至少停留30s以上，对侧面、腹面和背面阴道壁至宫颈口进行触诊，退出时对阴道内的性状和B1～2mL，立即注入备好的无菌瓶内，封盖，标记，冷藏保存。如果24h内不能送达实验室，-20℃PCR 附录（资料性mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min，倾入无菌平皿，4℃保存。蛋白胨20.0g，牛胆盐5.0g，氯化钠5.0g，琼脂14.0g，乳糖10.0g，中性红0.03g，加入溶液，摇匀，115℃灭菌20min，待冷至50～55℃时倾注平皿。凝固后置4C冰箱保存，一周内使用。KF蛋白胨10.0g，酵母粉10.0g，甘油磷酸钠10.0g，氯化钠5.0g，麦芽糖20.0g，乳糖1.0g，叠氮钠0.4g，琼脂13.0g，溴甲酚紫0.015g，加热溶解于1000mL蒸馏水中，121℃高压15min，冷却至50～60℃时，加入无菌1%TTC溶液10mL，混匀，倾入无菌平皿，备用。MHA牛肉粉6.0g，可溶性淀粉1.5g，酸水解蛋白17.5g，琼脂17.0g，称取本品加热溶解于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min，待冷至50℃，倾入无菌平皿，备用。附录（资料性PCR取4.7.2培养物2mL，12000r/min10min，用细菌基因组DNA提取试剂盒对沉淀物进行基16SF5，-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-316SR5，-ACGGCTACCTTGTTACGACTT-350μL反应条件如下：PCR反应体系为50μL体系：模板2μL，27F、1492R各1μL（20μmol/L），2×TaqPCRMix25μL，ddH2O21μL；16SrRNAPCR反应条件为：95℃预变性5min，94℃变性50s，57℃退火1min，72℃延伸90s，30个循环，72℃终延伸10min，4℃结束反应

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