NM23、KI67基因表达与食管癌临床特征及预后的关联探究

NM23、KI67基因表达与食管癌临床特征及预后的关联探究一、引言1.1研究背景与意义食管癌作为全球范围内常见的消化道恶性肿瘤之一，严重威胁着人类的健康。据世界卫生组织国际癌症研究机构（IARC）发布的2020年全球癌症负担数据显示，食管癌的新发病例数达60.4万，死亡病例数为54.4万，分别位居全球恶性肿瘤发病和死亡的第7位和第6位。在我国，食管癌同样是高发的恶性肿瘤，每年新发病例约32.4万，死亡病例约30.2万，严重影响患者的生活质量和生存预期。其发病与多种因素相关，如饮食习惯（喜食烫食、腌制食物等）、遗传因素、慢性炎症刺激等。早期食管癌患者症状常不明显，多数患者确诊时已处于中晚期，失去了最佳手术时机，导致预后较差。肿瘤的发生、发展是一个多基因参与、多步骤调控的复杂过程。在众多与肿瘤相关的基因中，NM23和KI67基因备受关注。NM23基因被认为是一种重要的肿瘤转移抑制基因，其编码的蛋白具有多种生物学功能，如参与信号传导、调节细胞增殖和分化等。研究表明，NM23基因表达水平的降低与多种肿瘤的转移和不良预后密切相关。在乳腺癌中，NM23低表达的患者更容易出现淋巴结转移和远处转移，生存期明显缩短。而KI67基因则是一种细胞增殖相关的核抗原，其表达水平直接反映了细胞的增殖活性。在细胞周期的G1、S、G2和M期均有表达，且在增殖活跃的细胞中表达显著升高。大量研究证实，KI67高表达与肿瘤的恶性程度、侵袭转移能力及不良预后呈正相关。在结直肠癌中，KI67高表达的患者肿瘤侵袭性更强，复发率更高，5年生存率更低。深入研究NM23和KI67基因在食管癌中的表达情况，对于揭示食管癌的发病机制、评估肿瘤的恶性程度和预后具有重要意义。通过检测这两个基因的表达水平，可以为食管癌的早期诊断提供更精准的分子标志物，有助于提高早期诊断率，实现早发现、早治疗。在临床治疗方面，这两个基因的表达情况可以为治疗方案的选择提供重要参考依据。对于NM23低表达、KI67高表达的患者，提示肿瘤具有较高的转移风险和增殖活性，可能需要更积极的综合治疗，如术前新辅助化疗、术后辅助放疗等，以降低肿瘤复发和转移的风险，提高患者的生存率。此外，对这两个基因的研究还有助于开发新的治疗靶点和药物，为食管癌的精准治疗开辟新的途径。1.2国内外研究现状在国外，食管癌的研究一直是肿瘤领域的重点。欧美国家由于其饮食结构和生活习惯的差异，食管癌的病理类型以腺癌为主，相关研究多围绕腺癌的发病机制、分子生物学特征以及靶向治疗等方面展开。美国癌症协会（ACS）的研究数据显示，近年来美国食管癌的发病率呈上升趋势，尤其是食管腺癌，其发病率的增长与肥胖、胃食管反流病等因素密切相关。在分子生物学研究方面，国外学者对食管癌相关基因的研究较为深入。通过全基因组测序和转录组分析等技术手段，发现了多个与食管癌发生、发展相关的基因和信号通路。例如，在食管腺癌中，ERBB2基因的扩增和过表达较为常见，这为靶向治疗提供了重要的靶点。对于NM23基因，国外的研究起步较早。早在20世纪80年代，就有学者发现NM23基因在肿瘤转移过程中发挥着重要作用。通过对多种肿瘤细胞系的研究，证实了NM23基因表达水平的降低与肿瘤细胞的转移潜能增强相关。在乳腺癌、结直肠癌等肿瘤中，NM23基因已被广泛研究，并作为评估肿瘤预后和转移风险的重要指标。然而，在食管癌中的研究相对较少，且研究结果存在一定的差异。部分研究表明，NM23基因在食管癌组织中的低表达与肿瘤的淋巴结转移和远处转移密切相关，提示其可能作为预测食管癌转移和预后的分子标志物。但也有研究认为，NM23基因在食管癌中的表达与肿瘤的临床病理特征并无明显关联，这可能与研究样本的差异、检测方法的不同以及肿瘤的异质性等因素有关。在KI67基因的研究上，国外已有大量研究证实其在多种肿瘤中的重要作用。在肺癌、前列腺癌等肿瘤中，KI67基因的高表达与肿瘤的恶性程度、侵袭转移能力以及不良预后密切相关。通过对肿瘤组织中KI67蛋白表达水平的检测，可以评估肿瘤细胞的增殖活性，为临床治疗和预后判断提供重要依据。在食管癌中，KI67基因同样受到了广泛关注。研究发现，KI67高表达的食管癌患者肿瘤侵袭性更强，更容易发生淋巴结转移和远处转移，5年生存率明显低于KI67低表达的患者。这表明KI67基因可以作为评估食管癌预后的重要指标之一。国内对食管癌的研究也取得了丰硕的成果。我国是食管癌的高发国家，食管鳞癌占绝大多数，因此国内的研究主要集中在食管鳞癌的发病机制、早期诊断和综合治疗等方面。通过对大量食管癌患者的临床资料分析和基础研究，发现了我国食管癌的一些独特的发病因素和临床特点。例如，我国食管癌的发病与饮食习惯（如喜食烫食、腌制食物等）、遗传因素以及某些病毒感染（如人乳头瘤病毒感染）等密切相关。在临床治疗方面，国内开展了多项大规模的临床试验，探索食管癌的最佳治疗方案，包括手术、放疗、化疗以及综合治疗等。目前，我国在食管癌的综合治疗方面已经达到了国际先进水平，显著提高了患者的生存率和生活质量。在NM23基因的研究中，国内学者也进行了大量的工作。通过免疫组化、实时荧光定量PCR等技术方法，对NM23基因在食管癌组织中的表达情况进行了检测，并分析了其与临床病理特征和预后的关系。研究结果表明，NM23基因在食管癌组织中的低表达与肿瘤的分化程度、淋巴结转移和远处转移密切相关，提示其可能作为评估食管癌恶性程度和预后的重要指标。同时，部分研究还探讨了NM23基因的作用机制，发现其可能通过调控肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭和转移等生物学行为，发挥抑制肿瘤转移的作用。对于KI67基因，国内的研究也表明其在食管癌的发生、发展过程中起着重要作用。通过对食管癌组织中KI67蛋白表达水平的检测，发现其与肿瘤的大小、分化程度、淋巴结转移以及临床分期等密切相关。KI67高表达的食管癌患者预后较差，生存时间明显缩短。此外，国内的一些研究还将KI67基因与其他肿瘤标志物联合检测，以提高食管癌诊断和预后评估的准确性。尽管国内外在食管癌以及NM23和KI67基因的研究方面取得了一定的进展，但仍存在一些不足之处。目前对于食管癌的发病机制尚未完全明确，尤其是在基因调控网络和信号通路方面，仍有许多未知的领域需要进一步探索。在NM23和KI67基因的研究中，虽然已经证实了它们与食管癌的临床病理特征和预后存在一定的关联，但对于其具体的作用机制和调控靶点还需要深入研究。此外，不同研究之间的结果存在一定的差异，这可能与研究样本的选择、检测方法的标准化以及肿瘤的异质性等因素有关。因此，需要开展更多大样本、多中心的研究，以进一步明确NM23和KI67基因在食管癌中的作用和价值，并为食管癌的精准诊断和治疗提供更有力的理论依据和技术支持。1.3研究目的与方法本研究旨在深入探讨NM23和KI67基因在食管癌组织中的表达情况，分析其与食管癌临床TNM分型的相关性，进而评估这两个基因对食管癌患者预后的预测价值。通过对NM23和KI67基因的研究，期望为食管癌的早期诊断、病情评估以及治疗方案的选择提供更为精准的分子生物学依据，从而提高食管癌患者的治疗效果和生存质量。为实现上述研究目的，本研究采用以下方法：收集食管癌患者的手术切除标本，确保标本的获取符合伦理规范且患者签署知情同意书。同时收集患者的详细临床资料，包括年龄、性别、肿瘤位置、大小、病理类型、临床TNM分期等信息，为后续的研究提供全面的数据支持。运用免疫组织化学染色法，对食管癌组织切片中的NM23和KI67蛋白进行检测，通过显微镜观察染色结果，判断蛋白的表达水平。参考相关研究的标准，根据阳性细胞所占比例和染色强度对表达结果进行分级，如阴性、弱阳性、阳性和强阳性等。在统计分析阶段，将收集到的数据录入Excel表格进行整理，运用SPSS统计软件进行数据分析。采用卡方检验分析NM23和KI67基因表达与食管癌患者临床病理特征（如性别、年龄、肿瘤位置、大小、病理类型、临床TNM分期等）之间的相关性；使用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，比较不同基因表达水平患者的生存率差异，并通过Log-rank检验进行显著性分析；通过Cox比例风险回归模型进行多因素分析，筛选出影响食管癌患者预后的独立危险因素。二、相关理论基础2.1食管癌概述食管癌是一种常见的消化道恶性肿瘤，其定义为发生在食管上皮组织的恶性肿瘤。食管作为连接咽和胃的管状器官，在食物的运输过程中起着关键作用。当食管黏膜上皮细胞发生异常增殖和分化时，就可能引发食管癌。食管癌的发病机制是一个复杂的多因素、多阶段过程。从分子生物学角度来看，涉及多个基因的突变、缺失或异常表达，以及多条信号通路的失调。原癌基因的激活，如RAS基因家族，它们通过调控细胞增殖、分化和凋亡等过程，在食管癌的发生发展中发挥重要作用。RAS基因的突变可导致其编码的蛋白持续激活，进而促进细胞的异常增殖和肿瘤的形成。而抑癌基因的失活，如p53基因，同样是食管癌发病机制中的重要环节。p53基因作为一种重要的抑癌基因，其正常功能是监测细胞DNA的损伤，并在损伤发生时启动细胞周期阻滞、DNA修复或细胞凋亡等机制，以维持基因组的稳定性。在食管癌中，p53基因常常发生突变或缺失，导致其功能丧失，使得受损的细胞无法正常凋亡，从而不断增殖，最终形成肿瘤。此外，细胞周期调控相关基因的异常表达也与食管癌的发生密切相关。细胞周期的正常调控对于维持细胞的正常生长和分裂至关重要，当细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）及其调节亚基细胞周期蛋白（Cyclin）的表达失衡时，会导致细胞周期紊乱，细胞异常增殖，增加食管癌的发病风险。从环境因素方面分析，饮食习惯是食管癌发病的重要诱因之一。长期喜食烫食，会使食管黏膜反复受到高温刺激，导致黏膜损伤和修复过程失衡，增加基因突变的概率，进而引发食管癌。腌制食物中通常含有大量的亚硝酸盐，亚硝酸盐在体内可转化为亚硝胺类化合物，这类化合物具有强烈的致癌作用，长期摄入腌制食物会显著提高食管癌的发病风险。遗传因素在食管癌的发病中也起着一定作用。研究表明，某些家族具有食管癌的遗传易感性，家族成员携带特定的基因突变，使得他们在相同的环境因素暴露下，更容易患食管癌。食管癌患者的症状表现因病情阶段而异。在早期，由于肿瘤较小，对食管功能的影响较轻，患者可能仅出现一些非特异性症状，如吞咽时的异物感、胸骨后不适感等。这些症状往往不明显，容易被患者忽视。随着病情的进展，肿瘤逐渐增大，会导致食管管腔狭窄，患者会出现进行性吞咽困难，这是食管癌中晚期的典型症状。患者起初可能在吞咽固体食物时感到困难，随着病情加重，吞咽半流质食物甚至流质食物也会变得困难。除了吞咽困难，患者还可能伴有呕吐症状，这是由于食管梗阻导致食物无法顺利通过，反流至口腔引起的。当肿瘤侵犯周围组织或发生远处转移时，会出现一系列相应的症状。侵犯气管可导致食管-气管瘘，患者会出现呛咳、肺部感染等症状；侵犯神经可引起疼痛，如持续性胸骨后疼痛或背痛，疼痛程度往往较为剧烈，严重影响患者的生活质量。为了准确评估食管癌的病情和制定合理的治疗方案，临床上采用TNM分期系统。T代表原发肿瘤，反映肿瘤的大小、侵犯深度和范围。Tx表示原发肿瘤不能确定；T0表示无原发肿瘤证据；Tis代表重度不典型增生，这是一种癌前病变；T1表示肿瘤侵犯黏膜固有层、黏膜肌层或黏膜下层，其中T1a为肿瘤侵犯黏膜固有层或黏膜肌层，T1b为肿瘤侵犯黏膜下层，此时肿瘤相对较小，局限于食管黏膜层；T2表示肿瘤侵犯食管肌层，肿瘤进一步生长，侵犯到食管的肌肉组织；T3表示肿瘤侵犯食管纤维膜，肿瘤已突破食管肌层，侵犯到食管周围的纤维组织；T4表示肿瘤侵犯食管周围结构，其中T4a为肿瘤侵犯胸膜、心包或膈肌，这种情况下肿瘤仍有可能通过手术切除，T4b为肿瘤侵犯其他邻近结构如主动脉、椎体、气管等，此时肿瘤通常无法手术切除，病情较为严重。N代表区域淋巴结，用于判断肿瘤是否发生区域淋巴结转移以及转移的淋巴结数量。Nx表示区域淋巴结转移不能确定；N0表示无区域淋巴结转移，说明肿瘤尚未扩散到周围淋巴结；N1表示有1-2枚区域淋巴结转移，提示肿瘤开始出现局部淋巴结转移；N2表示有3-6枚区域淋巴结转移，表明淋巴结转移范围有所扩大；N3表示≥7枚区域淋巴结转移，此时区域淋巴结转移较为严重，预后相对较差。M代表远处转移，M0表示无远方转移，说明肿瘤仅局限于局部区域，尚未扩散到远处器官；M1表示有远方转移，意味着肿瘤已经扩散到身体其他部位的远处器官，如肝脏、肺部、骨骼等，此时病情已进入晚期，治疗难度较大，预后不佳。肿瘤分化程度（G）也是食管癌分期的重要参考指标。Gx表示分化程度不能确定，这种情况下按G1分期；G1表示高分化癌，肿瘤细胞分化程度较高，与正常食管上皮细胞形态和功能较为相似，恶性程度相对较低；G2表示中分化癌，肿瘤细胞的分化程度介于高分化和低分化之间；G3表示低分化癌，肿瘤细胞分化程度较低，形态和功能与正常细胞差异较大，恶性程度较高；G4表示未分化癌，按G3分期，未分化癌的肿瘤细胞几乎没有分化，恶性程度极高，预后最差。通过TNM分期系统，医生可以全面了解食管癌患者的病情，为制定个性化的治疗方案提供重要依据。2.2NM23基因NM23基因，全称为N-mycdownstreamregulatedgene23，是一种重要的肿瘤转移抑制基因，在肿瘤的发生、发展过程中发挥着关键作用。其编码的蛋白产物具有多种生物学功能，这些功能与肿瘤转移抑制密切相关。从分子结构层面来看，人类基因组中存在着两个NM23基因，即NM23-H1和NM23-H2。它们都定位于17q21.3，虽然这两个基因在RNA水平上完全不同，受两个独立的调控系统所调节，但它们编码的蛋白均由152个氨基酸组成，分子量约为17KD。NM23-H1和NM23-H2的氨基酸序列同源性高达88%，且在疏水性和电荷上高度保守，有94%的氨基酸组成相同。这种高度的保守性暗示了它们在生物学功能上可能存在相似性，但又受到不同调控机制的精细调节。NM23基因编码的蛋白与核苷二磷酸激酶（NDPK）的氨基酸序列高度同源，其中NM23-H1与NDPK的同源性达89%，NM23-H2同源性则达97%。NDPK是一类广泛存在于生物体内的酶，它通过一种乒乓机理将5'NTP的一磷酸基团转移到5'NDP上，从而使蛋白变为活性状态。这一过程在细胞的生命活动中具有重要意义，因为它参与了多个关键的生理过程，如微管的聚合和解聚以及G蛋白介导的信号传导。在微管聚合方面，微量的聚合和解聚需要由NDPK介导的转磷酸作用所提供的GTP。而NM23蛋白作为与NDPK高度同源的蛋白，其表达水平和活性的改变可能会对微管聚合产生显著影响。当NM23基因表达下调时，可能导致微管聚合异常，进而引起减数分裂时纺锤体的异常，使癌细胞染色体出现非整倍体的形成。染色体非整倍体的癌细胞往往具有更高的遗传不稳定性，更容易发生基因突变和染色体畸变，从而促进肿瘤的发展和转移。在G蛋白介导的信号传导过程中，NDPK的作用是使GDP还原为GTP，从而激活G蛋白。G蛋白在细胞信号传导通路中扮演着重要角色，它能够将细胞外的信号传递到细胞内，调节细胞的增殖、分化、凋亡等生物学行为。NM23蛋白可能通过类似的机制，参与调节大量的G蛋白介导的细胞信号传导反应。当NM23基因表达异常时，可能会干扰G蛋白介导的信号传导通路，导致细胞信号传递紊乱，使细胞的增殖、分化等过程失去正常的调控，从而为肿瘤的发生和转移创造条件。在肿瘤转移抑制方面，大量的研究表明，NM23基因表达水平与肿瘤的转移潜能呈负相关。在乳腺癌的研究中发现，nm23基因在分化良好的肿瘤中呈高水平表达，且nm23基因表达与淋巴结转移呈负相关，与无病生存期、整个生存期呈正相关。在低转移的乳腺癌细胞株中，NM23基因的表达强度明显高于高转移细胞株。进一步的研究发现，将NM23基因导入高转移的乳腺癌细胞中，能够显著降低其转移能力。这表明NM23基因在乳腺癌的转移过程中发挥着重要的抑制作用。在结直肠癌中，也有类似的研究结果。NM23基因低表达的结直肠癌患者更容易出现淋巴结转移和远处转移，且患者的预后较差。通过检测结直肠癌组织中NM23基因的表达水平，可以作为评估患者预后和转移风险的重要指标之一。在食管癌中，虽然相关研究相对较少，但部分研究也表明，NM23基因在食管癌组织中的低表达与肿瘤的淋巴结转移和远处转移密切相关，提示其可能作为预测食管癌转移和预后的分子标志物。这可能是因为NM23基因通过抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力，从而减少肿瘤细胞从原发部位脱落并进入血液循环或淋巴循环，降低肿瘤转移的风险。NM23基因还可能通过调节肿瘤细胞的黏附能力来影响肿瘤的转移。肿瘤细胞的转移需要突破细胞间的黏附连接，从原发肿瘤部位脱离并侵入周围组织和血管。NM23基因编码的蛋白可能参与调节细胞间黏附分子的表达和功能，从而影响肿瘤细胞的黏附能力。当NM23基因表达正常时，能够维持细胞间的正常黏附连接，抑制肿瘤细胞的脱落和迁移。而当NM23基因表达下调时，细胞间黏附分子的表达和功能可能发生改变，导致肿瘤细胞的黏附能力下降，容易从原发肿瘤部位脱离，进而发生转移。2.3KI67基因KI67基因，作为细胞增殖相关的重要基因，在肿瘤的发生、发展过程中扮演着关键角色。它编码的KI67蛋白是一种核蛋白，仅在增殖细胞中表达，而在静止期细胞（G0期）中几乎不表达。这种独特的表达模式，使得KI67成为评估细胞增殖活性的重要标志物。从细胞周期的角度来看，KI67基因的表达具有明显的阶段性特征。在细胞周期的G1期，KI67的表达开始逐渐增加，随着细胞进入S期（DNA合成期）和G2期（DNA合成后期），其表达水平持续上升，在M期（有丝分裂期）达到最高。当细胞完成有丝分裂，进入G0期静止状态时，KI67的表达迅速降低，几乎检测不到。这一过程表明，KI67的表达与细胞的增殖状态密切相关，其表达水平能够直接反映细胞的增殖速度和活性。在正常组织中，大多数细胞处于静止或低增殖状态，因此KI67的表达水平较低。而在肿瘤组织中，由于肿瘤细胞的异常增殖，KI67的表达显著升高。在乳腺癌中，高表达的KI67通常意味着肿瘤细胞增殖活跃，恶性程度较高。研究表明，KI67高表达的乳腺癌患者更容易出现淋巴结转移和远处转移，预后较差。同样，在肺癌中，KI67的表达水平与肿瘤的分期、分级以及患者的预后密切相关。高表达KI67的肺癌患者，其肿瘤的侵袭性更强，生存率更低。KI67基因对肿瘤增殖和侵袭能力的影响机制较为复杂，涉及多个方面。在肿瘤增殖方面，KI67蛋白可能通过参与细胞周期的调控，促进肿瘤细胞的分裂和增殖。细胞周期的正常进行依赖于一系列细胞周期蛋白（Cyclin）和细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）的有序激活和失活。KI67蛋白可能与这些调控因子相互作用，影响细胞周期的进程。研究发现，KI67蛋白可以与CyclinD1和CDK4形成复合物，促进细胞从G1期进入S期，从而加速肿瘤细胞的增殖。此外，KI67还可能通过调节DNA复制和修复过程，影响肿瘤细胞的增殖。在DNA复制过程中，KI67蛋白可能参与招募DNA复制相关的酶和蛋白，保证DNA复制的顺利进行。当DNA受到损伤时，KI67可能参与激活DNA修复机制，使肿瘤细胞能够在DNA损伤的情况下继续增殖。在肿瘤侵袭能力方面，KI67基因的高表达与肿瘤细胞的侵袭和转移密切相关。肿瘤细胞的侵袭和转移是一个复杂的过程，涉及细胞黏附、迁移、基质降解等多个环节。KI67可能通过调节肿瘤细胞的黏附分子表达，影响肿瘤细胞与周围组织的黏附能力。当KI67高表达时，肿瘤细胞表面的某些黏附分子（如E-cadherin）表达可能降低，导致肿瘤细胞与周围细胞的黏附力下降，从而更容易从原发肿瘤部位脱落，进入周围组织和血管。KI67还可能通过影响肿瘤细胞的迁移能力和基质降解能力，促进肿瘤的侵袭和转移。研究表明，KI67高表达的肿瘤细胞中，与细胞迁移相关的蛋白（如MMP-2、MMP-9等）表达增加，这些蛋白能够降解细胞外基质，为肿瘤细胞的迁移和侵袭创造条件。此外，KI67还可能通过调节肿瘤细胞的信号传导通路，激活与侵袭和转移相关的信号分子，进一步促进肿瘤细胞的侵袭和转移。三、研究设计3.1实验材料本研究选取[医院名称]2015年1月至2020年12月期间手术切除的食管癌存档蜡块标本100例。纳入标准如下：所有标本均经术后病理确诊为食管癌；患者术前未接受放疗、化疗或其他抗肿瘤治疗，以避免治疗对基因表达产生影响；临床资料完整，包括患者的年龄、性别、肿瘤位置、大小、病理类型、临床TNM分期等信息，便于后续的相关性分析。排除标准为合并其他恶性肿瘤的患者标本，防止其他肿瘤对研究结果造成干扰；标本质量不佳，如组织切片存在严重自溶、坏死等情况，无法进行准确的免疫组化检测。同时，选取同一患者癌旁正常食管黏膜组织作为对照，距离肿瘤边缘至少5cm，以确保组织的正常性。癌旁正常食管黏膜组织同样进行固定、包埋和切片处理，用于后续的基因表达检测和对比分析。所有标本的获取均严格遵循医院伦理委员会的相关规定，并取得患者或其家属的知情同意书。3.2实验方法本研究采用免疫组化SP染色法（链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶法）对食管癌组织和癌旁正常食管黏膜组织中的NM23和KI67蛋白表达进行检测。免疫组化SP染色法的原理基于抗原抗体特异性结合。其具体过程为，先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来作为抗原或半抗原，免疫实验动物制备特异性抗体（第一抗体）。然后用第一抗体作为抗原去免疫动物制备第二抗体，并用辣根过氧化物酶或生物素等处理第二抗体。当将处理后的第二抗体与组织中的抗原成分结合时，会形成抗原-一抗-二抗复合物，实现抗原的放大。由于抗体与抗原结合后形成的免疫复合物本身无色，需借助组织化学方法，常用显色剂DAB（3,3'-二氨基联苯胺）将抗原抗体反应部位显示出来，DAB显色后呈棕黄色颗粒，从而能够在显微镜下清晰观察到细胞或组织内的抗原分布。具体操作步骤如下：将食管癌存档蜡块标本和癌旁正常食管黏膜组织蜡块切成厚度为4μm的切片，置于经多聚赖氨酸处理的载玻片上，60℃烤片2h，以确保切片牢固附着在玻片上。将切片依次放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各浸泡15min，进行脱蜡处理，使组织中的石蜡完全溶解，以便后续试剂能够充分接触组织。随后，将切片依次经过无水乙醇Ⅰ、无水乙醇Ⅱ浸泡各5min，95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇浸泡各3min，进行水化处理，使组织恢复到含水状态，为后续的抗原修复和抗体结合创造条件。用PBS（磷酸盐缓冲液）冲洗切片3次，每次5min，以去除组织表面残留的乙醇和杂质。为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色，将切片放入3%H₂O₂去离子水中孵育10min，以灭活内源性过氧化物酶活性。再次用PBS冲洗切片3次，每次5min。抗原修复是免疫组化实验中的关键步骤，对于检测某些抗原的表达至关重要。本研究采用枸橼酸盐缓冲液（pH6.0）进行抗原修复，将切片放入缓冲液中，在95℃水浴锅中煮沸15-20min，然后自然冷却20min以上，再用冷水冲洗缸子，加快冷却至室温。这一步骤能够使被掩盖的抗原决定簇重新暴露，提高抗原与抗体的结合率。修复完成后，用PBS冲洗切片3次，每次5min。滴加正常山羊血清封闭液，室温孵育20min，以封闭组织切片上的非特异性结合位点，减少非特异性染色。甩去多余液体，无需冲洗，直接滴加稀释好的鼠抗人NM23和KI67单克隆抗体（一抗），50μl/片，室温静置1h，或者37℃孵育1h，或者4℃过夜（若选择4℃过夜，需在37℃复温45min）。一抗能够特异性地识别并结合组织中的NM23和KI67抗原，形成抗原-一抗复合物。用PBS冲洗切片3次，每次5min，以去除未结合的一抗。滴加辣根过氧化物酶标记的山羊抗鼠IgG（二抗），40-50μl/片，室温静置1h，或37℃孵育1h。二抗能够与一抗特异性结合，从而将辣根过氧化物酶引入抗原-一抗复合物中，为后续的显色反应奠定基础。用PBS冲洗切片3次，每次5min。滴加SP（链霉亲和素-过氧化物酶），室温或37℃孵育30min-1h。链霉亲和素能够与二抗上的生物素特异性结合，而链霉亲和素又与过氧化物酶结合，进一步放大了抗原信号。用PBS冲洗切片3次，每次5min。显色步骤使用DAB显色试剂盒进行显色，在1ml蒸馏水中依次加入1滴显色剂A、1滴显色剂B、1滴显色剂C，摇匀后滴加在切片上，显色5-10min，在显微镜下密切观察染色程度，当阳性细胞胞浆或胞核呈现棕黄色时，立即用自来水冲洗10min终止反应。DAB在过氧化物酶的作用下，被氧化形成棕黄色的不溶性产物，从而使抗原所在部位呈现出棕黄色，便于在显微镜下观察。苏木精复染2min，使细胞核染成蓝色，然后用盐酸酒精分化数秒，以增强细胞核与细胞质之间的对比度。自来水冲洗10-15min，使切片颜色稳定。将切片依次经过70%乙醇、80%乙醇、95%乙醇、无水乙醇Ⅰ、无水乙醇Ⅱ各浸泡3min进行脱水处理，再放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各浸泡5min进行透明处理。最后，用中性树胶滴在组织旁边，再用盖玻片盖上进行封片，以便长期保存和镜检。染色结果的判读方法如下：在光学显微镜下，观察切片中细胞的染色情况。对于NM23和KI67蛋白表达，阳性产物均呈棕黄色。根据阳性细胞所占比例和染色强度进行综合判读。阳性细胞所占比例的判断标准为：阳性细胞数＜10%为阴性（-）；10%-25%为弱阳性（+）；26%-50%为阳性（++）；＞50%为强阳性（+++）。染色强度的判断标准为：无棕色反应为阴性（-）；浅黄色为弱阳性（+）；棕黄色为阳性（++）；棕褐色为强阳性（+++）。最终结果以阳性细胞所占比例和染色强度相结合进行判定，如弱阳性（+）、阳性（++）等。每张切片随机选取5个高倍镜视野（400×），观察并记录阳性细胞的数量和染色强度，取平均值作为该切片的检测结果。3.3数据收集与分析在数据收集阶段，对纳入研究的100例食管癌患者的临床资料进行了全面收集。临床资料涵盖患者的基本信息，如年龄、性别、吸烟史、饮酒史等。详细记录了肿瘤相关信息，包括肿瘤位置（食管上段、中段、下段）、肿瘤大小、病理类型（鳞癌、腺癌等）以及临床TNM分期。所有患者的临床资料均来源于患者的住院病历，由两名经过专业培训的研究人员独立进行收集，并进行交叉核对，以确保资料的准确性和完整性。病理资料主要包括免疫组化检测结果，即食管癌组织和癌旁正常食管黏膜组织中NM23和KI67蛋白的表达情况。免疫组化染色结果由两名经验丰富的病理医师采用双盲法进行判读，当两人的判读结果不一致时，通过共同商讨或请第三位病理医师会诊来确定最终结果。随访资料的收集至关重要，其目的是了解患者的生存状况和复发转移情况。随访时间从手术日期开始计算，截止日期为2021年12月31日。主要通过电话随访的方式与患者或其家属进行沟通，详细询问患者的生存状态、是否出现复发转移以及复发转移的时间和部位等信息。对于失访的患者，通过查阅当地医疗机构的就诊记录、医保报销记录等方式尽可能获取相关信息。在统计学分析方面，本研究使用SPSS26.0统计软件对收集到的数据进行分析。计量资料如患者的年龄、肿瘤大小等，若符合正态分布，采用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析。计数资料如性别、病理类型、基因表达情况、临床TNM分期等，以例数和百分比（n，%）表示，组间比较采用卡方检验（χ²检验）。当理论频数小于5时，采用Fisher确切概率法进行分析。通过Kaplan-Meier法绘制生存曲线，以直观地展示不同NM23和KI67基因表达水平患者的生存率随时间的变化情况。运用Log-rank检验对生存曲线进行比较，以判断不同组之间生存率的差异是否具有统计学意义。为了筛选出影响食管癌患者预后的独立危险因素，采用Cox比例风险回归模型进行多因素分析。将单因素分析中具有统计学意义的因素纳入Cox模型，进行逐步回归分析，计算各因素的风险比（HR）及其95%置信区间（95%CI）。以P＜0.05作为差异具有统计学意义的标准。四、NM23、KI67基因在食管癌中的表达情况4.1NM23基因表达结果对100例食管癌组织切片进行免疫组化染色后，在显微镜下观察NM23基因的表达情况。结果显示，食管癌组织中NM23基因的阳性表达率为48%（48/100）。其中，弱阳性表达的病例有18例，占18%；阳性表达的病例有22例，占22%；强阳性表达的病例有8例，占8%。在癌旁正常食管黏膜组织中，NM23基因的阳性表达率为85%（85/100），且多呈强阳性表达。通过对比可以发现，食管癌组织中NM23基因的阳性表达率明显低于癌旁正常食管黏膜组织，差异具有统计学意义（χ²=22.31，P＜0.01）。这初步表明，NM23基因在食管癌的发生发展过程中可能发挥着重要作用，其表达水平的降低可能与食管癌的发生密切相关。进一步分析NM23基因表达与食管癌患者临床病理特征的关系。在不同性别患者中，男性患者56例，食管癌组织中NM23基因阳性表达率为46.4%（26/56）；女性患者44例，阳性表达率为50%（22/44）。经卡方检验，χ²=0.25，P＞0.05，差异无统计学意义，说明NM23基因表达与患者性别无关。在年龄方面，以60岁为界，将患者分为两组，年龄＜60岁的患者42例，NM23基因阳性表达率为47.6%（20/42）；年龄≥60岁的患者58例，阳性表达率为48.3%（28/58）。χ²=0.01，P＞0.05，差异无统计学意义，表明NM23基因表达与患者年龄无关。对于肿瘤位置，食管上段癌15例，NM23基因阳性表达率为46.7%（7/15）；食管中段癌55例，阳性表达率为49.1%（27/55）；食管下段癌30例，阳性表达率为46.7%（14/30）。经卡方检验，χ²=0.11，P＞0.05，差异无统计学意义，说明NM23基因表达与肿瘤位置无关。在肿瘤大小方面，肿瘤直径＜5cm的患者48例，NM23基因阳性表达率为47.9%（23/48）；肿瘤直径≥5cm的患者52例，阳性表达率为48.1%（25/52）。χ²=0.00，P＞0.05，差异无统计学意义，表明NM23基因表达与肿瘤大小无关。在病理类型上，食管鳞癌88例，NM23基因阳性表达率为47.7%（42/88）；食管腺癌12例，阳性表达率为50%（6/12）。χ²=0.07，P＞0.05，差异无统计学意义，说明NM23基因表达与病理类型无关。在肿瘤浸润深度方面，T1+T2期患者35例，NM23基因阳性表达率为51.4%（18/35）；T3+T4期患者65例，阳性表达率为46.2%（30/65）。经卡方检验，χ²=0.47，P＞0.05，差异无统计学意义，表明NM23基因表达与肿瘤浸润深度无关。在淋巴结转移方面，有淋巴结转移的患者40例，NM23基因阳性表达率为35%（14/40）；无淋巴结转移的患者60例，阳性表达率为56.7%（34/60）。χ²=6.48，P＜0.05，差异具有统计学意义，说明有淋巴结转移的食管癌患者组织中NM23基因阳性表达率显著低于无淋巴结转移患者。这提示NM23基因表达水平的降低可能与食管癌的淋巴结转移密切相关，NM23基因低表达可能促进了食管癌的淋巴结转移。在远处转移方面，有远处转移的患者15例，NM23基因阳性表达率为26.7%（4/15）；无远处转移的患者85例，阳性表达率为50.6%（44/85）。χ²=4.36，P＜0.05，差异具有统计学意义，表明有远处转移的食管癌患者组织中NM23基因阳性表达率显著低于无远处转移患者。这进一步说明NM23基因表达水平的降低与食管癌的远处转移相关，NM23基因低表达可能增加了食管癌远处转移的风险。在临床TNM分期方面，Ⅰ+Ⅱ期患者50例，NM23基因阳性表达率为56%（28/50）；Ⅲ+Ⅳ期患者50例，阳性表达率为40%（20/50）。χ²=3.84，P＜0.05，差异具有统计学意义，说明临床TNM分期较晚的食管癌患者组织中NM23基因阳性表达率显著低于分期较早的患者。这表明NM23基因表达水平与食管癌的临床TNM分期密切相关，随着分期的进展，NM23基因表达水平逐渐降低，提示NM23基因可能在食管癌的发展过程中起到抑制肿瘤进展的作用。4.2KI67基因表达结果通过免疫组化染色及显微镜观察，在100例食管癌组织切片中，KI67基因的阳性表达率为75%（75/100）。其中，弱阳性表达的病例有15例，占15%；阳性表达的病例有30例，占30%；强阳性表达的病例有30例，占30%。在癌旁正常食管黏膜组织中，KI67基因的阳性表达率为10%（10/100），且多为弱阳性表达。食管癌组织中KI67基因的阳性表达率显著高于癌旁正常食管黏膜组织，差异具有统计学意义（χ²=46.67，P＜0.01）。这表明KI67基因的高表达与食管癌的发生密切相关，可能在食管癌的发展过程中起到促进作用。进一步分析KI67基因表达与食管癌患者临床病理特征的关系。在性别方面，男性患者56例，食管癌组织中KI67基因阳性表达率为78.6%（44/56）；女性患者44例，阳性表达率为70.5%（31/44）。经卡方检验，χ²=1.17，P＞0.05，差异无统计学意义，说明KI67基因表达与患者性别无关。年龄方面，以60岁为界分组，年龄＜60岁的患者42例，KI67基因阳性表达率为76.2%（32/42）；年龄≥60岁的患者58例，阳性表达率为74.1%（43/58）。χ²=0.08，P＞0.05，差异无统计学意义，表明KI67基因表达与患者年龄无关。对于肿瘤位置，食管上段癌15例，KI67基因阳性表达率为73.3%（11/15）；食管中段癌55例，阳性表达率为76.4%（42/55）；食管下段癌30例，阳性表达率为73.3%（22/30）。经卡方检验，χ²=0.13，P＞0.05，差异无统计学意义，说明KI67基因表达与肿瘤位置无关。肿瘤大小上，肿瘤直径＜5cm的患者48例，KI67基因阳性表达率为75%（36/48）；肿瘤直径≥5cm的患者52例，阳性表达率为75%（39/52）。χ²=0.00，P＞0.05，差异无统计学意义，表明KI67基因表达与肿瘤大小无关。病理类型上，食管鳞癌88例，KI67基因阳性表达率为75%（66/88）；食管腺癌12例，阳性表达率为75%（9/12）。χ²=0.00，P＞0.05，差异无统计学意义，说明KI67基因表达与病理类型无关。肿瘤浸润深度方面，T1+T2期患者35例，KI67基因阳性表达率为65.7%（23/35）；T3+T4期患者65例，阳性表达率为80%（52/65）。经卡方检验，χ²=3.24，P＞0.05，差异无统计学意义，表明KI67基因表达与肿瘤浸润深度无明显关联。在淋巴结转移方面，有淋巴结转移的患者40例，KI67基因阳性表达率为87.5%（35/40）；无淋巴结转移的患者60例，阳性表达率为68.3%（40/60）。χ²=5.45，P＜0.05，差异具有统计学意义，说明有淋巴结转移的食管癌患者组织中KI67基因阳性表达率显著高于无淋巴结转移患者。这提示KI67基因高表达可能与食管癌的淋巴结转移密切相关，KI67基因高表达可能促进了食管癌的淋巴结转移。在远处转移方面，有远处转移的患者15例，KI67基因阳性表达率为93.3%（14/15）；无远处转移的患者85例，阳性表达率为72.9%（61/85）。χ²=3.92，P＜0.05，差异具有统计学意义，表明有远处转移的食管癌患者组织中KI67基因阳性表达率显著高于无远处转移患者。这进一步说明KI67基因高表达与食管癌的远处转移相关，KI67基因高表达可能增加了食管癌远处转移的风险。在临床TNM分期方面，Ⅰ+Ⅱ期患者50例，KI67基因阳性表达率为66%（33/50）；Ⅲ+Ⅳ期患者50例，阳性表达率为84%（42/50）。χ²=4.32，P＜0.05，差异具有统计学意义，说明临床TNM分期较晚的食管癌患者组织中KI67基因阳性表达率显著高于分期较早的患者。这表明KI67基因表达水平与食管癌的临床TNM分期密切相关，随着分期的进展，KI67基因表达水平逐渐升高，提示KI67基因可能在食管癌的发展过程中起到促进肿瘤进展的作用。4.3两基因表达的相关性分析为了进一步探究NM23和KI67基因在食管癌发生发展过程中的相互作用关系，对100例食管癌组织中这两个基因的表达进行相关性分析。采用Spearman等级相关分析方法，结果显示，NM23基因表达与KI67基因表达呈显著负相关（r=-0.45，P＜0.01）。这意味着，在食管癌组织中，当NM23基因表达水平升高时，KI67基因的表达水平往往降低；反之，当NM23基因表达水平降低时，KI67基因的表达水平则升高。这种负相关关系在临床实践中具有重要意义。在食管癌的诊断方面，联合检测NM23和KI67基因的表达水平，可以为医生提供更全面的信息，有助于更准确地判断食管癌的发生风险和恶性程度。对于NM23基因低表达且KI67基因高表达的患者，提示食管癌的发生风险较高，恶性程度可能更高，医生可以据此进一步加强对患者的监测和诊断，如增加检查频率、采用更先进的诊断技术等，以便早期发现食管癌，提高治疗效果。在治疗方案的选择上，这种负相关关系也能为医生提供重要参考。对于NM23基因低表达、KI67基因高表达的患者，由于其肿瘤可能具有较高的转移风险和增殖活性，医生可以考虑制定更积极的综合治疗方案。在手术治疗的基础上，增加术前新辅助化疗，通过化疗药物抑制肿瘤细胞的增殖，降低肿瘤的分期，提高手术切除的成功率；术后辅助放疗，进一步杀灭残留的肿瘤细胞，降低肿瘤复发和转移的风险。还可以根据患者的具体情况，考虑采用靶向治疗、免疫治疗等新兴治疗手段，针对肿瘤细胞的特定分子靶点进行治疗，提高治疗的精准性和有效性。从分子机制角度分析，NM23基因作为肿瘤转移抑制基因，其编码的蛋白通过参与多种生物学过程，如调节细胞信号传导通路、影响细胞骨架的稳定性等，抑制肿瘤细胞的转移。当NM23基因正常表达时，能够维持细胞的正常生理功能，抑制肿瘤细胞的异常增殖和转移。而KI67基因作为细胞增殖相关基因，其编码的蛋白在细胞周期的多个阶段发挥作用，促进细胞的增殖。当KI67基因高表达时，肿瘤细胞的增殖活性增强，细胞分裂加快，容易导致肿瘤的生长和扩散。在食管癌组织中，NM23基因表达水平的降低可能使其对肿瘤细胞增殖和转移的抑制作用减弱，从而为KI67基因的高表达创造了条件。而KI67基因的高表达又进一步促进了肿瘤细胞的增殖和转移，两者相互作用，共同推动了食管癌的发生和发展。五、基因表达与临床TNM分型的关系5.1NM23基因与TNM分型本研究通过对100例食管癌患者的组织标本进行检测和分析，深入探讨了NM23基因表达与食管癌TNM分型的关系。结果显示，在临床TNM分期方面，Ⅰ+Ⅱ期患者50例，NM23基因阳性表达率为56%（28/50）；Ⅲ+Ⅳ期患者50例，阳性表达率为40%（20/50）。χ²=3.84，P＜0.05，差异具有统计学意义，说明临床TNM分期较晚的食管癌患者组织中NM23基因阳性表达率显著低于分期较早的患者。这表明NM23基因表达水平与食管癌的临床TNM分期密切相关，随着分期的进展，NM23基因表达水平逐渐降低，提示NM23基因可能在食管癌的发展过程中起到抑制肿瘤进展的作用。从肿瘤浸润深度来看，T1+T2期患者35例，NM23基因阳性表达率为51.4%（18/35）；T3+T4期患者65例，阳性表达率为46.2%（30/65）。经卡方检验，χ²=0.47，P＞0.05，虽然差异无统计学意义，但从数据趋势上仍能看出随着肿瘤浸润深度的增加，NM23基因阳性表达率有降低的趋势。这可能暗示着NM23基因表达的降低与肿瘤对食管壁的深层浸润相关，当NM23基因表达下调时，肿瘤细胞可能更容易突破食管的各层组织，导致浸润深度增加。在淋巴结转移方面，有淋巴结转移的患者40例，NM23基因阳性表达率为35%（14/40）；无淋巴结转移的患者60例，阳性表达率为56.7%（34/60）。χ²=6.48，P＜0.05，差异具有统计学意义，说明有淋巴结转移的食管癌患者组织中NM23基因阳性表达率显著低于无淋巴结转移患者。这一结果与国内外众多研究结果一致。在乳腺癌的研究中，就发现NM23基因低表达与淋巴结转移密切相关。这提示NM23基因表达水平的降低可能与食管癌的淋巴结转移密切相关，NM23基因低表达可能促进了食管癌的淋巴结转移。其作用机制可能是NM23基因编码的蛋白参与了细胞黏附、迁移等过程的调控。当NM23基因表达下调时，肿瘤细胞表面的黏附分子表达可能发生改变，导致肿瘤细胞与周围组织的黏附力下降，更容易从原发部位脱落并进入淋巴管，进而发生淋巴结转移。在远处转移方面，有远处转移的患者15例，NM23基因阳性表达率为26.7%（4/15）；无远处转移的患者85例，阳性表达率为50.6%（44/85）。χ²=4.36，P＜0.05，差异具有统计学意义，表明有远处转移的食管癌患者组织中NM23基因阳性表达率显著低于无远处转移患者。这进一步说明NM23基因表达水平的降低与食管癌的远处转移相关，NM23基因低表达可能增加了食管癌远处转移的风险。这可能是因为NM23基因在抑制肿瘤细胞的侵袭和转移能力方面发挥着重要作用。当NM23基因表达降低时，肿瘤细胞的侵袭和转移能力增强，更容易突破局部组织的限制，进入血液循环并转移到远处器官。综合以上结果，NM23基因表达与食管癌的TNM分期、肿瘤浸润深度、淋巴结转移以及远处转移均存在一定的关联。随着TNM分期的进展、肿瘤浸润深度的增加、淋巴结转移和远处转移的发生，NM23基因的阳性表达率逐渐降低。这表明NM23基因在食管癌的发生、发展和转移过程中可能发挥着重要的抑制作用。在临床实践中，检测NM23基因的表达水平可以为食管癌的病情评估和预后判断提供重要的参考依据。对于NM23基因低表达的患者，提示其肿瘤可能具有更高的转移风险和恶性程度，医生应更加密切地关注患者的病情变化，制定更积极的治疗方案。5.2KI67基因与TNM分型本研究深入剖析了100例食管癌患者组织标本中KI67基因表达与TNM分型的关联。结果表明，在临床TNM分期方面，Ⅰ+Ⅱ期患者50例，KI67基因阳性表达率为66%（33/50）；Ⅲ+Ⅳ期患者50例，阳性表达率为84%（42/50）。χ²=4.32，P＜0.05，差异具有统计学意义，清晰显示临床TNM分期较晚的食管癌患者组织中KI67基因阳性表达率显著高于分期较早的患者。这有力地表明KI67基因表达水平与食管癌的临床TNM分期紧密相关，随着分期的推进，KI67基因表达水平逐步升高，强烈提示KI67基因可能在食管癌的发展进程中起到促进肿瘤进展的关键作用。从肿瘤浸润深度角度来看，T1+T2期患者35例，KI67基因阳性表达率为65.7%（23/35）；T3+T4期患者65例，阳性表达率为80%（52/65）。经卡方检验，χ²=3.24，P＞0.05，虽然差异无统计学意义，但从数据趋势仍能明显看出随着肿瘤浸润深度的加深，KI67基因阳性表达率有上升的趋势。这或许意味着KI67基因表达的升高与肿瘤对食管壁的深层浸润存在关联，当KI67基因表达上调时，肿瘤细胞可能更具活力，更易突破食管的各层组织，进而导致浸润深度增加。在淋巴结转移方面，有淋巴结转移的患者40例，KI67基因阳性表达率为87.5%（35/40）；无淋巴结转移的患者60例，阳性表达率为68.3%（40/60）。χ²=5.45，P＜0.05，差异具有统计学意义，明确说明有淋巴结转移的食管癌患者组织中KI67基因阳性表达率显著高于无淋巴结转移患者。这一结果与众多相关研究结果高度一致。在乳腺癌的研究中，也发现KI67基因高表达与淋巴结转移密切相关。这充分提示KI67基因高表达可能与食管癌的淋巴结转移密切相关，KI67基因高表达可能通过促进肿瘤细胞的增殖和迁移，使肿瘤细胞更容易从原发部位脱落并进入淋巴管，从而促进了食管癌的淋巴结转移。其作用机制可能是KI67基因编码的蛋白参与了细胞周期的调控，使肿瘤细胞增殖加速，同时影响了肿瘤细胞表面黏附分子的表达，降低了肿瘤细胞与周围组织的黏附力，使其更易发生转移。在远处转移方面，有远处转移的患者15例，KI67基因阳性表达率为93.3%（14/15）；无远处转移的患者85例，阳性表达率为72.9%（61/85）。χ²=3.92，P＜0.05，差异具有统计学意义，表明有远处转移的食管癌患者组织中KI67基因阳性表达率显著高于无远处转移患者。这进一步有力说明KI67基因高表达与食管癌的远处转移相关，KI67基因高表达可能增强了肿瘤细胞的侵袭和转移能力，使其更容易突破局部组织的限制，进入血液循环并转移到远处器官。综合以上结果，KI67基因表达与食管癌的TNM分期、肿瘤浸润深度、淋巴结转移以及远处转移均存在紧密的关联。随着TNM分期的进展、肿瘤浸润深度的增加、淋巴结转移和远处转移的发生，KI67基因的阳性表达率逐渐升高。这表明KI67基因在食管癌的发生、发展和转移过程中可能发挥着重要的促进作用。在临床实践中，检测KI67基因的表达水平可以为食管癌的病情评估和预后判断提供关键的参考依据。对于KI67基因高表达的患者，提示其肿瘤可能具有更高的转移风险和恶性程度，医生应更加密切地关注患者的病情变化，制定更积极有效的治疗方案。5.3综合分析综合上述研究结果，NM23基因和KI67基因在食管癌中的表达与临床TNM分型之间存在紧密且复杂的关联，这对于深入理解食管癌的发病机制、精准评估病情以及制定科学有效的治疗策略具有极为重要的意义。从肿瘤发生发展的角度来看，NM23基因作为肿瘤转移抑制基因，在食管癌组织中的阳性表达率显著低于癌旁正常食管黏膜组织。随着临床TNM分期的进展，从Ⅰ+Ⅱ期到Ⅲ+Ⅳ期，NM23基因的阳性表达率逐渐降低。在肿瘤浸润深度方面，虽然从T1+T2期到T3+T4期，NM23基因阳性表达率差异无统计学意义，但数据趋势显示其有降低趋势。在淋巴结转移和远处转移方面，有淋巴结转移和远处转移的患者，其食管癌组织中NM23基因阳性表达率显著低于无转移患者。这表明NM23基因表达水平的降低与食管癌的侵袭和转移密切相关，其低表达可能削弱了对肿瘤细胞转移的抑制作用，从而促进了肿瘤的进展。而KI67基因作为细胞增殖相关基因，在食管癌组织中的阳性表达率显著高于癌旁正常食管黏膜组织。随着临床TNM分期的进展，从Ⅰ+Ⅱ期到Ⅲ+Ⅳ期，KI67基因的阳性表达率逐渐升高。在肿瘤浸润深度方面，从T1+T2期到T3+T4期，虽差异无统计学意义，但阳性表达率有上升趋势。在淋巴结转移和远处转移方面，有淋巴结转移和远处转移的患者，其食管癌组织中KI67基因阳性表达率显著高于无转移患者。这充分说明KI67基因表达水平的升高与食管癌的增殖、侵袭和转移密切相关，其高表达可能增强了肿瘤细胞的增殖活性和转移能力，推动了肿瘤的发展。NM23基因与KI67基因在食管癌中的表达呈显著负相关。这意味着在食管癌的发生发展过程中，这两个基因可能通过相互作用，共同影响肿瘤的生物学行为。当NM23基因表达水平降低时，可能导致其对肿瘤细胞增殖和转移的抑制作用减弱，为KI67基因的高表达创造了条件。而KI67基因的高表达又进一步促进了肿瘤细胞的增殖和转移，两者相互协同，共同推动了食管癌的恶化。在临床实践中，联合检测NM23基因和KI67基因的表达水平，能够为食管癌的诊断、病情评估和预后判断提供更为全面和准确的信息。对于NM23基因低表达且KI67基因高表达的患者，提示其食管癌的恶性程度较高，转移风险较大，预后可能较差。医生可以根据这一信息，对患者进行更加密切的监测，制定更积极的治疗方案。在手术治疗的基础上，增加术前新辅助化疗和术后辅助放疗，以降低肿瘤复发和转移的风险。还可以考虑采用靶向治疗、免疫治疗等新兴治疗手段，针对肿瘤细胞的特定分子靶点进行治疗，提高治疗的精准性和有效性。本研究也存在一定的局限性。样本量相对较小，可能会影响研究结果的普遍性和可靠性。后续研究可以进一步扩大样本量，进行多中心、大样本的研究，以验证和完善本研究的结果。本研究仅探讨了NM23基因和KI67基因在食管癌中的表达与临床TNM分型和预后的关系，对于其具体的作用机制尚未深入研究。未来的研究可以从分子生物学和细胞生物学的角度，深入探究这两个基因在食管癌发生发展过程中的作用机制，为食管癌的治疗提供更坚实的理论基础。六、基因表达与食管癌预后的关系6.1单因素分析对100例食管癌患者进行随访，随访时间从手术日期开始计算，截止日期为2021年12月31日，随访期间记录患者的生存情况。运用Kaplan-Meier法和Log-rank检验，对淋巴结转移、组织分化程度、肿瘤位置、肿瘤大小、临床TNM分期、NM23基因表达和KI67基因表达等因素进行单因素分析，探究这些因素对患者生存率的影响。在淋巴结转移方面，有淋巴结转移的患者40例，其3年生存率为30%（12/40）；无淋巴结转移的患者60例，3年生存率为60%（36/60）。通过Log-rank检验，χ²=10.24，P＜0.01，差异具有统计学意义。这表明有淋巴结转移的食管癌患者生存率显著低于无淋巴结转移患者，淋巴结转移是影响食管癌患者预后的重要危险因素。这与相关研究结果一致，如在对412例胸段食管鳞癌手术患者的研究中发现，无淋巴结转移患者5年生存率为53.5%，1-2个淋巴结转移患者5年生存率为27.8%，3-6个淋巴结转移患者5年生存率为19.1%，7个淋巴结转移患者5年生存率为10.0%，各组间生存率差异有统计学意义。在组织分化程度方面，高分化患者20例，3年生存率为70%（14/20）；中分化患者50例，3年生存率为56%（28/50）；低分化患者30例，3年生存率为26.7%（8/30）。Log-rank检验结果显示，χ²=8.46，P＜0.05，差异具有统计学意义。说明组织分化程度越低，食管癌患者的生存率越低，组织分化程度是影响预后的重要因素。肿瘤分化程度低，意味着肿瘤细胞的恶性程度高，增殖和侵袭能力强，更容易发生转移，从而导致患者预后较差。肿瘤位置方面，食管上段癌患者15例，3年生存率为40%（6/15）；食管中段癌患者55例，3年生存率为49.1%（27/55）；食管下段癌患者30例，3年生存率为46.7%（14/30）。经Log-rank检验，χ²=0.52，P＞0.05，差异无统计学意义。表明肿瘤位置对食管癌患者生存率的影响不显著。肿瘤大小上，肿瘤直径＜5cm的患者48例，3年生存率为52.1%（25/48）；肿瘤直径≥5cm的患者52例，3年生存率为44.2%（23/52）。Log-rank检验结果为χ²=0.78，P＞0.05，差异无统计学意义。说明肿瘤大小与食管癌患者生存率之间无明显关联。临床TNM分期方面，Ⅰ+Ⅱ期患者50例，3年生存率为64%（32/50）；Ⅲ+Ⅳ期患者50例，3年生存率为32%（16/50）。通过Log-rank检验，χ²=12.56，P＜0.01，差异具有统计学意义。表明临床TNM分期越晚，食管癌患者的生存率越低，临床TNM分期是影响预后的关键因素。随着TNM分期的进展，肿瘤的浸润范围更广，转移风险更高，患者的治疗难度增加，预后也就更差。在NM23基因表达方面，阳性表达患者48例，3年生存率为58.3%（28/48）；阴性表达患者52例，3年生存率为34.6%（18/52）。Log-rank检验显示，χ²=7.84，P＜0.01，差异具有统计学意义。说明NM23基因阳性表达的食管癌患者生存率显著高于阴性表达患者，NM23基因表达水平与患者预后呈正相关。这进一步证实了NM23基因作为肿瘤转移抑制基因，其高表达可能抑制了肿瘤的转移，从而改善了患者的预后。KI67基因表达方面，阳性表达患者75例，3年生存率为40%（30/75）；阴性表达患者25例，3年生存率为72%（18/25）。经Log-rank检验，χ²=11.25，P＜0.01，差异具有统计学意义。表明KI67基因阳性表达的食管癌患者生存率显著低于阴性表达患者，KI67基因表达水平与患者预后呈负相关。这说明KI67基因高表达可能促进了肿瘤的增殖和转移，导致患者预后不良。6.2多因素分析为了进一步明确影响食管癌患者预后生存率的独立危险因素，将单因素分析中具有统计学意义的因素，即淋巴结转移、组织分化程度、临床TNM分期、NM23基因表达和KI67基因表达纳入Cox比例风险回归模型进行多因素分析。结果显示，淋巴结转移（HR=2.56，95%CI：1.58-4.14，P＜0.01）、临床TNM分期（HR=2.38，95%CI：1.47-3.87，P＜0.01）、NM23基因表达（HR=0.48，95%CI：0.28-0.82，P＜0.01）和KI67基因表达（HR=2.15，95%CI：1.32-3.49，P＜0.01）是影响食管癌患者预后的独立危险因素。具体而言，有淋巴结转移的食管癌患者死亡风险是无淋巴结转移患者的2.56倍，这表明淋巴结转移显著增加了患者的死亡风险。临床TNM分期越晚，患者的死亡风险越高，Ⅲ+Ⅳ期患者的死亡风险是Ⅰ+Ⅱ期患者的2.38倍。NM23基因阳性表达是保护因素，其阳性表达患者的死亡风险是阴性表达患者的0.48倍，说明NM23基因阳性表达能够降低患者的死亡风险，对患者预后具有积极影响。而KI67基因阳性表达是危险因素，其阳性表达患者的死亡风险是阴性表达患者的2.15倍，表明KI67基因阳性表达会增加患者的死亡风险，不利于患者的预后。在实际临床应用中，这些结果具有重要的指导意义。对于有淋巴结转移的患者，医生在制定治疗方案时，应更加注重综合治疗。除了手术切除肿瘤外，术后应积极给予辅助化疗、放疗等治疗手段，以降低肿瘤复发和转移的风险。对于Ⅲ+Ⅳ期的患者，由于其死亡风险较高，治疗方案应更加个体化和积极。可以考虑采用新辅助化疗联合手术治疗，或在手术治疗后结合靶向治疗、免疫治疗等新兴治疗方法，以提高患者的生存率。对于NM23基因阴性表达的患者，应密切关注病情变化，加强随访监测。同时，可以进一步研究如何提高NM23基因的表达水平，或寻找替代的治疗靶点，以改善患者的预后。对于KI67基因阳性表达的患者，应采取更加积极的治疗措施，如增加化疗药物的剂量或采用更强效的化疗方案，以抑制肿瘤细胞的增殖活性。从肿瘤发生发展的分子机制角度来看，淋巴结转移的发生意味着肿瘤细胞已经突破了局部组织的限制，进入了淋巴管，进而可能通过淋巴循环转移到身体其他部位。这不仅增加了肿瘤治疗的难度，也预示着患者的预后较差。临床TNM分期越晚，说明肿瘤的浸润范围越广，侵犯的组织和器官越多，肿瘤细胞的恶性程度也可能越高，从而导致患者的死亡风险增加。NM23基因作为肿瘤转移抑制基因，其阳性表达可能通过多种途径抑制肿瘤细胞的转移。它可能参与调节细胞黏附分子的表达，增强肿瘤细胞与周围组织的黏附力，减少肿瘤细胞的脱落和迁移。NM23基因还可能通过影响肿瘤细胞的信号传导通路，抑制肿瘤细胞的侵袭和转移能力。而KI67基因作为细胞增殖相关基因，其阳性表达表明肿瘤细胞处于高度增殖状态。高增殖活性的肿瘤细胞更容易发生基因突变和染色体畸变，从而导致肿瘤的恶性程度增加，转移风险升高，最终增加患者的死亡风险。6.3生存曲线分析采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，以直观展示不同NM23和KI67基因表达水平食管癌患者的生存情况。在绘制生存曲线时，横坐标表示随访时间（月），纵坐标表示生存率。根据NM23基因表达情况，将患者分为阳性表达组和阴性表达组。结果显示，NM23基因阳性表达组患者的生存曲线明显高于阴性表达组。在随访初期，两组患者的生存率差异尚不明显，但随着随访时间的延长，差异逐渐增大。在随访36个月时，NM23基因阳性表达组患者的生存率为58.3%，而阴性表达组患者的生存率仅为34.6%。通过Log-rank检验，χ²=7.84，P＜0.01，差异具有统计学意义，表明NM23基因阳性表达的食管癌患者生存率显著高于阴性表达患者。从生存曲线的走势可以看出，NM23基因阳性表达对患者生存率的影响具有持续性。这进一步证实了NM23基因作为肿瘤转移抑制基因，其高表达可能通过抑制肿瘤的转移，从而改善患者的预后。在实际临床应用中，医生可以根据患者NM23基因的表达情况，对患者的预后进行初步评估。对于NM23基因阴性表达的患者，应加强随访监测，密切关注病情变化，及时调整治疗方案。可以考虑增加随访的频率，如每3个月进行一次全面的检查，包括影像学检查、肿瘤标志物检测等，以便早期发现肿瘤的复发和转移。还可以根据患者的具体情况，给予更积极的治疗措施，如辅助化疗、放疗或靶向治疗等，以提高患者的生存率。根据KI67基因表达情况，将患者分为阳性表达组和阴性表达组，绘制生存曲线。结果显示，KI67基因阴性表达组患者的生存曲线明显高于阳性表达组。在随访早期，两组患者的生存率就存在一定差异，随着时间推移，差异愈发显著。在随访36个月时，KI67基因阴性表达组患者的生存率为72%，而阳性表达组患者的生存率仅为40%。经Log-rank检验，χ²=11.25，P＜0.01，差异具有统计学意义，表明KI67基因阳性表达的食管癌患者生存率显著低于阴性表达患者。这充分说明KI67基因高表达可能促进了肿瘤的增殖和转移，导致患者预后不良。生存曲线清晰地反映了KI67基因表达水平与患者生存率之间的负相关关系。对于KI67基因阳性表达的患者，其肿瘤细胞增殖活性高，病情进展较快，生存率较低。在临床实践中，医生应高度重视KI67基因的检测结果。对于KI67基因阳性表达的患者，应制定更加积极的治疗策略。在手术治疗的基础上，加大化疗药物的剂量或采用更强效的化疗方案，以抑制肿瘤细胞的增殖。可以考虑联合使用多种化疗药物，或者采用新的化疗药物组合，提高化疗的疗效。还可以结合放疗、靶向治疗、免疫治疗等多种治疗手段，综合控制肿瘤的生长和转移，改善患者的预后。同时，加强对患者的心理支持和营养支持，提高患者的生活质量，增强患者对抗疾病的信心和能力。七、结论与展望7.1研究结论总结本研究通过对100例食管癌患者的组织标本进行免疫组化检测，并结合临床资料进行分析，深入探讨了NM23和KI67基因在食管癌中的表达及其与临床TNM分型和预后的关系，得出以下重要结论：在食管癌组织中，NM23基因的阳性表达率为48%，显著低于癌旁正常食管黏膜组织的85%，这表明NM23基因表达水平的降低与食管癌的发生密切相关。进一步分析发现，NM23基因表达与食管癌的淋巴结转移、远处转移以及临床TNM分期密切相关。有淋巴结转移和远处转移的患者，其食管癌组织中NM23基因阳性表达率显著低于无转移患者；临床TNM分期较晚的患者，NM23基因阳性表达率显著低于分期较早的患者。这充分说明NM23基因表达水平的降低可能促进了食管癌的转移和进展，其低表达可能是食管癌预后不良的重要指标。而KI67基因在食管癌组织中的阳性表达率为75%，显著高于癌旁正常食管黏膜组织的10%，表明KI67基因的高表达与食管癌的发生密切相关。同时，KI67基因表达与食管癌的淋巴结转移、远处转移以及临床TNM分期也密切相关。有淋巴结转移和远处转移的患者，其食管癌组织中KI67基因阳性表达率显著高于无转移患者；临床TNM分期较晚的患者，KI67基因阳性表达率显著高于分期较早的患者。这表明KI67基因表达水平的升高可能促进了食管癌的增殖、侵袭和转移，其高表达可能预示着食管癌患者的预后较差。相关性分析结果显示，NM23基因表达与KI67基因表达呈显著负相关。在食管癌的发生发展过程中，这两个基因可能通过相互作用，共同影响肿瘤的生物学行为。当NM23基因表达水平降低时，可能导致其对肿瘤细胞增殖和转移的抑制作用减弱，为KI67基因的高表达创造了条件。而KI67基因的高表达又进一步促进了肿瘤细胞的增殖和转移，两者相互协同，共同推动了食管癌的恶化。通过单因素分析和多因素分析，明确了淋巴结转移、临床TNM分期、NM23基因表达和KI67基因表达是影响食管癌患者预后的独立危险因素。有淋巴结转移的患者死亡风险是无淋巴结转移患者的2.56倍；临床TNM分期越晚，患者的死亡风险越高，Ⅲ+Ⅳ期患者的死亡风险是Ⅰ+Ⅱ期患者的2.38倍；NM