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纸层析和薄层层析法2025/8/141主要内容一、纸层析和薄层层析分离过程二、操作技术三、特点及应用2025/8/142一、纸层析和薄层层析分离过程
纸层析和薄层层析也属于色谱分析法。但与其它色谱方法不同的是在分离过程中一般不使用动力源。
纸层析和薄层层析流动相的移动是依靠毛细作用。将试样点在色谱滤纸或层析板的一端,并将该端浸在作为流动相的溶剂(常称之为展开剂)中,随着溶剂向上的移动,经过试样点时,带动试样向上运动。2025/8/143二、操作技术1.层析纸和层析板特制的色层滤纸。按需要剪裁成长条形(或筒型)。层析板是用专门的涂布器把浆状的吸附剂(硅胶或氧化铝,200~250目)均匀地涂在长条形玻璃板上(厚度0.15~0.5mm)。干燥后即可使用。2025/8/1442.展开剂由一种或多种溶剂按一定比例组成。如用纸层析分离氨基酸时,常用的展开剂组成和配比为:正丁醇:乙酸:水=4:1:1。2025/8/1453.点样用微量注射器或玻璃毛细管吸取一定量试样点在原点上。试样点的直径一般应小于5mm。可并排点多个试样同时展开。2025/8/1464.显色、检测有些组份在紫外光照射下产生荧光,可在紫外灯下用铅笔将组份斑点描绘出来。常用的显色方法有喷洒显色剂、碘蒸气熏或氨水熏等。2025/8/147三、特点及应用
平板色谱简单、方便、操作费用低。可以在一块层析板上同时展开多个试样及将多条滤纸同时展开。采用方形薄层板还可以方便的进行二维展开,即按一般方法展开后,改变方向和展开剂再次展开,进一步改善分离效果。试样一般不需要经过预处理即可分离。2025/8/148缺点:
缺点:分离效率较低,不适用挥发性试样分离。定性定量不便。
应用:平板色谱法在染料、农药、医药、有机酸碱类化合物、糖类化合物、氨基酸、蛋白质及中草药中有效成分的分离分析中经常被使用。
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