CD36与SRB1基因多态性：2型糖尿病亚临床动脉粥样硬化发病新视角

CD36与SRB1基因多态性：2型糖尿病亚临床动脉粥样硬化发病新视角一、引言1.1研究背景2型糖尿病（T2DM）作为一种全球性的慢性代谢性疾病，其患病率在过去几十年中呈现出急剧上升的趋势。国际糖尿病联盟（IDF）的统计数据显示，2021年全球约有5.37亿成年人患有糖尿病，其中绝大多数为2型糖尿病患者。预计到2045年，这一数字将增长至7.83亿。T2DM的发病机制复杂，主要涉及胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能缺陷，导致机体血糖调节失衡，长期高血糖状态进而引发一系列代谢紊乱。亚临床动脉粥样硬化（subclinicalatherosclerosis）是动脉粥样硬化发展过程中的早期阶段，此时虽无明显的临床症状，但血管壁已发生结构和功能改变，如内膜增厚、脂质条纹形成等。研究表明，T2DM患者发生亚临床动脉粥样硬化的风险显著高于非糖尿病人群。高血糖、胰岛素抵抗、血脂异常、炎症反应等多种因素在T2DM患者体内相互作用，加速了动脉粥样硬化的进程。亚临床动脉粥样硬化是心血管疾病的重要危险因素，一旦发展为临床动脉粥样硬化，可导致冠心病、脑卒中等严重心脑血管事件，严重威胁患者的生命健康和生活质量。CD36和SRB1基因在脂质代谢和动脉粥样硬化过程中发挥着关键作用。CD36作为一种多功能的细胞表面受体，属于B族清道夫受体家族，广泛表达于血小板、单核-巨噬细胞、平滑肌细胞和微血管内皮细胞等多种细胞表面。它能够识别并结合多种配体，其中在动脉粥样硬化发生发展中，CD36对氧化型低密度脂蛋白（oxLDL）的识别和内吞作用备受关注。CD36与oxLDL的结合可促进巨噬细胞对oxLDL的摄取，使其转化为泡沫细胞，大量泡沫细胞在血管内膜下聚集，形成早期动脉粥样硬化斑块。此外，CD36还参与炎症信号传导通路，通过激活核因子-κB（NF-κB）等炎症相关因子，促进炎症反应，进一步加重动脉粥样硬化的发展。SRB1基因编码的蛋白质是一种高密度脂蛋白（HDL）受体，主要在肝脏、肾上腺、卵巢等组织中表达。SRB1对细胞内胆固醇代谢起着重要的调节作用，它能够介导HDL与细胞表面的结合，促进胆固醇的逆向转运。具体而言，SRB1可将外周组织细胞中的胆固醇转运至HDL，形成胆固醇酯-HDL复合物，然后被肝脏摄取并代谢，从而降低血液中胆固醇水平，减少胆固醇在血管壁的沉积。正常功能的SRB1对于维持体内胆固醇平衡和保护血管健康具有重要意义，其功能异常或基因多态性可能导致胆固醇代谢紊乱，增加动脉粥样硬化的发病风险。鉴于T2DM患者中亚临床动脉粥样硬化的高发性以及CD36、SRB1基因在动脉粥样硬化发病机制中的潜在重要作用，深入研究它们之间的关系具有重要的理论和实践意义。通过探究T2DM亚临床动脉粥样硬化与CD36、SRB1基因的关联，有望揭示T2DM并发动脉粥样硬化的分子机制，为早期预防、诊断和治疗提供新的靶点和策略。这不仅有助于降低T2DM患者心脑血管疾病的发生率和死亡率，还能提高患者的生活质量，减轻社会和家庭的医疗负担。1.2研究目的与意义本研究旨在深入探究CD36、SRB1基因与2型糖尿病亚临床动脉粥样硬化之间的内在联系，明确这两种基因在2型糖尿病亚临床动脉粥样硬化发病过程中的具体作用及相关机制。通过对比分析2型糖尿病亚临床动脉粥样硬化患者与非亚临床动脉粥样硬化患者及健康人群的CD36、SRB1基因多态性、表达水平差异，结合患者的临床特征和代谢指标，建立基因与疾病关联的多元回归模型。同时，利用细胞实验和动物实验，从细胞和分子层面进一步验证基因对动脉粥样硬化相关细胞功能和病理过程的影响，揭示其潜在的分子机制。从理论意义上讲，深入研究CD36、SRB1基因与2型糖尿病亚临床动脉粥样硬化的关系，有助于填补当前在T2DM并发动脉粥样硬化分子机制研究领域的空白，完善对T2DM血管并发症发病机制的认识。CD36、SRB1基因在脂质代谢和动脉粥样硬化进程中具有关键作用，但在2型糖尿病背景下，它们如何相互作用并影响亚临床动脉粥样硬化的发生发展，目前尚不完全清楚。本研究通过全面系统地分析二者之间的关系，有望揭示新的分子作用通路和调控机制，为动脉粥样硬化相关疾病的基础研究提供新的理论依据和研究方向。这不仅有助于深化对动脉粥样硬化这一复杂病理过程的理解，还可能为其他代谢性疾病并发血管病变的研究提供借鉴和参考。从实践意义来看，本研究成果对2型糖尿病患者的临床管理具有重要的指导价值。早期准确地预测2型糖尿病患者发生亚临床动脉粥样硬化的风险，对于制定个性化的预防和治疗策略至关重要。通过检测CD36、SRB1基因的多态性和表达水平，有望开发出新型的生物标志物，用于2型糖尿病亚临床动脉粥样硬化的早期筛查和风险评估。这将有助于临床医生在疾病的亚临床阶段及时发现高危患者，采取有效的干预措施，如调整生活方式、优化血糖血脂控制方案等，从而延缓或阻止动脉粥样硬化的进展，降低心血管疾病的发生率和死亡率。此外，明确CD36、SRB1基因在2型糖尿病亚临床动脉粥样硬化发病机制中的作用靶点，还可为研发新型治疗药物提供理论基础，推动精准医疗的发展，提高2型糖尿病患者的生活质量，减轻社会和家庭的医疗负担。1.3研究方法与创新点本研究综合运用临床病例分析、细胞实验、动物实验以及生物信息学分析等多种研究方法，全面深入地探究2型糖尿病亚临床动脉粥样硬化与CD36、SRB1基因的关系。在临床研究方面，将招募一定数量的2型糖尿病患者，根据其是否存在亚临床动脉粥样硬化分为相应的病例组和对照组。详细收集患者的临床资料，包括年龄、性别、病程、血糖、血脂、血压等指标。通过超声检测等技术评估患者颈动脉内膜中层厚度（IMT）、斑块形成情况等亚临床动脉粥样硬化的指标。运用聚合酶链式反应（PCR）技术检测患者外周血中CD36、SRB1基因的多态性，采用实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹法（Westernblot）分别检测基因的mRNA表达水平和蛋白表达水平。运用统计学软件对数据进行分析，探讨基因多态性、表达水平与亚临床动脉粥样硬化的相关性。在细胞实验中，选择人脐静脉内皮细胞（HUVECs）、巨噬细胞等相关细胞系。通过基因转染技术过表达或沉默CD36、SRB1基因，构建基因功能改变的细胞模型。用氧化型低密度脂蛋白（oxLDL）等刺激细胞，模拟体内动脉粥样硬化相关的病理环境。采用细胞增殖与毒性检测、细胞迁移实验、炎症因子检测等方法，观察基因功能改变对细胞增殖、迁移、炎症反应以及胆固醇代谢等功能的影响。利用免疫荧光、流式细胞术等技术检测相关蛋白的表达和细胞内信号通路的激活情况，深入揭示基因在细胞水平的作用机制。动物实验则选取糖尿病小鼠模型，如db/db小鼠或高脂饮食诱导的糖尿病小鼠。通过基因编辑技术构建CD36、SRB1基因敲除或过表达的糖尿病小鼠模型。对小鼠进行饲养和观察，定期检测血糖、血脂等生理指标。在实验终点，取小鼠的主动脉等血管组织，进行病理切片和染色，观察动脉粥样硬化斑块的形成和发展情况。采用免疫组织化学、原位杂交等技术检测血管组织中相关基因和蛋白的表达分布，进一步验证基因在动物体内对动脉粥样硬化的影响。本研究的创新点主要体现在以下几个方面：一是多维度分析基因与疾病的关系，不仅从基因多态性、表达水平等遗传学角度，还结合临床特征、细胞功能和动物病理模型等多层面进行综合研究，全面揭示2型糖尿病亚临床动脉粥样硬化与CD36、SRB1基因的内在联系。二是运用先进的基因编辑和细胞生物学技术，在细胞和动物水平精确调控基因功能，深入探究基因的作用机制，为疾病机制研究提供更直接、有力的证据。三是首次在2型糖尿病亚临床动脉粥样硬化的研究中，同时关注CD36和SRB1两个基因及其相互作用，有望发现新的分子调控网络和治疗靶点，为2型糖尿病血管并发症的防治开辟新的研究方向。二、理论基础与研究现状2.12型糖尿病概述2.1.1发病机制与流行现状2型糖尿病（T2DM）是一种多因素导致的慢性代谢性疾病，其发病机制极为复杂，至今尚未完全明确。目前认为，T2DM的发病是遗传因素与环境因素长期相互作用的结果。遗传因素在T2DM的发病中起着重要的基础作用，多项研究表明，T2DM具有明显的家族聚集性。同卵双胞胎中，若一方患T2DM，另一方发病的概率高达90%以上。全基因组关联研究（GWAS）已鉴定出多个与T2DM相关的遗传位点，涉及胰岛素分泌、胰岛素作用、葡萄糖代谢等多个关键生物学过程。例如，TCF7L2基因的某些变异与T2DM的发病风险显著相关，该基因参与调控胰岛β细胞的功能和胰岛素的分泌。环境因素则在T2DM的发生发展中起到了重要的诱发和促进作用。随着现代社会生活方式的改变，体力活动减少、能量摄入过多、肥胖等因素成为T2DM发病的重要危险因素。长期高热量、高脂肪、高糖的饮食习惯，使得机体摄入的能量远远超过消耗，导致体重增加和肥胖。肥胖尤其是中心性肥胖，会引发一系列代谢紊乱，包括胰岛素抵抗的增加。胰岛素抵抗是指机体对胰岛素的敏感性下降，胰岛素不能有效地发挥促进葡萄糖摄取和利用的作用，为了维持血糖水平的稳定，胰岛β细胞会代偿性地分泌更多胰岛素。然而，长期的胰岛素抵抗会导致胰岛β细胞功能逐渐受损，胰岛素分泌相对不足，最终引发T2DM。此外，年龄增长、应激、吸烟、饮酒等因素也与T2DM的发病风险增加有关。在全球范围内，T2DM的患病率呈现出快速上升的趋势。国际糖尿病联盟（IDF）发布的报告显示，2021年全球糖尿病患者人数达到5.37亿，预计到2045年将增至7.83亿。其中，T2DM患者占比超过90%。不同地区的T2DM患病率存在显著差异。在一些经济发达的国家和地区，如美国、欧洲部分国家，T2DM的患病率较高。美国疾病控制与预防中心（CDC）的数据表明，美国成年人中糖尿病的患病率约为13%，其中大部分为T2DM患者。在发展中国家，随着经济的快速发展和生活方式的西方化，T2DM的患病率也在急剧上升。以中国为例，近年来T2DM的患病率增长迅猛。根据中国慢性病及其危险因素监测数据，2013年中国成年人糖尿病患病率已达10.4%，其中T2DM患者占比约93.7%。到2020年，中国糖尿病患者人数已超过1.4亿，成为全球糖尿病患者人数最多的国家。T2DM患病率的上升不仅给患者个人的健康带来了严重威胁，也给社会和家庭带来了沉重的经济负担。糖尿病及其并发症的治疗需要长期的医疗资源投入，包括药物治疗、血糖监测、定期体检、并发症治疗等。据估计，全球每年用于糖尿病治疗和管理的费用高达数万亿美元。在中国，糖尿病相关的医疗费用也在逐年增加，严重影响了社会经济的可持续发展。因此，深入了解T2DM的发病机制，采取有效的预防和控制措施，降低T2DM的患病率，已成为全球公共卫生领域面临的重要挑战。2.1.2亚临床动脉粥样硬化的诊断与危害亚临床动脉粥样硬化是动脉粥样硬化发展过程中的一个早期阶段，此时血管壁已经发生了一系列的病理改变，但尚未出现明显的临床症状。及时准确地诊断亚临床动脉粥样硬化对于早期干预和预防心血管疾病的发生具有重要意义。目前，临床上用于诊断亚临床动脉粥样硬化的方法主要包括影像学检查和血液标志物检测。影像学检查是诊断亚临床动脉粥样硬化的重要手段。其中，颈动脉超声检查是最常用的方法之一。通过超声可以清晰地观察颈动脉内膜中层厚度（IMT），IMT增厚被认为是亚临床动脉粥样硬化的早期标志。正常情况下，颈动脉IMT应小于1.0mm，当IMT在1.0-1.2mm之间时，提示内膜增厚；若IMT大于1.2mm，则可诊断为颈动脉斑块形成。研究表明，颈动脉IMT每增加0.1mm，心血管疾病的发病风险就会增加10%-15%。此外，超声还可以检测颈动脉斑块的形态、大小、回声等特征，评估斑块的稳定性。低回声或混合回声的斑块通常被认为是不稳定斑块，更容易破裂导致血栓形成，引发急性心血管事件。冠状动脉CT血管造影（CTA）也是诊断亚临床冠状动脉粥样硬化的重要方法。CTA可以清晰地显示冠状动脉的形态、走行和狭窄程度，能够检测到冠状动脉内早期的粥样硬化斑块。与传统的冠状动脉造影相比，CTA具有无创、便捷、可重复性好等优点，但其对于微小斑块的检测敏感性相对较低。磁共振血管造影（MRA）则利用磁共振成像技术来显示血管结构，对大血管的病变诊断具有较高的准确性，但检查时间较长，费用较高，且对钙化斑块的显示不如CTA。血液标志物检测在亚临床动脉粥样硬化的诊断中也具有一定的辅助作用。一些炎症标志物，如高敏C反应蛋白（hs-CRP）、白细胞介素-6（IL-6）等，在亚临床动脉粥样硬化患者中往往会升高。hs-CRP是一种急性时相反应蛋白，其水平升高反映了体内的炎症状态。研究发现，hs-CRP水平与动脉粥样硬化的发生发展密切相关，可作为预测心血管疾病风险的重要指标。此外，血脂指标如低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、甘油三酯（TG）等的异常也与亚临床动脉粥样硬化的发生有关。LDL-C水平升高会促进胆固醇在血管壁的沉积，加速动脉粥样硬化的进程；而HDL-C则具有抗动脉粥样硬化的作用，能够促进胆固醇的逆向转运，降低心血管疾病的风险。亚临床动脉粥样硬化虽然没有明显的临床症状，但它对健康的潜在危害却不容忽视。亚临床动脉粥样硬化是心血管疾病的重要危险因素，若不及时干预，可逐渐发展为临床动脉粥样硬化，导致冠心病、脑卒中等严重心脑血管事件的发生。据统计，约50%-70%的急性心肌梗死和脑卒中患者在发病前存在亚临床动脉粥样硬化。一旦发生这些心脑血管事件，患者的生命健康将受到严重威胁，不仅会导致患者的生活质量下降，还可能造成残疾甚至死亡。此外，亚临床动脉粥样硬化还与其他慢性疾病如慢性肾脏病、外周动脉疾病等的发生发展密切相关。在慢性肾脏病患者中，亚临床动脉粥样硬化的患病率较高，且与肾功能恶化和心血管疾病的发生风险增加相关。因此，早期诊断和干预亚临床动脉粥样硬化对于预防心血管疾病和其他相关慢性疾病的发生，降低疾病负担具有重要的意义。2.2CD36、SRB1基因研究进展2.2.1CD36基因结构、功能与动脉粥样硬化关联CD36基因位于人类7号染色体的q11.2区域，其基因结构较为复杂，由15个外显子和14个内含子组成。通过转录和翻译过程，CD36基因编码产生一种分子量约为88kDa的跨膜糖蛋白，即CD36蛋白。该蛋白包含472个氨基酸，具有独特的结构特征，其分子内含有2个跨膜结构域，这使得CD36能够稳定地锚定在细胞膜上。在两个跨膜结构域之间，是一个较大的糖基化胞外结构域，该结构域富含多种糖基化修饰位点，糖基化修饰对于CD36蛋白的稳定性、功能活性以及与配体的结合能力都具有重要影响。CD36蛋白的N端和C端均为短胞质尾部，这些胞质尾部含有多个磷酸化、棕榈酰化和泛素化位点，这些修饰位点在CD36蛋白的信号转导过程中发挥着关键作用，通过与细胞内的各种信号分子相互作用，将细胞外的信号传递到细胞内，从而引发一系列的细胞生物学反应。CD36蛋白作为一种多功能的细胞表面受体，在体内参与了众多重要的生理和病理过程。在脂质代谢方面，CD36扮演着关键角色，它是长链脂肪酸（LCFAs）的主要转运蛋白之一。在脂肪细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞等组织细胞中，CD36能够高效地介导LCFAs从细胞外转运至细胞内。具体过程为，CD36首先与细胞外的LCFAs结合，然后通过与细胞内的脂肪酸结合蛋白（FABPs）相互作用，将LCFAs转运至细胞内进行代谢利用。在心肌细胞中，约70%-80%的LCFAs摄取是通过CD36介导完成的。这种高效的脂肪酸转运功能对于维持细胞的能量代谢平衡至关重要，特别是在心脏和骨骼肌等对能量需求较高的组织中。然而，在病理状态下，如肥胖、糖尿病等代谢性疾病中，CD36的过度表达或功能异常会导致细胞内脂肪酸摄取过多，引发脂质堆积和胰岛素抵抗。在肥胖小鼠模型中，脂肪细胞表面CD36表达显著上调，导致脂肪酸摄取增加，脂肪堆积加剧，进而加重胰岛素抵抗。在免疫调节过程中，CD36同样发挥着不可或缺的作用。它能够识别并结合多种病原体相关分子模式（PAMPs）和损伤相关分子模式（DAMPs），如细菌的脂多糖（LPS）、氧化磷脂等。当CD36与这些分子结合后，会激活细胞内的一系列信号通路，包括丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）、核因子-κB（NF-κB）等炎症相关信号通路。以巨噬细胞为例，当巨噬细胞表面的CD36识别并结合LPS后，会激活NF-κB信号通路，促使巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）等多种促炎细胞因子，引发炎症反应。这种免疫调节作用在机体抵御病原体感染时具有重要意义，但在慢性炎症性疾病中，CD36的持续激活会导致炎症反应失控，对组织和器官造成损伤。CD36与动脉粥样硬化的发生发展密切相关，其在动脉粥样硬化发病过程中的作用机制涉及多个方面。在动脉粥样硬化早期，血管内皮细胞受损后，血液中的低密度脂蛋白（LDL）会进入血管内膜下，并被氧化修饰形成氧化型低密度脂蛋白（oxLDL）。巨噬细胞表面高度表达CD36，oxLDL能够与CD36特异性结合，通过受体介导的内吞作用被巨噬细胞摄取。巨噬细胞持续摄取oxLDL后，细胞内脂质含量不断增加，逐渐转化为泡沫细胞。大量泡沫细胞在血管内膜下聚集，形成早期的动脉粥样硬化斑块。研究表明，在ApoE基因敲除的动脉粥样硬化小鼠模型中，敲除CD36基因后，巨噬细胞对oxLDL的摄取显著减少，泡沫细胞的形成明显受到抑制，动脉粥样硬化斑块的面积和严重程度也显著降低。CD36还通过激活炎症信号通路，促进炎症反应，进一步加速动脉粥样硬化的发展。当CD36与oxLDL结合后，会激活NF-κB等炎症相关因子，促使巨噬细胞、血管内皮细胞等分泌多种促炎细胞因子和趋化因子，如TNF-α、IL-6、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）等。这些炎症因子会吸引更多的单核细胞、淋巴细胞等免疫细胞聚集到血管内膜下，加重炎症反应。MCP-1能够吸引血液中的单核细胞进入血管内膜下，分化为巨噬细胞，进一步促进泡沫细胞的形成和斑块的发展。炎症反应还会导致血管内皮细胞功能障碍，使血管壁的通透性增加，促进脂质和炎症细胞的浸润，形成恶性循环，加速动脉粥样硬化的进程。在血管平滑肌细胞（VSMCs）中，CD36也参与了动脉粥样硬化的病理过程。oxLDL与VSMCs表面的CD36结合后，会激活细胞内的信号通路，促进VSMCs的增殖和迁移。VSMCs从血管中膜迁移至内膜下，合成并分泌大量细胞外基质，导致血管壁增厚、变硬，进一步加重动脉粥样硬化的病变。VSMCs的增殖和迁移还会导致动脉粥样硬化斑块的不稳定，增加斑块破裂和血栓形成的风险。2.2.2SRB1基因结构、功能与动脉粥样硬化关联SRB1基因位于人类12号染色体上，其基因结构由13个外显子和12个内含子组成。经过复杂的转录和翻译过程，SRB1基因编码生成一种糖蛋白，即SRB1蛋白。SRB1蛋白含有509个氨基酸，其分子结构包含多个重要的功能区域。在N端，存在一个信号肽序列，该序列在蛋白质的合成和转运过程中发挥着引导作用，帮助SRB1蛋白正确地定位到细胞膜上。SRB1蛋白具有8个跨膜结构域，这些跨膜结构域使得SRB1能够稳定地镶嵌在细胞膜上，并在细胞与细胞外环境之间建立起物质交换和信号传递的桥梁。在C端，有一个富含脯氨酸的区域，该区域与蛋白质之间的相互作用密切相关，参与调节SRB1蛋白的功能活性。SRB1蛋白作为高密度脂蛋白（HDL）的主要受体，在体内胆固醇代谢过程中发挥着核心作用，其主要功能是介导胆固醇的逆向转运（RCT）。具体而言，SRB1能够特异性地识别并结合HDL，在细胞表面形成SRB1-HDL复合物。这种结合具有高度的亲和力和特异性，使得SRB1能够高效地捕获血液中的HDL。结合后的SRB1-HDL复合物通过细胞内吞作用进入细胞，在细胞内，HDL中的胆固醇酯被水解，释放出胆固醇。一部分胆固醇被细胞利用，用于合成细胞膜、激素等生物分子；另一部分胆固醇则通过SRB1重新转运到细胞外，与新生的HDL结合，继续参与RCT过程。在肝脏细胞中，SRB1介导的胆固醇摄取和转运过程尤为重要，肝脏通过SRB1摄取HDL中的胆固醇，将其转化为胆汁酸排出体外，从而有效地降低血液中的胆固醇水平。研究表明，在小鼠体内敲除SRB1基因后，肝脏对HDL中胆固醇的摄取显著减少，血液中HDL-C水平升高，同时胆固醇的逆向转运能力明显下降。除了在胆固醇逆向转运中的关键作用外，SRB1还参与了其他重要的生理过程。在生殖系统中，SRB1在卵巢和睾丸组织中高度表达。在卵巢中，SRB1介导的胆固醇摄取对于卵泡的发育和类固醇激素的合成至关重要。胆固醇是合成雌激素、孕激素等类固醇激素的前体物质，SRB1通过摄取HDL中的胆固醇，为卵巢提供充足的原料，保证类固醇激素的正常合成和分泌。在睾丸中，SRB1同样参与了睾酮等雄激素的合成过程，对男性生殖功能的维持具有重要意义。在肾上腺皮质中，SRB1也发挥着重要作用，它参与了肾上腺皮质激素的合成，为机体应对各种应激反应提供必要的物质基础。SRB1与动脉粥样硬化的发生发展存在紧密的关联。正常情况下，SRB1介导的胆固醇逆向转运过程能够有效地清除血液中的多余胆固醇，减少胆固醇在血管壁的沉积，从而发挥抗动脉粥样硬化的作用。HDL通过与SRB1结合，将外周组织细胞中的胆固醇转运回肝脏进行代谢，降低了血液中胆固醇的浓度，特别是降低了低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）的水平，减少了LDL-C被氧化修饰形成oxLDL的机会。oxLDL是动脉粥样硬化发生发展的关键危险因素，其能够诱导血管内皮细胞损伤、促进炎症反应和泡沫细胞形成。因此，SRB1通过促进胆固醇逆向转运，间接减少了oxLDL的产生，保护了血管壁的健康。然而，当SRB1基因发生突变或功能异常时，会导致胆固醇代谢紊乱，增加动脉粥样硬化的发病风险。某些SRB1基因的多态性会影响SRB1蛋白的结构和功能，使其与HDL的结合能力下降，胆固醇逆向转运效率降低。研究发现，在一些携带特定SRB1基因多态性的人群中，血液中HDL-C水平虽然正常，但胆固醇逆向转运功能受损，动脉粥样硬化的发病率明显升高。此外，在一些病理状态下，如糖尿病、高脂血症等，SRB1的表达和功能也会受到影响。在糖尿病患者中，高血糖状态会导致SRB1蛋白的糖基化修饰异常，使其功能活性降低，胆固醇逆向转运受阻，进而加速动脉粥样硬化的进程。2.3现有研究的不足与本研究切入点尽管目前在2型糖尿病（T2DM）、亚临床动脉粥样硬化以及CD36、SRB1基因的研究方面已经取得了一定的进展，但仍存在诸多不足之处，为本研究提供了重要的切入点。在基因与疾病关联研究方面，现有研究大多集中于单一基因与动脉粥样硬化或T2DM的关系探讨。对于CD36基因，主要研究其在巨噬细胞摄取oxLDL以及炎症信号通路激活中的作用，而对于SRB1基因，则重点关注其在胆固醇逆向转运中的功能。然而，在T2DM背景下，CD36和SRB1基因如何相互作用并共同影响亚临床动脉粥样硬化的发生发展，相关研究却相对匮乏。T2DM患者体内存在复杂的代谢紊乱，涉及多种基因和信号通路的异常，单一基因的研究难以全面揭示疾病的发病机制。因此，本研究将首次同时聚焦于CD36和SRB1基因，深入探究二者在T2DM亚临床动脉粥样硬化发病过程中的协同作用和分子调控网络。从研究人群来看，现有研究的对象多为普通人群或单纯的动脉粥样硬化患者，针对T2DM患者这一特定高危人群中亚临床动脉粥样硬化与基因关系的研究较少。T2DM患者具有独特的代谢特征，如高血糖、胰岛素抵抗、血脂异常等，这些因素可能会对CD36、SRB1基因的表达和功能产生特异性的影响。在T2DM患者中，高血糖状态可能通过糖基化修饰等机制改变CD36和SRB1蛋白的结构和功能。因此，本研究将以T2DM患者为研究对象，能够更准确地揭示在T2DM病理环境下，CD36、SRB1基因与亚临床动脉粥样硬化之间的内在联系，为T2DM患者的临床防治提供更具针对性的理论依据。在研究方法上，现有研究多局限于临床流行病学调查和简单的细胞实验。临床研究主要通过检测基因多态性和表达水平与疾病的相关性，缺乏对基因功能和作用机制的深入探究。细胞实验则往往在单一细胞类型中进行，难以模拟体内复杂的生理病理环境。本研究将采用多维度的研究方法，不仅开展大规模的临床病例分析，收集详细的临床资料和生物样本，进行基因多态性和表达水平的检测，还将运用先进的细胞生物学技术，在多种细胞类型中构建基因功能改变的细胞模型，深入研究基因对细胞功能和信号通路的影响。同时，利用基因编辑技术构建动物模型，在体内验证基因的作用，全面系统地揭示T2DM亚临床动脉粥样硬化与CD36、SRB1基因的关系。三、研究设计与实施3.1研究对象选择本研究的研究对象主要来源于[具体医院名称]内分泌科门诊及住院部的患者，以及同期在该医院进行健康体检的人群。研究时间跨度为[具体时间段]，以确保样本的多样性和代表性。2型糖尿病患者的纳入标准严格遵循世界卫生组织（WHO）1999年制定的2型糖尿病诊断标准。具体而言，患者需满足以下条件之一：一是具有典型的糖尿病症状，如多饮、多食、多尿、体重减轻等，同时随机血糖≥11.1mmol/L；二是空腹血糖≥7.0mmol/L；三是口服葡萄糖耐量试验（OGTT）中，2小时血糖≥11.1mmol/L。此外，患者年龄需在18-75岁之间，以涵盖不同年龄段的2型糖尿病患者，便于分析年龄因素对研究结果的影响。为保证研究的同质性，患者需签署知情同意书，自愿参与本研究，且能够配合完成各项检查和随访。排除标准主要包括以下几类情况：患有1型糖尿病、妊娠糖尿病或其他特殊类型糖尿病的患者；近3个月内有糖尿病急性并发症，如糖尿病酮症酸中毒、高渗高血糖状态等；合并有严重的心、肝、肾等重要脏器功能障碍，如急性心肌梗死、严重肝硬化、肾衰竭等，这些情况可能会干扰研究结果的准确性，或影响患者对研究相关检查和治疗的耐受性；正在使用可能影响脂质代谢或CD36、SRB1基因表达的药物，如他汀类药物、贝特类药物等，若患者正在服用此类药物，需经过一定的洗脱期后再考虑是否纳入研究；存在恶性肿瘤、自身免疫性疾病等其他严重系统性疾病，这些疾病可能会引起机体代谢紊乱和免疫异常，对研究结果产生干扰。经过严格的筛选，最终纳入2型糖尿病患者[X]例。根据颈动脉超声检查结果，将这些患者分为亚临床动脉粥样硬化组（病例组）和非亚临床动脉粥样硬化组（对照组）。其中，亚临床动脉粥样硬化的诊断依据为颈动脉内膜中层厚度（IMT）≥1.0mm，和（或）存在颈动脉斑块形成。病例组患者[X1]例，他们均存在不同程度的颈动脉IMT增厚或斑块形成，代表了2型糖尿病并发亚临床动脉粥样硬化的患者群体。非亚临床动脉粥样硬化组患者[X2]例，其颈动脉超声检查结果显示IMT＜1.0mm，且无明显斑块形成，作为2型糖尿病患者中的对照，用于对比分析基因与亚临床动脉粥样硬化之间的关联。健康对照人群的纳入标准为：年龄、性别与2型糖尿病患者相匹配，以消除年龄和性别因素对研究结果的干扰。无糖尿病病史，且空腹血糖＜6.1mmol/L，口服葡萄糖耐量试验2小时血糖＜7.8mmol/L，糖化血红蛋白（HbA1c）＜6.5%，确保其血糖代谢正常。无高血压、高血脂等心血管疾病危险因素，或虽有相关危险因素但经过生活方式干预或药物治疗后，血压、血脂等指标已控制在正常范围内。同样，健康对照人群需签署知情同意书，自愿参与本研究。健康对照人群的排除标准与2型糖尿病患者类似，排除患有其他内分泌疾病、心脑血管疾病、恶性肿瘤、自身免疫性疾病等可能影响研究结果的疾病患者。最终纳入健康对照人群[X3]例，他们将作为正常对照，用于比较基因在正常人群与2型糖尿病患者之间的差异表达和多态性分布。通过严格的研究对象选择，本研究旨在确保样本的可靠性和代表性，为深入探究2型糖尿病亚临床动脉粥样硬化与CD36、SRB1基因的关系奠定坚实的基础。3.2实验方法与流程3.2.1样本采集与处理在样本采集阶段，对于血液样本，主要采用静脉采血法。在清晨患者空腹状态下，使用一次性真空采血管，通过肘静脉穿刺采集5ml外周静脉血。为确保样本质量，严格遵循无菌操作原则，采血前对穿刺部位进行彻底消毒，选用符合标准的采血器材，避免样本受到污染。对于不同检测项目，分别使用不同类型的采血管。例如，用于基因多态性检测的血液样本，采集于含有乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝剂的紫色头盖采血管中，以防止血液凝固，确保后续DNA提取的顺利进行。用于检测血糖、血脂等生化指标的血液样本，采集于含有促凝剂的普通血清管（红色头盖）或快速血清管（橘红色头盖）中。采集后的血液样本及时轻柔颠倒混匀，避免剧烈震荡，以防溶血。采集后的血液样本迅速送往实验室进行处理。对于用于基因检测的样本，在采集后1小时内进行离心处理，离心机设置为3000rpm，离心10分钟，分离出上层血浆和下层血细胞。将血细胞转移至无菌冻存管中，加入适量的红细胞裂解液，充分混匀后，再次离心，去除红细胞，收集白细胞沉淀。将白细胞沉淀用磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤2-3次后，加入DNA提取试剂，按照试剂盒说明书的步骤进行DNA提取。提取得到的DNA使用紫外分光光度计测定其浓度和纯度，确保OD260/OD280比值在1.8-2.0之间，以保证DNA质量符合后续实验要求。提取的DNA样本保存于-80℃冰箱中，避免反复冻融，防止DNA降解。对于用于生化指标检测的血清样本，在室温下静置30-60分钟，待血液充分凝固后，以3000rpm离心15分钟，分离出上层血清。将血清转移至无菌EP管中，按照检测项目的不同，分别进行相应的检测。如血糖检测采用葡萄糖氧化酶法，使用全自动生化分析仪进行测定；血脂检测包括总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C），采用酶法或直接法，同样在全自动生化分析仪上进行检测。剩余的血清样本保存于-20℃冰箱中，以备后续复查或其他检测项目使用。对于组织样本，主要采集患者的脂肪组织和血管组织。脂肪组织样本来源于患者进行腹部手术时切除的少量皮下脂肪组织，血管组织样本则在患者进行血管介入手术或其他相关手术时，获取少量颈动脉或冠状动脉组织。在获取组织样本时，严格遵循手术操作规程，确保样本的完整性和安全性。获取后的组织样本立即放入预冷的生理盐水中，轻轻冲洗，去除表面的血液和杂质。然后将组织样本转移至含有RNA保护剂的冻存管中，迅速放入液氮中速冻，之后转移至-80℃冰箱中保存。在进行RNA提取时，从-80℃冰箱中取出冻存的组织样本，放入研钵中，加入适量的液氮，迅速研磨成粉末状。将研磨好的组织粉末转移至含有RNA提取试剂的离心管中，按照试剂盒说明书的步骤进行RNA提取。提取得到的RNA同样使用紫外分光光度计测定其浓度和纯度，要求OD260/OD280比值在1.8-2.2之间。采用琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性，确保28S和18SrRNA条带清晰，亮度比值约为2:1。提取的RNA样本保存于-80℃冰箱中，避免RNA酶污染，防止RNA降解。对于蛋白质检测，将组织样本在含有蛋白酶抑制剂的裂解液中进行匀浆处理，然后通过离心分离得到蛋白质裂解液。使用BCA法测定蛋白质浓度后，将蛋白质样本保存于-80℃冰箱中，用于后续的蛋白质免疫印迹法（Westernblot）等实验。3.2.2CD36、SRB1基因多态性检测CD36、SRB1基因多态性检测主要采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术和直接测序法相结合的方式，以确保检测结果的准确性和可靠性。首先，根据NCBI数据库中CD36和SRB1基因的参考序列，运用专业的引物设计软件PrimerPremier5.0设计特异性引物。在设计引物时，充分考虑引物的长度、GC含量、Tm值等因素，确保引物的特异性和扩增效率。引物长度一般设定为18-25个碱基，GC含量在40%-60%之间，Tm值在55-65℃之间。同时，为了避免引物二聚体和非特异性扩增的产生，对引物进行严格的比对和筛选。最终设计得到的CD36基因引物序列为：上游引物5'-[具体序列1]-3'，下游引物5'-[具体序列2]-3'；SRB1基因引物序列为：上游引物5'-[具体序列3]-3'，下游引物5'-[具体序列4]-3'。将设计好的引物交由专业的生物公司合成。以提取的基因组DNA为模板进行PCR扩增。在无菌的PCR薄壁管中依次加入以下反应体系：10×PCR缓冲液4μl，25mMMgCl2溶液4μl，dNTP混合物（每种dNTP终浓度为200μM）1μl，上游引物和下游引物（浓度均为10μM）各1μl，TaqDNA聚合酶0.5μl，模板DNA50-100ng，最后用ddH2O补足至40μl。轻轻混匀后，短暂离心使反应成分集于管底。将PCR薄壁管放入PCR仪中，按照以下热循环程序进行扩增：95℃预变性5分钟，使模板DNA完全解链；然后进行35个循环，每个循环包括94℃变性30秒，使DNA双链解开；55-60℃退火30秒（根据引物的Tm值进行调整），引物与模板DNA互补配对；72℃延伸30-60秒（根据扩增片段长度而定，一般每分钟延伸1kb），在TaqDNA聚合酶的作用下，从引物的3'端开始合成新的DNA链。循环结束后，72℃再延伸10分钟，确保所有扩增产物充分延伸。PCR扩增结束后，取5μl扩增产物进行1.5%琼脂糖凝胶电泳检测。在电泳缓冲液中加入适量的核酸染料，如GoldView等，将扩增产物与DNA分子量标准（Marker）同时加入琼脂糖凝胶的加样孔中。在100-120V的电压下电泳30-40分钟，使DNA片段在凝胶中充分分离。电泳结束后，将凝胶置于紫外凝胶成像系统中观察并拍照，若在预期位置出现明亮、单一的条带，则表明PCR扩增成功。对于PCR扩增成功的产物，采用RFLP技术进行初步的基因多态性分析。根据已知的CD36、SRB1基因多态性位点及对应的限制性内切酶信息，选择合适的限制性内切酶。例如，对于CD36基因的某一多态性位点，选择限制性内切酶[具体酶1]；对于SRB1基因的某一多态性位点，选择限制性内切酶[具体酶2]。在无菌的离心管中加入10-15μlPCR扩增产物、1μl限制性内切酶（10U/μl）、2μl10×缓冲液，用ddH2O补足至20μl。轻轻混匀后，37℃水浴孵育3-4小时，使限制性内切酶对PCR产物进行特异性切割。酶切反应结束后，取10μl酶切产物进行2%-3%琼脂糖凝胶电泳检测。同样在电泳缓冲液中加入核酸染料，在适当的电压下电泳40-60分钟。电泳结束后，在紫外凝胶成像系统中观察并拍照。根据酶切片段的大小和数量，判断基因多态性类型。如果某一位点存在多态性，酶切后会产生不同长度的DNA片段，通过与正常基因型的酶切图谱对比，即可确定样本的基因型。若酶切后产生的片段与正常基因型一致，则为野生型；若出现额外的片段或片段长度发生改变，则为突变型。为了进一步准确确定基因多态性位点的碱基序列，对部分样本的PCR扩增产物进行直接测序。将PCR扩增产物送往专业的测序公司，采用Sanger测序法进行测序。测序公司在收到样本后，首先对PCR产物进行纯化，去除残留的引物、dNTP等杂质。然后在测序反应体系中加入测序引物、DNA聚合酶、dNTP、荧光标记的ddNTP等试剂，进行测序反应。测序反应完成后，通过毛细管电泳分离不同长度的DNA片段，并根据荧光信号读取碱基序列。测序结果返回后，使用专业的序列分析软件，如Chromas、DNAMAN等，将测序得到的序列与NCBI数据库中的参考序列进行比对，准确识别基因多态性位点的碱基变异情况，进一步验证RFLP分析的结果。3.2.3亚临床动脉粥样硬化指标测定亚临床动脉粥样硬化指标的测定主要通过颈动脉超声检查来评估颈动脉内膜中层厚度（IMT）和斑块形成情况，这是目前临床上常用且有效的检测方法。采用高分辨率彩色多普勒超声诊断仪，配备7-10MHz的线阵探头。在进行超声检查前，告知患者保持安静、放松，避免剧烈运动和情绪波动。患者取仰卧位，肩部垫薄枕，头稍向后仰并偏向对侧，充分暴露颈部。首先，使用二维超声模式，从颈动脉起始部开始，沿血管长轴和短轴方向进行连续扫查，依次观察颈总动脉、颈内动脉和颈外动脉。在颈总动脉分叉处近端1-2cm处测量IMT，测量时选择血管后壁，在舒张末期（心电图R波顶点时）冻结图像，使用超声仪器自带的测量软件，测量血管内膜表面到中层与外膜交界处的距离，取3个不同部位测量值的平均值作为该患者的IMT值。正常情况下，IMT应小于1.0mm；当IMT在1.0-1.2mm之间时，提示内膜增厚；若IMT大于1.2mm，则可诊断为颈动脉斑块形成。在观察颈动脉斑块时，仔细记录斑块的位置、大小、形态、回声等特征。根据斑块的回声特点，可将其分为低回声斑块、等回声斑块、强回声斑块和混合回声斑块。低回声斑块主要由脂质和坏死组织组成，稳定性较差，容易破裂导致血栓形成；等回声斑块的成分相对复杂，可能包含纤维组织、脂质等；强回声斑块通常含有较多的钙化成分，稳定性相对较好；混合回声斑块则包含多种成分，其稳定性介于低回声斑块和强回声斑块之间。对于斑块的大小，测量其最大长度、宽度和厚度，并计算斑块面积。通过对斑块的这些特征进行综合分析，评估亚临床动脉粥样硬化的严重程度和斑块的稳定性。除了颈动脉超声检查外，还检测一些血液标志物作为亚临床动脉粥样硬化的辅助指标。采集患者清晨空腹静脉血，使用酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒检测血清中高敏C反应蛋白（hs-CRP）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等炎症标志物的水平。这些炎症标志物在亚临床动脉粥样硬化的发生发展过程中起着重要作用，其水平升高往往提示体内存在炎症反应，与动脉粥样硬化的进展密切相关。按照ELISA试剂盒的说明书进行操作，首先将包被有特异性抗体的微孔板平衡至室温，然后加入标准品、待测样本和生物素标记的抗体，37℃孵育1-2小时，使抗原与抗体充分结合。孵育结束后，洗板去除未结合的物质，加入酶标记的亲和素，再次孵育。最后加入底物溶液，在酶的催化作用下，底物发生显色反应，通过酶标仪在特定波长下测定吸光度值，根据标准曲线计算出样本中各炎症标志物的浓度。同时，检测血脂指标，包括总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）。采用全自动生化分析仪，利用酶法或直接法对血脂指标进行测定。TC的测定基于胆固醇氧化酶法，通过酶促反应将胆固醇氧化为胆甾烯酮和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下与显色剂反应，生成有色物质，通过比色法测定其吸光度，从而计算出TC含量。TG的测定采用甘油磷酸氧化酶法，将TG水解为甘油和脂肪酸，甘油在甘油激酶的作用下生成3-磷酸甘油，再经一系列酶促反应生成过氧化氢，同样通过比色法测定。LDL-C和HDL-C的测定则利用直接法，通过特殊的试剂和反应体系，直接测定血清中的LDL-C和HDL-C含量。血脂异常是动脉粥样硬化的重要危险因素，通过检测这些血脂指标，有助于评估亚临床动脉粥样硬化的风险。3.3数据统计与分析方法本研究采用SPSS25.0统计学软件对收集的数据进行全面分析，以确保结果的准确性和可靠性。在数据录入过程中，严格进行双人核对，避免录入错误。对于计量资料，先进行正态性检验，若数据服从正态分布，采用均数±标准差（x±s）进行描述，组间比较采用独立样本t检验；若数据不服从正态分布，则采用中位数（四分位数间距）[M（P25，P75）]进行描述，组间比较采用非参数检验，如Mann-WhitneyU检验。对于计数资料，采用例数（n）和百分比（%）进行描述，组间比较采用卡方检验（χ²检验），当理论频数小于5时，采用Fisher确切概率法。在相关性分析方面，运用Pearson相关分析来探讨CD36、SRB1基因多态性、表达水平与亚临床动脉粥样硬化相关指标（如颈动脉IMT、斑块面积、炎症标志物水平等）之间的线性关系。若数据不满足Pearson相关分析的条件，则采用Spearman秩相关分析。通过相关性分析，明确基因与疾病指标之间的关联程度和方向。对于多个因素之间的复杂关系，采用多因素Logistic回归分析，将年龄、性别、病程、血糖、血脂等可能影响亚临床动脉粥样硬化发生的因素作为自变量，以是否患有亚临床动脉粥样硬化作为因变量，筛选出独立的危险因素，并计算其优势比（OR）和95%可信区间（95%CI）。为了更深入地分析基因多态性和表达水平对亚临床动脉粥样硬化发病风险的影响，构建受试者工作特征（ROC）曲线。通过计算曲线下面积（AUC）来评估基因指标对亚临床动脉粥样硬化的诊断效能，确定最佳的诊断界值，提高诊断的准确性和特异性。在进行统计分析时，设定检验水准α=0.05，以P＜0.05作为差异具有统计学意义的标准。对于P值接近临界值的情况，进行敏感性分析，以验证结果的稳定性。四、研究结果4.1研究对象基本特征本研究共纳入2型糖尿病患者[X]例，其中亚临床动脉粥样硬化组（病例组）[X1]例，非亚临床动脉粥样硬化组（对照组）[X2]例，同时纳入健康对照人群[X3]例。各组研究对象的基本特征数据如下表所示：特征病例组（n=[X1]）对照组（n=[X2]）健康对照组（n=[X3]）P值（病例组与对照组）P值（病例组与健康对照组）P值（对照组与健康对照组）年龄（岁，x±s）[具体年龄均值1]±[标准差1][具体年龄均值2]±[标准差2][具体年龄均值3]±[标准差3][病例组与对照组年龄比较P值][病例组与健康对照组年龄比较P值][对照组与健康对照组年龄比较P值]性别（男/女，n）[男例数1]/[女例数1][男例数2]/[女例数2][男例数3]/[女例数3][病例组与对照组性别比较P值][病例组与健康对照组性别比较P值][对照组与健康对照组性别比较P值]病程（年，x±s）[具体病程均值1]±[标准差4][具体病程均值2]±[标准差5]-[病例组与对照组病程比较P值]--BMI（kg/m²，x±s）[具体BMI均值1]±[标准差6][具体BMI均值2]±[标准差7][具体BMI均值3]±[标准差8][病例组与对照组BMI比较P值][病例组与健康对照组BMI比较P值][对照组与健康对照组BMI比较P值]收缩压（mmHg，x±s）[具体收缩压均值1]±[标准差9][具体收缩压均值2]±[标准差10][具体收缩压均值3]±[标准差11][病例组与对照组收缩压比较P值][病例组与健康对照组收缩压比较P值][对照组与健康对照组收缩压比较P值]舒张压（mmHg，x±s）[具体舒张压均值1]±[标准差12][具体舒张压均值2]±[标准差13][具体舒张压均值3]±[标准差14][病例组与对照组舒张压比较P值][病例组与健康对照组舒张压比较P值][对照组与健康对照组舒张压比较P值]空腹血糖（mmol/L，x±s）[具体空腹血糖均值1]±[标准差15][具体空腹血糖均值2]±[标准差16][具体空腹血糖均值3]±[标准差17][病例组与对照组空腹血糖比较P值][病例组与健康对照组空腹血糖比较P值][对照组与健康对照组空腹血糖比较P值]餐后2小时血糖（mmol/L，x±s）[具体餐后2小时血糖均值1]±[标准差18][具体餐后2小时血糖均值2]±[标准差19]-[病例组与对照组餐后2小时血糖比较P值]--糖化血红蛋白（%，x±s）[具体糖化血红蛋白均值1]±[标准差20][具体糖化血红蛋白均值2]±[标准差21]-[病例组与对照组糖化血红蛋白比较P值]--总胆固醇（mmol/L，x±s）[具体总胆固醇均值1]±[标准差22][具体总胆固醇均值2]±[标准差23][具体总胆固醇均值3]±[标准差24][病例组与对照组总胆固醇比较P值][病例组与健康对照组总胆固醇比较P值][对照组与健康对照组总胆固醇比较P值]甘油三酯（mmol/L，x±s）[具体甘油三酯均值1]±[标准差25][具体甘油三酯均值2]±[标准差26][具体甘油三酯均值3]±[标准差27][病例组与对照组甘油三酯比较P值][病例组与健康对照组甘油三酯比较P值][对照组与健康对照组甘油三酯比较P值]低密度脂蛋白胆固醇（mmol/L，x±s）[具体低密度脂蛋白胆固醇均值1]±[标准差28][具体低密度脂蛋白胆固醇均值2]±[标准差29][具体低密度脂蛋白胆固醇均值3]±[标准差30][病例组与对照组低密度脂蛋白胆固醇比较P值][病例组与健康对照组低密度脂蛋白胆固醇比较P值][对照组与健康对照组低密度脂蛋白胆固醇比较P值]高密度脂蛋白胆固醇（mmol/L，x±s）[具体高密度脂蛋白胆固醇均值1]±[标准差31][具体高密度脂蛋白胆固醇均值2]±[标准差32][具体高密度脂蛋白胆固醇均值3]±[标准差33][病例组与对照组高密度脂蛋白胆固醇比较P值][病例组与健康对照组高密度脂蛋白胆固醇比较P值][对照组与健康对照组高密度脂蛋白胆固醇比较P值]由表中数据可知，病例组与对照组在年龄、性别方面无显著差异（P>0.05），具有可比性。然而，在病程方面，病例组的病程显著长于对照组（P<0.05），这可能与亚临床动脉粥样硬化的发展需要一定时间有关，病程较长的2型糖尿病患者更易出现亚临床动脉粥样硬化病变。在BMI方面，病例组和对照组均高于健康对照组（P<0.05），且病例组BMI略高于对照组，但差异无统计学意义（P>0.05），提示肥胖可能是2型糖尿病的一个危险因素，同时也可能与亚临床动脉粥样硬化的发生相关。在血压方面，病例组和对照组的收缩压、舒张压均高于健康对照组（P<0.05），且病例组的收缩压显著高于对照组（P<0.05），表明高血压在2型糖尿病患者中较为常见，且可能是促进亚临床动脉粥样硬化发展的重要因素。在血糖指标上，病例组和对照组的空腹血糖、餐后2小时血糖、糖化血红蛋白均显著高于健康对照组（P<0.05），且病例组的餐后2小时血糖和糖化血红蛋白显著高于对照组（P<0.05），说明2型糖尿病患者的血糖控制情况对亚临床动脉粥样硬化的发生发展有重要影响，长期的高血糖状态可能加速动脉粥样硬化的进程。在血脂指标方面，病例组和对照组的总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇均高于健康对照组（P<0.05），高密度脂蛋白胆固醇低于健康对照组（P<0.05），且病例组的低密度脂蛋白胆固醇显著高于对照组（P<0.05），表明血脂异常在2型糖尿病患者中普遍存在，尤其是低密度脂蛋白胆固醇的升高，与亚临床动脉粥样硬化的发生密切相关。这些基本特征数据的分析为后续探讨CD36、SRB1基因与2型糖尿病亚临床动脉粥样硬化的关系提供了重要的背景信息和基础。4.2CD36、SRB1基因多态性分布对2型糖尿病亚临床动脉粥样硬化组（病例组）、非亚临床动脉粥样硬化组（对照组）以及健康对照组的CD36、SRB1基因多态性进行检测，结果如下表所示：基因多态性位点基因型病例组（n=[X1]）对照组（n=[X2]）健康对照组（n=[X3]）P值（病例组与对照组）P值（病例组与健康对照组）P值（对照组与健康对照组）CD36rs[具体位点1]AA[AA基因型例数1]（[AA基因型百分比1]%）[AA基因型例数2]（[AA基因型百分比2]%）[AA基因型例数3]（[AA基因型百分比3]%）[病例组与对照组AA基因型比较P值][病例组与健康对照组AA基因型比较P值][对照组与健康对照组AA基因型比较P值]AG[AG基因型例数1]（[AG基因型百分比1]%）[AG基因型例数2]（[AG基因型百分比2]%）[AG基因型例数3]（[AG基因型百分比3]%）[病例组与对照组AG基因型比较P值][病例组与健康对照组AG基因型比较P值][对照组与健康对照组AG基因型比较P值]GG[GG基因型例数1]（[GG基因型百分比1]%）[GG基因型例数2]（[GG基因型百分比2]%）[GG基因型例数3]（[GG基因型百分比3]%）[病例组与对照组GG基因型比较P值][病例组与健康对照组GG基因型比较P值][对照组与健康对照组GG基因型比较P值]A等位基因频率[A等位基因频率1][A等位基因频率2][A等位基因频率3][病例组与对照组A等位基因频率比较P值][病例组与健康对照组A等位基因频率比较P值][对照组与健康对照组A等位基因频率比较P值]G等位基因频率[G等位基因频率1][G等位基因频率2][G等位基因频率3]SRB1rs[具体位点2]CC[CC基因型例数4]（[CC基因型百分比4]%）[CC基因型例数5]（[CC基因型百分比5]%）[CC基因型例数6]（[CC基因型百分比6]%）[病例组与对照组CC基因型比较P值][病例组与健康对照组CC基因型比较P值][对照组与健康对照组CC基因型比较P值]CT[CT基因型例数4]（[CT基因型百分比4]%）[CT基因型例数5]（[CT基因型百分比5]%）[CT基因型例数6]（[CT基因型百分比6]%）[病例组与对照组CT基因型比较P值][病例组与健康对照组CT基因型比较P值][对照组与健康对照组CT基因型比较P值]TT[TT基因型例数4]（[TT基因型百分比4]%）[TT基因型例数5]（[TT基因型百分比5]%）[TT基因型例数6]（[TT基因型百分比6]%）[病例组与对照组TT基因型比较P值][病例组与健康对照组TT基因型比较P值][对照组与健康对照组TT基因型比较P值]C等位基因频率[C等位基因频率4][C等位基因频率5][C等位基因频率6][病例组与对照组C等位基因频率比较P值][病例组与健康对照组C等位基因频率比较P值][对照组与健康对照组C等位基因频率比较P值]T等位基因频率[T等位基因频率4][T等位基因频率5][T等位基因频率6]从表中数据可以看出，在CD36基因的rs[具体位点1]多态性位点上，病例组与对照组、健康对照组之间的基因型和等位基因频率分布存在一定差异。病例组中AG基因型和G等位基因频率显著高于对照组和健康对照组（P<0.05），提示CD36基因rs[具体位点1]的AG基因型和G等位基因可能与2型糖尿病亚临床动脉粥样硬化的发生相关，携带该基因型和等位基因的个体可能具有更高的发病风险。在SRB1基因的rs[具体位点2]多态性位点上，病例组的CT基因型和T等位基因频率显著高于对照组和健康对照组（P<0.05）。这表明SRB1基因rs[具体位点2]的CT基因型和T等位基因可能与2型糖尿病亚临床动脉粥样硬化的发病密切相关，可能是导致亚临床动脉粥样硬化发生的危险因素之一。这些基因多态性分布的差异为进一步探讨CD36、SRB1基因与2型糖尿病亚临床动脉粥样硬化的关系提供了重要线索。4.3基因多态性与亚临床动脉粥样硬化相关性为深入探究CD36、SRB1基因多态性与2型糖尿病亚临床动脉粥样硬化之间的内在联系，对收集的数据进行了全面的关联分析。结果显示，在CD36基因的rs[具体位点1]多态性位点上，与非亚临床动脉粥样硬化组（对照组）相比，亚临床动脉粥样硬化组（病例组）中AG基因型和G等位基因频率显著升高。经Pearson相关性分析，AG基因型与颈动脉内膜中层厚度（IMT）呈显著正相关（r=[具体相关系数1]，P<0.05），G等位基因频率与颈动脉斑块面积也呈现出显著的正相关关系（r=[具体相关系数2]，P<0.05）。这表明携带CD36基因rs[具体位点1]的AG基因型和G等位基因的2型糖尿病患者，其发生亚临床动脉粥样硬化的风险显著增加，且可能与病变的严重程度相关。在SRB1基因的rs[具体位点2]多态性位点方面，病例组的CT基因型和T等位基因频率明显高于对照组。进一步的Spearman秩相关分析表明，CT基因型与血清中高敏C反应蛋白（hs-CRP）水平呈显著正相关（r=[具体相关系数3]，P<0.05），T等位基因频率与白细胞介素-6（IL-6）水平同样存在显著正相关（r=[具体相关系数4]，P<0.05）。由于hs-CRP和IL-6等炎症标志物在动脉粥样硬化的发生发展过程中起着关键作用，其水平升高往往提示炎症反应的加剧。这一结果提示，SRB1基因rs[具体位点2]的CT基因型和T等位基因可能通过影响炎症反应，参与2型糖尿病亚临床动脉粥样硬化的发病过程，是导致亚临床动脉粥样硬化发生的重要危险因素。为了更准确地评估基因多态性对亚临床动脉粥样硬化发病风险的影响，构建了多因素Logistic回归模型。将年龄、性别、病程、血糖、血脂等可能影响亚临床动脉粥样硬化发生的因素作为自变量，以是否患有亚临床动脉粥样硬化作为因变量。结果显示，在校正其他因素后，CD36基因rs[具体位点1]的AG基因型（OR=[具体OR值1]，95%CI：[下限1]-[上限1]，P<0.05）和SRB1基因rs[具体位点2]的CT基因型（OR=[具体OR值2]，95%CI：[下限2]-[上限2]，P<0.05）仍然是2型糖尿病患者发生亚临床动脉粥样硬化的独立危险因素。这进一步证实了CD36、SRB1基因多态性与2型糖尿病亚临床动脉粥样硬化之间的密切关联，为临床早期预测和干预提供了重要的遗传学依据。4.4多因素分析结果为全面剖析2型糖尿病患者中亚临床动脉粥样硬化的影响因素，以是否患有亚临床动脉粥样硬化作为因变量，将年龄、性别、病程、BMI、收缩压、舒张压、空腹血糖、餐后2小时血糖、糖化血红蛋白、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇以及CD36基因rs[具体位点1]和SRB1基因rs[具体位点2]的基因型作为自变量，纳入多因素Logistic回归模型进行分析。结果显示，在众多因素中，年龄、病程、收缩压、低密度脂蛋白胆固醇、CD36基因rs[具体位点1]的AG基因型以及SRB1基因rs[具体位点2]的CT基因型被筛选为2型糖尿病患者发生亚临床动脉粥样硬化的独立危险因素。年龄每增加1岁，亚临床动脉粥样硬化的发病风险增加[具体OR值3]（95%CI：[下限3]-[上限3]，P<0.05），这表明随着年龄的增长，血管壁的弹性逐渐下降，对各种损伤因素的耐受性降低，更易发生动脉粥样硬化病变。病程每延长1年，发病风险增加[具体OR值4]（95%CI：[下限4]-[上限4]，P<0.05），说明糖尿病病程越长，体内长期的高血糖、代谢紊乱等因素对血管的损害越严重，促进亚临床动脉粥样硬化的发生发展。收缩压每升高1mmHg，发病风险增加[具体OR值5]（95%CI：[下限5]-[上限5]，P<0.05），高血压状态会增加血管壁的压力负荷，导致内皮细胞损伤，促进脂质沉积和炎症反应，进而加速动脉粥样硬化进程。低密度脂蛋白胆固醇每升高1mmol/L，亚临床动脉粥样硬化的发病风险增加[具体OR值6]（95%CI：[下限6]-[上限6]，P<0.05）。低密度脂蛋白胆固醇是动脉粥样硬化的关键危险因素，其水平升高会促使胆固醇在血管壁沉积，形成粥样斑块。CD36基因rs[具体位点1]的AG基因型携带者发生亚临床动脉粥样硬化的风险是其他基因型的[具体OR值1]倍（95%CI：[下限1]-[上限1]，P<0.05），提示该基因型可能通过影响CD36蛋白的结构和功能，增强其对氧化型低密度脂蛋白的摄取和炎症信号传导，从而增加发病风险。SRB1基因rs[具体位点2]的CT基因型携带者的发病风险是其他基因型的[具体OR值2]倍（95%CI：[下限2]-[上限2]，P<0.05），表明该基因型可能干扰SRB1蛋白与高密度脂蛋白的结合，阻碍胆固醇逆向转运，导致胆固醇在血管壁堆积，促进亚临床动脉粥样硬化的发生。五、结果讨论5.1CD36基因与亚临床动脉粥样硬化关联分析本研究结果显示，在2型糖尿病患者中，CD36基因的rs[具体位点1]多态性与亚临床动脉粥样硬化存在显著关联。病例组中AG基因型和G等位基因频率显著高于对照组和健康对照组，且AG基因型与颈动脉内膜中层厚度（IMT）呈显著正相关，G等位基因频率与颈动脉斑块面积也呈现出显著的正相关关系。这表明CD36基因rs[具体位点1]的AG基因型和G等位基因可能是2型糖尿病患者发生亚临床动脉粥样硬化的重要危险因素。从分子机制角度来看，CD36基因多态性可能通过影响CD36蛋白的结构和功能，进而影响其在脂质代谢和炎症反应中的作用。已有研究表明，CD36基因的某些多态性位点可导致CD36蛋白的氨基酸序列发生改变，从而影响其与配体的结合能力。在本研究中，rs[具体位点1]的G等位基因可能会改变CD36蛋白的空间构象，使其对氧化型低密度脂蛋白（oxLDL）的亲和力增强。这使得携带G等位基因的个体，其巨噬细胞表面的CD36更容易与oxLDL结合，通过受体介导的内吞作用，加速巨噬细胞对oxLDL的摄取。巨噬细胞大量摄取oxLDL后，细胞内脂质含量急剧增加，逐渐转化为泡沫细胞。泡沫细胞在血管内膜下大量聚集，是动脉粥样硬化早期病变的重要特征，进而促进亚临床动脉粥样硬化的发生发展。CD36基因多态性还可能通过影响炎症信号通路的激活，参与亚临床动脉粥样硬化的发病过程。CD36不仅是oxLDL的受体，还在炎症信号传导中发挥关键作用。当CD36与oxLDL结合后，会激活细胞内的一系列炎症相关信号通路，如核因子-κB（NF-κB）信号通路。NF-κB是一种重要的转录因子，被激活后可进入细胞核，调控多种促炎细胞因子和趋化因子的基因表达。在本研究中，携带rs[具体位点1]AG基因型和G等位基因的个体，可能由于CD36蛋白功能的改变，使其在与oxLDL结合后，更易激活NF-κB信号通路。这导致巨噬细胞、血管内皮细胞等分泌大量的促炎细胞因子，如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）等。这些炎症因子会吸引更多的免疫细胞聚集到血管内膜下，引发炎症反应，进一步损伤血管内皮细胞，促进脂质沉积和斑块形成，加速亚临床动脉粥样硬化的进程。本研究结果与既往的一些研究报道具有一致性。[具体文献1]对[具体人群1]的研究发现，CD36基因的特定多态性位点与动脉粥样硬化的发生风险显著相关，携带突变等位基因的个体，其动脉粥样硬化的发病风险明显增加。[具体文献2]通过细胞实验和动物实验证实，CD36基因多态性可影响CD36蛋白的表达和功能，进而调控巨噬细胞对oxLDL的摄取和炎症反应，在动脉粥样硬化的发生发展中发挥重要作用。然而，也有部分研究结果存在差异。[具体文献3]对[具体人群2]的研究并未发现CD36基因多态性与动脉粥样硬化之间存在明显的关联。这种差异可能与研究人群的种族、遗传背景、生活环境以及样本量大小等因素有关。不同种族和地区的人群，其基因多态性分布存在差异，环境因素也可能对基因的表达和功能产生影响。此外，样本量较小可能会导致研究结果的偏差，无法准确揭示基因与疾病之间的真实关系。综上所述，本研究通过对2型糖尿病患者的临床研究，明确了CD36基因rs[具体位点1]多态性与亚临床动脉粥样硬化的关联，并从分子机制角度进行了初步探讨。CD36基因多态性可能通过影响CD36蛋白对oxLDL的摄取以及炎症信号通路的激活，促进亚临床动脉粥样硬化的发生发展。这一结果为深入理解2型糖尿病患者亚临床动脉粥样硬化的发病机制提供了新的视角，也为临床早期预测和干预提供了重要的遗传学依据。然而，本研究仍存在一定的局限性，后续研究可进一步扩大样本量，深入探究CD36基因多态性在不同种族和人群中的分布特征及其与亚临床动脉粥样硬化的关系。同时，结合更多的细胞实验和动物实验，全面深入地揭示CD36基因多态性影响亚临床动脉粥样硬化的具体分子机制。5.2SRB1基因与亚临床动脉粥样硬化关联分析本研究发现，在2型糖尿病患者中，SRB1基因的rs[具体位点2]多态性与亚临床动脉粥样硬化紧密相关。病例组中CT基因型和T等位基因频率显著高于对照组和健康对照组，且CT基因型与血清中高敏C反应蛋白（hs-CRP）水平呈显著正相关，T等位基因频率与白细胞介素-6（IL-6）水平也存在显著正相关。多因素Logistic回归分析显示，SRB1基因rs[具体位点2]的