2025浙江省pcr上岗证考试题库及答案

2025浙江省pcr上岗证考试题库及答案

一、单项选择题（每题2分，共10题）1.PCR技术的主要发明人是（）A.KaryMullisB.JamesWatsonC.FrancisCrickD.RosalindFranklin答案：A2.在PCR反应中，起延伸作用的酶是（）A.限制酶B.DNA连接酶C.TaqDNA聚合酶D.逆转录酶答案：C3.PCR反应的变性温度一般为（）A.90-95℃B.70-75℃C.50-55℃D.30-35℃答案：A4.以下哪种物质不是PCR反应的基本成分（）A.模板DNAB.dNTPC.RNA聚合酶D.引物答案：C5.引物在PCR反应中的主要作用是（）A.提供起始合成的3'-OH末端B.提供起始合成的5'-OH末端C.连接两条DNA链D.切割DNA链答案：A6.PCR反应中，引物的长度一般为（）A.5-10个核苷酸B.15-30个核苷酸C.40-50个核苷酸D.60-80个核苷酸答案：B7.以下关于PCR循环次数的说法正确的是（）A.循环次数越多越好B.循环次数过少会导致产物量不足C.一般循环次数为1-5次D.循环次数与产物量无关答案：B8.在进行PCR产物分析时，琼脂糖凝胶电泳中常用的染色剂是（）A.考马斯亮蓝B.溴化乙锭C.银染D.甲基绿答案：B9.如果PCR反应没有得到预期的产物，可能的原因不包括（）A.引物设计错误B.模板DNA量过少C.反应体系中存在抑制物D.电泳电压过高答案：D10.对于高GC含量的模板进行PCR扩增时，可采取的措施是（）A.提高退火温度B.降低退火温度C.增加延伸时间D.减少循环次数答案：A二、多项选择题（每题2分，共10题）1.PCR技术的特点包括（）A.特异性强B.灵敏度高C.操作简便D.适用范围广答案：ABCD2.以下哪些是影响PCR反应的因素（）A.模板纯度B.引物浓度C.Mg2+浓度D.退火温度答案：ABCD3.PCR的应用领域有（）A.基因诊断B.法医学鉴定C.古生物学研究D.转基因检测答案：ABCD4.下列关于PCR引物设计原则的说法正确的是（）A.引物长度适中B.避免引物自身形成二级结构C.引物间避免互补D.G+C含量在40%-60%之间答案：ABCD5.PCR反应体系中的缓冲液作用包括（）A.提供合适的pH值B.提供离子环境C.稳定酶活性D.促进引物与模板结合答案：ABC6.在进行PCR产物检测时，可以采用的方法有（）A.琼脂糖凝胶电泳B.聚丙烯酰胺凝胶电泳C.荧光定量PCRD.酶切分析答案：ABCD7.以下属于PCR衍生技术的是（）A.反向PCRB.巢式PCRC.多重PCRD.实时荧光PCR答案：ABCD8.导致PCR出现假阳性结果的原因可能有（）A.污染B.引物二聚体形成C.非特异性扩增D.模板DNA变异答案：AC9.进行PCR实验时，实验室的基本要求包括（）A.分区明确B.有通风设备C.防止污染措施D.稳定的电力供应答案：ABCD10.以下关于实时荧光PCR的说法正确的是（）A.可实时监测反应进程B.有较高的灵敏度C.分为荧光染料法和荧光探针法D.不需要进行电泳检测答案：ABCD三、判断题（每题2分，共10题）1.PCR反应可以直接以RNA为模板进行扩增。（）答案：错误2.TaqDNA聚合酶的最适温度为72℃左右。（）答案：正确3.引物的3'端与模板的互补性要求不高。（）答案：错误4.PCR反应中，dNTP浓度越高越好。（）答案：错误5.琼脂糖凝胶电泳中，DNA分子向正极移动。（）答案：正确6.所有的DNA聚合酶都可以用于PCR反应。（）答案：错误7.巢式PCR可以提高PCR的特异性。（）答案：正确8.荧光定量PCR只能用于定量分析，不能进行定性分析。（）答案：错误9.在PCR反应中，退火温度越高，引物与模板的结合越特异性。（）答案：正确10.只要PCR产物条带单一，就说明没有非特异性扩增。（）答案：错误四、简答题（每题5分，共4题）1.简述PCR反应的基本原理。答案：PCR即聚合酶链反应，以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板5'端和3'端互补的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA合成，重复这一过程，即可使目的DNA片段得到扩增。2.简述引物设计的主要注意事项。答案：引物长度应适中，一般15-30个核苷酸；避免引物自身形成二级结构；引物间避免互补；G+C含量在40%-60%之间；引物3'端与模板严格互补等。3.说出至少三种PCR产物检测的方法及原理。答案：琼脂糖凝胶电泳，根据DNA分子大小在电场中迁移速度不同来分离产物；聚丙烯酰胺凝胶电泳，基于分子筛效应分离不同大小的DNA；荧光定量PCR，通过检测荧光信号实时监测产物量。4.简述在PCR实验中防止污染的主要措施。答案：严格进行实验室分区，如试剂准备区、样本制备区、扩增区等；实验人员操作规范，如使用一次性耗材、勤换手套；定期对实验室进行清洁和消毒等。五、讨论题（每题5分，共4题）1.讨论PCR技术在新型冠状病毒检测中的应用及意义。答案：PCR技术可快速检测新冠病毒核酸。其高灵敏度和特异性能够准确识别病毒，有助于早期发现感染者，控制疫情传播，对公共卫生决策、隔离治疗等方面有着重要意义。2.如何提高PCR反应的特异性？答案：优化引物设计，保证引物特异性；调整退火温度，合适温度可减少非特异性结合；采用巢式PCR等衍生技术等。3.阐述PCR反应中模板质量对结果的影响。答案：模板质量