（正式版）DB15∕T 3439-2024 《规模化羊场绵羊支原体肺炎诊断及免疫技术规程》

152024-05-31发布本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC1技有限责任公司，内蒙古金草原生态科技集团有限公司，内蒙古杜美牧业生物科技有限公I规模化羊场绵羊支原体肺炎诊断及免疫技术规程本文件规定了规模化羊场绵羊支原体肺炎诊断及免NY/T2835奶山羊饲养管理技术规范NY/T3052舍饲肉羊饲养管理技术规范绵羊肺炎支原体mycoplasmaovi约125nm～500nm，无细胞壁。Mo合成能力差，聚合酶链式反应polymerasechain一种级联反复循环的DNA合成反应过程。一般由三个步骤组成：模板的热变性，寡核苷酸引物复性12间接酶联免疫吸附试验indirectenzyme-linkedimmunosorbentassay(间接ELISA)已知的抗原吸附在固相载体(聚苯乙烯微量反应板，也称酶标板)表面，样品中待检测抗体于抗机体抵抗力下降的羊更易感染。绵羊肺炎支原体在自然条件下可以通过空气-飞沫(气溶胶)传染，引一年四季都发，其中夏末和冬季频发。环境因素也会导致本病流行肺脏与胸腔粘连，出现胸腔积液。尖叶病变严重，心叶和膈叶次之，其他器官的颈静脉无菌采血3mL～5mL,室温放置1h后4℃放置过夜，室温3000rpm离心5min～10min,分离血清，于-20℃保存。无菌条件下取样，在肺组织病变与正常组织交界处，取3cm3～5cm3大小的组织样本，冷藏条支原体液体培养基，支原体固体培养基，马血清，1%醋酸铊，8万单在表层消毒后，在病变和正常组织交界处取米粒至绿豆大小深层肺组织置于玻璃匀浆器中，加入3），体变为橙红色，取1mL培养产物转入10mL培养基中，传代培养，盲传三代后，取3mL培养液提取基因3PCR仪，电炉，离心机，混匀器，微量可调移液器，1.5mL离心管，PCR反应管，核酸电泳仪，凝4对照设置：对照模板为绵羊肺炎支原体Y98标准株基因体，1M硫酸溶液。除另有规定，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682分离鉴定并经测序确定为绵羊肺炎支原体的菌液制备全菌灭活抗原，并用其免疫3月龄羔羊制备标绵羊肺炎支原体菌液100mL，4℃12000rpm离心30min，弃上清，取沉淀。将菌体沉淀用0.1MpH7.4的PBS缓冲液洗涤3次，用5mLPBS重悬。菌体重悬液超声裂解，4℃集上清，即为绵羊肺炎支原体全菌抗原。用BCA法测定蛋白质浓度，将抗原冻存于-20℃备用。孔加入至酶联反应板，置4℃冰箱过夜，次日弃56待检样本S,阳性对照P,阴性对照N。阳性对照P值应大于0.8,阴性对照值应小于0.2,待检验本S/阴性对照N比值>2.1即判定为阳性，待检验本S/阴性临床诊断符合绵羊肺炎支原体症状，病原鉴定为阳性或PCR鉴定为阳性，即可判定为绵羊肺炎支原疫苗选择：b)每次免疫时，最好选用同一企业生产的疫苗。饲养管理与卫生消毒工作及提高生物安全标准的基础上，根据羊群具体情况制定用药方案。单位/mL青霉素溶液5mL,定容至500mL，倒平板，待培养基凝固后，置4℃保存备用。A.3TAE电泳缓冲液：Tris4.84g/L,冰乙酸1.142A.58万国际单位/mL青霉素溶液：取400万国际单位的青霉素粉剂，溶于50mL双蒸水中,至完入容器中；未溶解的酚红继续加1MNaOH溶液2mL，重复上述步骤（NaOH溶液总量不可超过6mL78(资料性)绵羊肺炎支原体的分离鉴定B.1绵羊肺炎支原体菌落形态(10×40)见图B.1。图B.1绵羊肺炎支原体菌落形态(10×40)B.2绵羊肺炎支原体瑞士染色(10×100)见图B.2。图B.2绵羊肺炎支原体瑞士染色(10×100)9B.3绵羊肺炎支原体特异性引物PCR电泳图。标引序号说明：M——DNA分子量标准；1——鼻拭子样本；