皮肤病理石蜡切片

皮肤病理石蜡切片概述（1）修材（2）固定（3）脱水（4）透明（5）浸蜡（6）包埋（7）切片（8）摊片（9）烤片（10）脱蜡（11）脱苯（水）→蒸馏水（12）染色（13）脱水（14）透明（15）封片修材一般修材不超过1.5×1×0.2cm但在实际工作中，平均修材在1.0×0.5×0.2cm左右比较：我们修材的大小一般要比口腔医院修的组织块小。大概有黄豆粒大小。原因：口腔医院包埋机提供的包埋框大小适宜，包埋时受组织大小的影响较小，而我们手工包埋大的组织较困难。注意：组织块的大小修材受实际病变程度的影响，不能墨守常规，一概而论。固定中性10％福尔马林1hAF液0.5－1h功能：①保持原有组织形态，防止细菌腐蚀标本。②AF液是固定和脱水过程中的过渡阶段，缓冲组织的收缩。注意：口腔组织与皮肤组织的区别，不一定完全符合此种固定方法。议:AF液相当于90%乙醇进行脱水，时间较短，简略了梯度酒精脱水的完整性，是否造成组织收缩程度加大？比较：增加了AF液，相对比我们固定标本节约了约5个小时。脱水95%乙醇1-1.5h无水乙醇Ⅰ≧1.5h无水乙醇Ⅱ≧1.5h功能：脱去组织中的水分，以便石蜡浸入。注意：①水和石蜡不相容，需脱水彻底，以便制备出好的切片。②无水乙醇同样具有使组织收缩变硬的影响，故不能时间过长。比较：①我们95%乙醇采用两步脱水，以减小收缩力。②无水乙醇的脱水时间不超过2h，与此相比较，相差将近2倍。议：无水乙醇脱水3-4h皮肤组织会不会变硬？3-4h透明功能:二甲苯是酒精和石蜡的共同溶剂（媒剂）目的是为石蜡的浸入作媒介。二甲苯Ⅰ20min二甲苯Ⅱ20min注意：二甲苯也能使组织变硬，故时间不宜过长。如果时间过长组织变硬，可以在香柏油中进行软化。议：松节油透明较慢，我们会不会透明不彻底？是否加长透明时间？比较：透明时间都相同，但我们用的是松节油进行组织透明。浸蜡干燥箱温度65-70℃≧1.5h功能：石蜡溶解二甲苯，已达到石蜡浸入整个组织的目的。注意：干燥箱中的温度过高或不稳，使组织变脆或烫伤，造成切片困难，不能制成理想的切片。议：石蜡的厂家（物理性能）不同，是否影响浸蜡的时间和切片？比较：我们的干燥箱温度不稳，在72-84℃之间波动。包埋注意：①手工包埋时蜡的温度不宜过高，最好做到组织的温度与蜡的温度相同。②蜡块上下两端应当修平，但留余蜡，否则切片弯曲不直，或无法连成带状，左右两端应不留余蜡，若余蜡过多时，是切片容易褶皱。比较：手工包埋，温度不宜掌握！包埋机进行！切片切3μm厚度单次切片比较：4-5μm厚度，连续切片单次切片的特点：组织片不易褶皱切片的时间较长粘片的组织较少切片机：LEICA（莱卡)RM2255LEICA（莱卡)RM2235摊片比较：水浴温度不稳32-45℃极易造成组织片摊不开或张力过大而裂开。由于我们是连续切片，所以玻片上的组织片大于四个。水浴温度37℃每个玻片黏贴两个组织片烤片烤箱温度55℃≧1.5h功能：是组织切片能够与玻片粘在一起，防止在染色过程中脱片。注意：烤片过程中温度不能过高，防止烫伤组织。比较：我们烤箱温度不稳，在82℃左右烤≧1h。脱蜡二甲苯Ⅰ≧12min二甲苯Ⅱ≧12min功能：二甲苯溶解切片中的石蜡，以便染色。注意：二甲苯脱蜡的时间不能太短，已达到脱蜡彻底的目的，否则不易染色！（石蜡不与染液结合）比较：时间都在20min左右，基本相同。脱苯（水）→蒸馏水无水乙醇2min95%乙醇2min80%乙醇数秒70%乙醇数秒流水冲洗1-2min蒸馏水洗过反酒精梯度功能：脱去组织上多余的苯，使组织梯度进水水，进而染色。比较：我们没有反酒精梯度脱水，只用了95%乙醇进行脱苯1min。注意：如果组织进入95%乙醇中有云雾状现象，说明二甲苯没有脱彻底或乙醇过陈旧、不纯。染色苏木素5-10min流水冲洗数分钟酸酒精（分化）数秒流水冲洗≧2min1%氨水（反蓝）1min流水冲洗充分伊红10s-1min流水冲洗数分钟比较：基本相同。注意：染色时间的长短和组织的酸碱度和染液配制的时间有关，所以要以显微镜下观为准，不能一概而论。酸酒精具有脱色作用洗不彻底，染色较淡。氨水碱性，洗不彻底会影响伊红的亲和力。议：苏木素的不同是否影响组织染色的效果？脱水70%乙醇数秒80%乙醇数秒95%乙醇数秒无水乙醇10min功能：脱去组织中的水分并对染片进行分化。注意：脱水过程中也是对伊红染色的分化，所以在梯度酒精中不宜过长。比较：我们梯度酒精不健全，在无水乙醇中2min。透明二甲苯Ⅰ2min二甲苯Ⅱ3min功能：提高组织片的折射率，增强组织片的质量。比较：我们略去此步。注意：此步透明可以延长时间，提高组织片镜下的“新鲜”度。封片注意：封片树胶不能过稀，封片时树胶要均匀充满盖玻片且树胶不及外溢为佳。要将组织全部覆盖，也不能有气泡。最后，粘贴标签。中性树胶的处理：新买来看的树胶较粘稠，我们可以用二甲苯进行调和。中性树胶苏木素（10g）

Hematoxylin

分子式：C16H14O6分子量：302.29PH：5.0-7.2（黄-紫）中国医药公司上海化学试剂采购供应站（进口分装）石蜡的不同口腔医院：厂地：上海疑难病理会诊中心监制上海华申康复器材厂商标：衡永熔点：56-58℃省二院：厂地：上海懿洋仪器有限公司商标：睛晶牌熔点：55-59℃伊红（曙红Y）

EosinY配制伊红，有许多种方法，根据各单位的情况，使用不同种类的伊红。市售的伊红有两种：一是水溶性伊红，二是醇溶性伊红，在我们的实践中，水溶性伊红用低浓度的酒精来配制，只要配制得当，其效果非常好。伊红1g70-75%酒精100ml先将伊红用蒸馏水(少许)调成浆糊状，再加入酒精，边加边搅拌，直到彻底溶解，此时试剂有些混浊，取少许冰醋酸，加入到试剂中去，试剂逐渐转变为清亮，呈鲜红色，染出切片，效果很好。纯溶水溶苏木素（500ml）：配方：苏木素2.5g无水乙醇50ml蒸馏水500ml钾明矾50gHgO1.25g冰醋酸20ml先把明矾放入烧杯的蒸馏水中，加热煮沸溶解后关掉电源。将苏木素溶于无水乙醇中，搅拌溶解于烧杯内，再缓慢倒入500ml含明矾的水中煮沸3-5min溶解，等颜色加深变为紫红色，拔掉电源。先加入少量的黄色氧化汞，防止氧化过程中苏木素外溢，玻璃搅拌，然后，边搅拌边加完氧化汞，充分氧化后，插上电源继续加热3-5min待颜色呈深紫色后应终止氧化。（立即遗至冰水中，加速其冷却）静置一夜后，过滤加入冰醋酸。用前加入冰醋酸后PH：2-2.28之间。如配好后时间较长，冰醋酸的量可适当多加一点（一周后在500ml苏木素溶液中加2-3ml冰醋酸）。冰醋酸可直接影响苏木素的着色能力和清晰度。加少了，会造成核浆共染，背景不干净。加多了，核着色能力下降。此液可放置3月至半年左右，视气温而定。使用期要看染色的切片量来定，以1天100张片量，可使用半个月左右。AF液（500ml）福尔马林50ml无水乙醇405ml蒸馏水45ml90%乙醇450ml10%福尔马林（500ml）甲醛50ml蒸馏水450ml注意：市售甲醛溶液浓度为40%，故福尔马林俗称是10%的甲醛溶液，实际上只有4%的