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文档简介

蒽酮比色法测定可溶性糖含量认知目标：了解植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质性状。能力目标：掌握蒽酮与可溶性糖反应的原理，蒽酮法测定可溶性糖的步骤和注意事项。素养目标：培养学生严谨规范的实验态度，引导学生树立安全的实验意识。一、实验背景蒽酮（Anthrone），淡黄色针状晶体。不溶于水，溶于乙醇和热苯。分子式：C14H10O分子量：194.23植物体内的碳素营养状是农产品的品质评价的重要内容，常以可溶性糖和淀粉的含量作为重要指标。蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法；糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糖醛，生成的糖醛或羟甲基糖醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糖醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比。糖类与蒽酮反应生成的有色物质，在可见光区的吸收峰为630nm，可在此波长下进行比色，故可用于糖的定量。浓H2SO4浓H2SO4戊糖己糖蒽酮羟甲基糠醛蓝绿色糠醛衍生物糠醛1、材料植物叶片、水果果实等2、仪器设备分光光度计、水浴锅、具塞刻度试管、移液管、容量瓶、定性滤纸等3、试剂浓硫酸（比重1.84）、分析纯蔗糖、分析纯蒽酮、乙酸乙酯蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g，溶于50mL乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数周，用时微热溶解结晶。二、材料、仪器设备及试剂1、标准曲线（一）1%蔗糖标准液将分析纯蔗糖在80℃下（2h）烘至恒重，精确称取1.000

g，加少量水溶解，转入100mL容量瓶中，加入0.5mL浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度。（二）100

μg/L蔗糖标准液精确吸收1%蔗糖标准液1mL转入100mL容量瓶中，加水至刻度。三、实验步骤（三）标准曲线取20mL刻度试管11支，从0-10分别编号，按下表加入溶液和水。试剂01、23、45、67、89、10100μg/L蔗糖液/mL00.20.40.60.81.0蒸馏水/mL2.01.81.61.41.21.0按顺序向试管中加入0.5mL蒽酮乙酸乙酯试剂和5mL浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管均准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm波长下测其吸光度。2、可溶性糖的提取及测定取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.1-0.3g，放入刻度试管中，加入5mL蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min，提取液滤入25mL容量瓶，反复漂洗试管残渣，定容至刻度。吸取样品提取液0.5mL于20mL刻度试管中，加蒸馏水1.5mL。按顺序向试管中加入0.5mL蒽酮乙酸乙酯试剂和5mL浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管均准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm波长下测其吸光。3.数据计算：W=(CV/m)×100%W—糖的质量分数（%）C—标准曲线查出的糖含量mg·mL-1V—样品稀释后的体积（mL）m—样品的质量（mg）四、结果计算样品中含水量不能太多，试管应该干燥无水，

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