DB45∕T 2198-2020 山羊支原体肺炎防控技术规程

ICS11.220

CCSB4141BCCS

DB45

广西壮族自治区地方标准

DBDB2198—202045/T

山羊支原体肺炎防控技术规程山羊支原体肺炎防控技术规程

PreventionandcontroltcontrolandPreventionforstandardechnologymycoplasmalcaprine

pneumoniapneumonia

2020-10-29发布2020-11-30实施

广西壮族自治区市场监督管理局发布

DB45/T2198DB45/T—2020

前前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则

起草。

本文件由广西壮族自治区农业农村厅提出并宣贯。

本文件由广西畜牧业标准化技术委员会归口。

本文件起草单位：广西壮族自治区兽医研究所。

本文件主要起草人：李军、潘艳、彭昊、陶立、李常挺、冯世文、马春霞、钟舒红、贺会利、胡帅、

谢永平、杨威、陈泽祥

I

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山羊支原体肺炎防控技术规程山羊支原体肺炎防控技术规程

11范围

本文件规定了山羊支原体肺炎防控技术规程的环境质量及卫生控制、管理措施、预防控制措施。

本文件适用于广西山羊养殖场山羊支原体肺炎的防控。

22规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

NY/T541动物疫病实验室检验采样方法541NY/T

NY/T1167畜禽场环境质量及卫生控制规范1167NY/T

中华人民共和国农业农村部关于印发《病死及病害动物无害化处理技术规范》的通知：农医发

[2017]25号[2017]25号

33术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.13.1

山羊支原体肺炎caprinemycoplasmalpneumoniapneumoniamycoplasmalcaprine山羊支原体肺炎

由多种支原体所引起的一种高度接触性传染病，其临床特征为高热、咳嗽，胸和胸膜发生浆液性和

纤维素性炎症，病死率很高。

44环境质量及卫生控制

按照NY/T1167的规定执行。1167的规定执行。按照NY/T

55管理措施

5.15.1严格执行人员管理、饲养管理、卫生消毒（蚊蝇控制）、无害化处理等制度。

5.25.2建立完整的投入品使用、免疫、疫病诊疗、用药、消毒、产品销售和无害化处理等记录，并整理

归档，做到可以溯源。

5.35.3场外人员及车辆不得随意进入生产区，工作人员必须更衣换鞋并经严格消毒方可进区。

5.45.4场区内不能饲养其它动物，不能开展对外诊疗和配种工作，不能带入可染疫的畜产品。

5.55.5羊场应配备兽医人员，并严格执行卫生消毒、免疫、检疫、监测等制度。

5.65.6坚持自繁自养的原则，育肥羊实行全进全出的饲养管理制度，出栏后，羊舍、设施及用具要严格

进行清扫、冲洗和消毒，并空圈7d以上后方可再进羊饲养。

1

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5.75.7必须从外场引进山羊时，要先审批后引种。引进后隔离舍饲养45d，进行观察、检疫、监测，确

认为健康后方可混群。

5.85.8饲料、饮水、兽药等的使用应符合国家有关规定。

66预防控制措施

6.16.1预防措施

6.1.16.1.1日常自检

建立基础母羊群，自繁自养。品种调整或补充种源，加强山羊群引进的管理，引进的羊应先审批后

引种。流行病学及诊断方法参见附录A。

6.26.2控制

6.2.16.2.1封闭和隔离

养殖场实行封闭管理，控制疫病的传播，对入场人员和车辆进行消毒。对发生疫情的养殖场实行封

锁，对病羊进行隔离治疗，对无治疗价值的重症病羊按《病死及病害动物无害化处理技术规范》的规定，

进行无害化处理。同时禁止山羊的外运和引进，避免疫情的扩散。

6.2.26.2.2免疫接种

对健康羊群每年春季或秋季预防接种一次。山羊传染性胸膜肺炎氢氧化铝灭活疫苗。皮下或肌肉注

射，6月龄以上山羊，每只注射5mL，6月龄以下山羊每只注射3mL，免疫期为12个月。对身体瘦弱、体

温升高或有慢性疾病的羊，不宜注射。对怀孕母羊、新生羔羊和从异地引进的羊应及时补注射。

6.2.36.2.3加强消毒灭源

对于发生疫情的养殖场和周围环境，每天用常用消毒剂如氢氧化钠、过氧乙酸、0.5％漂白粉消毒

1次；加强对病死山羊、污染物和排泄物的无害化处理，同时做好灭蝇、灭蚊、灭鼠的工作。

6.2.46.2.4加强饲养管理

羊舍要保持干燥和透风，冬天要做好防风和保暖；羊群密度适当，避免过度拥挤；不同年龄、不同

来源的山羊分开饲养；饲料品质良好，适当补充精料、维生素和微量元素，保证日粮的全价营养，提高

机体抗病力。

6.36.3治疗

加强对病羊护理，隔离饲养。可进行药敏试验后选用敏感抗菌消炎药物对山羊支原体肺炎进行治疗：

在治疗中，还应根据病羊全身状况，采取相应的对症治疗，如强心、利尿、补液等措施。

6.46.4无害化处理

6.4.16.4.1养殖场可根据本场的实际情况配套建设无害化处理设施，无害化处理可采用焚烧炉、填埋池（井）

或化尸池等方式，处理能力应当能够满足场区范围内及时处置病死羊及死因不明动物的需要。

6.4.26.4.2养殖场在废弃物无害化处理区配套建设粪便和污水处理设施（沼气池、污水分级沉淀池等），

处理能力能够满足自身需要。

6.4.36.4.3病死、患传染病死亡的羊只等无害化处理按《病死及病害动物无害化处理技术规范》规定执行。

2

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6.4.46.4.4污染饲料、垫料粪便等无害化处理可采取堆积发酵或沼气方式进行。

3

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AA

附附录A

（规范性）（规范性）

流行病学与诊断流行病学与诊断

A.1A.1流行病学

A.1.1A.1.1病原

引起广西地区山羊支原体肺炎的病原体主要有绵羊肺炎支原体（M.ovipneumoniae）、丝状支原体

山羊亚种（M.mycoidessupsp.capri）。该类支原体均为细小、多形性的微生物。革兰氏染色阴性，

瑞氏、美兰和姬姆萨染色着色良好。对理化因素的抵抗力弱。

A.1.2A.1.2易感动物

易感动物为山羊，其中以3岁以下的山羊最易感染。

A.1.3A.1.3流行特点

本病呈地方性流行，一年四季均可发生和流行，以阴雨连绵、寒冷潮湿、天气冷热交替的季节多发。

A.1.4A.1.4传播途径

本病接触传染性强，发病后迅速在羊群中传播。病羊肺组织和胸腔渗出液含有的大量病原体主要以

空气—飞沫的方式经呼吸道传播。

A.1.5A.1.5发病因素

异地运输、饲养方式、环境条件改变等应激因素是山羊支原体肺炎的诱发因素，同时山羊支原体感

染对机体免疫系统造成极大的破坏作用，也进一步促进继发感染或混合感染的病原微生物的致病作用。

除细菌和病毒的混合感染外，寄生虫感染可能对山羊支原体肺炎的发生也有促进作用。

A.2A.2临床症状

A.2.1A.2.1慢性型

全身临诊症状轻微，体温升至40℃。病羊间或有咳嗽，鼻液时有时无，被毛粗乱无光泽。如果饲

养管理不良，与急性病例接触或机体抵抗力降低时，很容易出现并发症而死亡。

A.2.2A.2.2急性型

病初体温升高，出现短而湿的咳嗽，伴有浆液性鼻液,精神沉郁,采食量逐渐减少。4d～5d后，咳

嗽变干而痛苦，鼻液转为黏液-脓性并呈铁锈色，黏附于鼻孔和上唇，结成干涸的棕色痂垢。眼睑肿胀，

流泪，眼有黏液-脓性分泌物。口半开张，流泡沫状唾液。头颈伸直，腰背拱起，腹肋紧缩，呼吸困难。

濒死前体温降至常温以下。病程多为7d～15d，有的可达30d。不发生死亡的转为慢性。

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A.2.3A.2.3最急性型

发病急，体温高达41℃～42℃，精神萎靡不振，食欲废绝呼吸急促而有痛苦鸣叫。数小时后出

现肺炎症状，呼吸困难，咳嗽，叩诊呈浊音，流浆液带血鼻液，肺部听诊肺泡呼吸音减弱、消失或呈捻

发音。病羊卧地不起，四肢伸直，呼吸极度困难，随着呼吸全身颤动。黏膜高度充血，发绀。病程一般

不超过4d～5d，有的仅12h～24在没有任何征兆情况下突然倒地死亡。h，有的

A.3A.3病理变化

肺呈紫红色，切面呈大理石样，充血水肿，有出血点。胸变厚而粗糙，胸腔常有淡黄色液体。胸膜

膜和肺表面有黄白色豆腐渣酪样物。心包积液、黏连，心肌松弛、变软。

A.4A.4实验室诊断

A.4.1A.4.1病原分离

A.4.1.1A.4.1.1541按照NY/T操作规程无菌取病羊肺组织一小块。

A.4.1.2A.4.1.2按1:5体积比加入生理盐水匀浆，4000r/min离心5min，取上清液经0.22µm滤器过滤后，接

种到含体积分数为20％马血清PPLO肉汤培养基（内含1000置37IU青霉素）中，℃体积分数为5％CO2培

养箱中培养5d～7d。

A.4.1.3A.4.1.3对培养24h后才开始变黄且液体清亮的培养物，经0.22µm滤器体过滤后，按积分数为10％（v

将滤液接种到含体积分数为20％/v）的接种量马血清PPLO肉汤培养基继续培。（不含青霉素）中若培养

将其在PP基的颜色仍然变为黄色，则LO固体培养基上划线分离，置37℃体积分数为5％CO2培养箱中养。

A.4.1.4A.4.1.4培养72h可见有白色菌落生长，菌落直径大小在0.3mm～2，40mm×光学显微镜下观察绵羊肺

炎支原体菌落为为无中心脐、园形、中间隆起、边缘整齐透明，类似“帽子”状的菌落形态，而丝状

支原体山羊亚种和山羊支原体山羊种为有明显中心脐的“煎蛋样”菌落。

A.4.1.5A.4.1.5菌体革兰氏染色，可见红或紫色的染色颗粒，具体形态不易分辨；姬姆萨染色可见菌体呈浅

灰蓝色的多形态结构，有球状、棒、环等，大小不一，有的在菌膜上可见2～3个深染的极点。

A.4.2基因检测

B规定的方法执行。检测方法按照附录B规定的方法执行。

A.4.3A.4.3血清学诊断

规定的方法执行。检测方法按照附录C规定的方法执行。

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BB

附附录B

（规范性）（规范性）

特异性引物序列及检测结果凝胶电泳图示特异性引物序列及检测结果凝胶电泳图示

B.1B.1特异性引物序列

B.1.1B.1.1绵羊肺炎支原体特异性引物

B.1.1.1B.1.1.1绵羊肺炎支原体引物核苷酸序列

M1B-F：5'-CGGAGCCATAAAGTTGTAAT-3'

M1B-R：5'-CGAAACTCCCGTGGATGCTA-3'

B.1.1.2B.1.1.2引物扩增的靶基因和长度

靶基因：膜蛋白

扩增长度：511bp

B.1.2B.1.2丝状支原体山羊亚种特异性引物

B.1.2.1B.1.2.1丝状支原体山羊亚种引物核苷酸序列

MMMLC2-L：CAATCCAGATCATAAAAAACCT

MMMLC2-R：CTCCTCATATTCCCCTAGAA

B.1.2.2B.1.2.2引物扩增的目的基因

靶基因：LPPA

扩增长度：1049bp

B.2B.2检测结果凝胶电泳图示PCR

PCR检测结果凝胶电泳图如图B.1和图B.2所示。

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注：M、标准DNA分子量（DM2000）；1.绵羊肺炎支原体（＋）；2.隐秘杆菌（-）；3.曼氏杆菌（-）；4.巴氏

杆菌（-）；5.丝状支原体山羊亚种（-）；6.水（-）。“＋”表示检测结果为阳性；“—”表示检测结果为杆菌（-）；5.

阴性。

图检测结果琼脂糖凝胶电泳图PCR绵羊肺炎支原体B.1

注：M、标准DNA隐秘杆菌（-）；3.曼氏杆菌（-）；4.巴分子量（DM2000）；1.丝状支原体山羊亚种（＋）；2.

氏杆菌（-）；5.绵羊肺炎支原体（-）；6.水（-）。“＋”表示检测结果为阳性；“—”表示检测结果为阴

性。

图丝状支原体山羊亚种B.2检测结果琼脂糖凝胶电泳图PCR

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CC

附附录C

（规范性）（规范性）

微量间接血凝试验微量间接血凝试验

C.1C.1方法提要

微量间接血凝试验可用于羊支原体肺炎的诊断和监测。其原理是利用结合在红细胞上的羊支原体肺

炎抗原在与血清中的抗体反应后,出现肉眼可见的凝集现象,据此便可判断被检者血清是否含有羊支原

体肺炎抗体。

C.2C.2试剂

如下：

——羊支原体肺炎间接血凝试验抗原；

——Na2HPO4；

——KH2PO4；

——NaCl(分析纯)。

C.3C.3设备和仪器

如下：

——恒温培养箱；

——离心机；

——微型振荡器；

——天平；

——移液器；

——96孔V型(90度孔底)微量血凝反应板；

——100——100ml磨口锥形瓶；

——1000000——1ml容量瓶。

C.4C.4操作步骤

C.4.1C.4.1材料准备

C.4.1.1C.4.1.1稀释液

C.4.1.1.1C.4.1.1.1取NaCl4.25g、Na2HPO419.34g、KH2PO42.86g放入1000mL容量瓶中，加蒸馏水完全溶

解后定容，过滤分装，15磅15min高压灭菌,即成0.15moL/l磷酸盐缓冲液(PBS)。

C.4.1.1.2C.4.1.1.2取上述溶液98mL和健康兔血清2mL放入100mL磨口锥形瓶中，混合，无菌分装，4℃保存备

用。

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C.4.1.2C.4.1.2被检血清

无菌采集待检羊血液并分离清，检验前56℃灭能30。min

C.4.2C.4.2试验

C.4.2.1C.4.2.1加稀释液

取一洁净96孔V型血凝板组，1~5,每个样品为一孔加入稀释液30μL。

C.4.2.2C.4.2.2稀释血清

于第1孔加入待检血清30μL，用移液器逐孔稀释至第5孔，弃30μL，此时1～5孔待检血清的稀释度

依次为：1:2(1)，1:4(2)，1:8(3)，1:16(4)，1:32(5)。同法稀释阳性及阴性血清,阴性血清组稀释至

第四孔，预留五孔作为稀释液对照。

C.4.2.3C.4.2.3加间接血凝抗原

被检血清各孔、阴性血清各孔、阳性血清各孔、稀释液对照各孔均加间接血凝抗原30μl。加完后，

振荡混匀，37℃静置2h，判定结果。

C.5C.5结果判定

C.5.1C.5.1判定标准

如下：

a)红细胞呈沙粒样均匀铺于孔底者为++++，即100％凝集；

b)红细胞均匀铺于孔底，但边缘不整齐且稍向集中者为+++，即75％凝集；

c)红细胞于孔底形成一个环状,四周有小凝集块者为++，即50％凝集；

d)红细胞于孔底形成圆团状,但边缘不够光滑,且四周稍有凝集块者为+，即25％凝集；

e)红细胞于孔底形成圆团状，且边缘光滑整齐者为-即无凝集。

C.5.2C.5.2判定方法

在阳性对照、阴性对照血清，稀释液对照为(-)被检血清进行判定。的前提下，对被检血清1:8稀释

度，凝集值≥++以上判定为阳性，1:4稀释度凝集价≥++判