DB34-T 5227-2025 陆生野生脊椎动物种质资源样本采集规范

ICS13.020.40CCSB6034DB34/T5227—2025陆生野生脊椎动物种质资源样本采集规范Specificationforthecollectionofgermplasmresourcessampleofterrestrialwildvertebrates2025-05-06发布2025-06-06实施安徽省市场监督管理局发布IDB34/T5227—2025本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由黄山学院提出。本文件由安徽省林业局归口。本文件起草单位：黄山学院、安徽省林业局野生动植物保护处、安徽省野生动物疫源疫病监测总站、安徽扬子鳄国家级自然保护区管理局。本文件主要起草人：吕顺清、吴月龙、刘嵩、于超、邴晓慧、王德青、李伟、姜贺、周永康。DB34/T5227—20251陆生野生脊椎动物种质资源样本采集规范本文件规定了陆生野生脊椎动物种质资源样本采集的目标与原则、采集对象、采集许可、采集前准备、采集、采集后处置、样本运输保存。本文件适用于陆生野生脊椎动物（两栖类、爬行类、鸟类、哺乳类）种质资源样本的采集。其它类群野生动物种质资源样本采集可参照执行。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。LY/T2359陆生野生动物疫源疫病监测技术规范《中华人民共和国野生动物保护法》（2022年12月30日）《中华人民共和国生物安全法》（2020年10月17日）《中华人民共和国自然保护区条例》（2017年10月7日）《陆生野生动物疫源疫病监测防控管理办法》（国家林业局令2013第31号）《高致病性动物病原微生物菌（毒）种或者样本运输包装规范》（农业部公告第503号）《国家重点保护野生动物名录》（2021年1月4日）《有重要生态、科学、社会价值的陆生野生动物名录》（2023年6月26日）《安徽省重点保护野生动物名录》（2023年2月22日）3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1陆生野生脊椎动物terrestrialwildvertebrate本文件指除了鱼类和无脊椎动物以外的其他野生动物，包括两栖类、爬行类、鸟类和哺乳类。种质资源样本germplasmresourcessample可现场直接采集、包含有个体全部或部分遗传信息的生物材料，包括但不限于生物体的细胞、组织、器官、整体，无需经过实验室复杂程序提取或培养即可长期保存，用于动物学研究，或用于未来种质遗传资源的繁育和利用。DNA提取样本sampleforDNAextraction保存质量能够满足全基因组（包括线粒体基因组）提取的样本。3.4RNA提取样本sampleforRNAextraction2DB34/T5227—2025保存质量能够满足RNA提取的样本。3.5细胞培养样本sampleforcellculture保存质量能够满足细胞培养的样本。3.6标本specimen样本采集的动物体，包括但不限于活体动物、死亡动物全部或部分尸体、博物馆或机构保存的野生动物标本等。3.7非损伤动物样本采集法Non-invasiveAnimalSampling在采集动物样本的过程中，不对动物造成伤害或应激，不影响其自然行为和生存状态的方法。微损伤动物样本采集法Mini-invasiveAnimalSampling在采集动物样本的过程中，对动物造成微小伤害或应激、不足以影响其自然行为和生存状态的方法。规范陆生野生脊椎动物种质资源样本采集，为动物种质遗传资源的保存、研究、保护和利用提供技术规范。4.2原则4.2.1合法性原则样本采集须符合生物安全管理规范，取得主管部门许可。到自然保护区采集或采集《国家重点保护野生动物名录》、《有重要生态、科学、社会价值的陆生野生动物名录》、《安徽省重点保护野生动物名录》中的物种，按照《中华人民共和国野生动物保护法》、《中华人民共和国自然保护区条例》的规定执行。4.2.2科学性原则样本采集须由专业人员或经过专业培训的人员承担，按照技术规范操作。4.2.3安全性原则样本采集过程中须注重环境、人员、动物及标本等的安全控制。采集和运输有传染性或人畜共患病风险的样本，按照《中华人民共和国生物安全法》、《陆生野生动物疫源疫病监测防控管理办法》、《高致病性动物病原微生物菌（毒）种或者样本运输包装规范》及LY/T2359的规定执行。4.2.4动物福利原则尽量减少动物及样本的采集量；活体动物应优先使用非损伤或微损伤采集方式；采集方式应减少动物的惊吓、精神压力或痛苦；处死动物尽可能减轻动物的痛苦。5采集对象DB34/T5227—202535.1陆生野生脊椎动物类别陆生野生脊椎动物包括如下四类：b)爬行类；5.2种质资源样本类别种质资源样本包括如下四类：a)动物体（活体、尸体、标本等）；b)器官（睾丸、卵巢、心脏等）；c)组织（皮肤、肌肉、血液等）；d)细胞（生殖细胞、胚胎干细胞等）。6采集许可样本采集须取得政府主管部门许可或按照相关法律法规执行。7采集前准备7.1仪器设备主要包括但不限于：交通运输工具（车辆）、车载超低温冰箱（-80℃)、车载普通冰箱（-20℃)、显微镜、液氮罐等（见附录A）。7.2器材器具主要包括但不限于：解剖刀、手术剪、镊子、冻存管、冻存盒、防护服、工作服、口罩、乳胶手套、脱脂棉、纱布、急救箱、计量工具、记录工具等（见附录B）。器材器具须清洗、消毒，分类整齐摆放于专用工具箱中。7.3药品试剂主要包括但不限于：RNA保存液、RNase抑制剂、细胞培养液、精液稀释液、乙醇、去离子水、麻醉剂等（见附录C）。药品试剂须封装于专用容器中，分类摆放于试剂箱（柜）中。8采集8.1信息采集8.1.1活体或死亡标本信息活体或死亡标本信息包括但不限于以下内容：a)标本号（自行命名，但需确保编码原则统一性、编码唯一性）；DB34/T5227—20254b)分类学信息：中文名、学名、种下名称（即亚种名，若有则须添加）、种上名称（纲、目、科，中文名和学名）、鉴定人等；海拔（黄海高程）、生境类型、气候因子（温度、湿度）等；d)标本信息：采集人（标本具体采集人或团队等）、采集时间（日期格式保持一致）、采集方式（直接抓捕、网捕、灯诱、陷阱等）、个体信息（性别、年龄或发育阶段、健康状况等）、保藏单位（保藏单位全称）等。信息记录见附录D。8.1.2馆藏标本信息标本号、标本属性（正模、配模、副模、地模、普通等）、鉴定人、制作人、制作日期、保藏方式（浸泡、干制、冰冻等）、实物状态（完整、破损等。非完整标本可简单描述破损部位）、保藏单位、联系人（包括单位、地址、邮编、电话、电子信箱等）。8.1.3图像信息8.1.3.1图像信息采集总则图像信息采集分门别类进行；同一地点或同一次采集的所有图像保存于同一个存储设备（移动硬盘、U盘），移交给保藏单位，同时做好备份。8.1.3.2生境图像信息活体或野外死亡标本需要拍摄生境图像，要求尽可能体现采集地地貌、植被、水源等多项信息。每个采集地拍摄照片不少于4张（前、后、左、右），分辨率1500万像素（4896×3264）以上，保存格式为“jpg”或“tif”格式；拍摄视频不少于15秒，拍摄内容不少于照片部分，分辨率不小于4K（3840×2160），保持格式为“mov”。所有生境图像自行命名，但需确保统一性、唯一性，保存于同一个文件夹内。8.1.3.3工作图像信息工作图像信息要求体现工作场景、工作方式等。每个采集地拍摄照片3-4张，照片精度要求在1000万（2775×3700）像素值以上，保存格式为“jpg”或“tif”格式；拍摄视频不少于15秒，拍摄内容不少于照片部分，分辨率不小于4K（3840×2160），保持格式为“mov”。所有工作图像自行命名，但需确保统一性、唯一性，保存于同一个文件夹内。8.1.3.4标本图像信息所有被采集样本的个体（活体、尸体、标本）均须拍摄形态图像，要求尽可能体现个体全貌及主要鉴别特征。摆拍最好在原产地进行，尽可能还原其生境，并做好防逃逸措施；拍照前在适当位置放置一个刻度尺作为个体大小参考。每个个体拍摄1-3张全身入镜照片（至少1张含有个体标签或信息卡）、4后、背、侧）、鉴别特征局部特写照片1-3张，分辨率1500万像素（4896×3264）以上，保存格式为“jpg”或“tif”格式；拍摄视频不少于15秒，拍摄内容不少于照片部分，分辨率不小于4K（3840×2160），保持格式为“mov”。所有图像自行命名，但需确保统一性、唯一性，同一个体的所有图像保存于同一个文件夹内。8.2样本采集DB34/T5227—202558.2.1样本采集总则8.2.1.1样本正式采集前，应根据采集需求及条件确定采样数量和地点；穿着工作服或防护服（采集个体可能患有高传染性疾病或不明原因死亡）、乳胶手套、口罩；做好样本编码和保存器具（冻存管等）标记；根据动物体、器官、组织、细胞分门别类进行采集；采集器材器具尽量不重复使用，有必要重复使用时必须规范清洗、消毒；及时登记样本采集相关信息（见附录4）。8.2.1.2动物体体采集和器官采集仅适用于小型动物（蝌蚪、小型蛙类等），视其体型与冻存管比例而定；细胞样本采集仅适用于两栖类卵细胞，且不能用于冻存后复苏繁育。8.2.2动物体样本动物体样本采集应遵循以下流程：a)活体动物应采用尽可能减轻动物痛苦的方法处死；动物尸体须用生理盐水冲洗干净；b)将样本置于冻存管内，直接置于液氮罐中保存。若不具备该条件时，DNA提取样本用乙醇保存，RNA提取样本用RNA保存液保存，细胞培养样本则用细胞培养液保存。8.2.3器官样本器官样本采集应遵循以下流程：a)活体动物应采用尽可能减轻动物痛苦的方法处死；b)用解剖器具（手术剪、镊子等）摘取目标器官置于冻存管内，直接置于液氮罐中保存。若不具备该条件时，DNA提取样本用乙醇保存，RNA提取样本用RNA保存液保存，细胞培养样本则用细胞培养液保存。8.2.4组织样本8.2.4.1固态组织样本固态组织样本采集应遵循以下流程：a)优先选择非损伤或微损伤方法，死亡个体优先选择肌肉、内脏器官和生殖器官，采样的同时应做好备份；b)样本置于冻存管内，直接置于液氮罐中保存。若不具备该条件时，DNA提取样本用乙醇保存，RNA提取样本用RNA保存液保存，细胞培养样本则用细胞培养液保存。8.2.4.2血液样本血液样本采集应遵循以下流程：a)采用全麻或尽可能减轻动物痛苦的方法，尽可能不处死动物；b)用抗凝采血管采集动物静脉血或肢、尾端动脉血（视动物体大小采集0.5-5mL不等）；c)将采血管上下缓慢颠倒混匀后在2-8℃条件下（冷藏）暂存，并尽快运输至保藏单位；d)若暂存加运输时间超过1周，血液样本须-20℃（冷冻）或更低温度暂存并尽快运输至保藏单位。8.2.4.3精液样本精液样本采集应遵循以下流程：a)挑选健康的雄性成体；b)哺乳动物尽可能使用假台畜和人工阴道采集精液；不适用假台畜法的动物则采用电极刺激或人工挤出采集精液；DB34/T5227—20256c)取适量精液涂片，显微镜下观察精子浓度、活力和形态，以确认精液质量；d)根据精液质量，利用精液稀释液将其稀释到一定浓度，分装到加有冷冻保护剂的冻存管中；e)将装有精液的冻存管放入液氮罐中暂存，并尽快运输至保藏单位。8.2.5细胞样本细胞样本采集应遵循以下流程：a)自然排卵或人工挤出采集卵细胞（包括受精和胚胎细胞），尽可能不处死动物；b)样本置于冻存管内，直接置于液氮罐中保存。若不具备该条件时，DNA提取样本用乙醇保存，RNA提取样本用RNA保存液保存，细胞培养样本则用细胞培养液保存。9采集后处置样本采集后处置应遵循以下要求：a)非损伤或微损伤方法采集后的动物，须立即原地释放；b)使用麻醉方式采集后的动物，则需要等待其苏醒。若动物在预计时间内没有苏醒，则需要注射麻醉拮抗剂以解除麻醉状态。动物苏醒后观察一定时间，确认其完全恢复正常后原地释放；c)采集前已经死亡或处死的动物，样本采集后的部分如果可以做成标本的，则需及时安全运输到标本制作场所；若不具备任何价值，则须及时做焚烧、深埋等无害化处理，以免污染环境、传播疾病。10样本运输保存样本运输应遵循如下要求：a)样本采集完成、存放于临时保存设备后，须尽快送到保藏单位进行长期保存；b)运送样本的车辆，满足安全需求，样本保存设备须完全固定；c)须有专业人员跟车，定时对样本保存设备进行检查，确保设备运行正常；d)样本到达保藏单位，须第一时间移交，同时确保移交手续记录完整。DB34/T5227—20257仪器设备表样本采集所需仪器设备名录（包括但不限于）见表A.1。表A.1仪器设备表1DB34/T5227—20258器材器具表样本采集所需器材器具名录（包括但不限于）见表B.1。表B.1器材器具表DB34/T5227—20259药品试剂表样本采集所需药品试剂名录（包括但不限于）见表C.1。表C.1药品试剂表DB34/T5227—2025样本信息采集表样本信息记录单见表