DB65T 3184-2010 巯基乙酸法测定棉花纤维中的木质素含量

B巯基乙酸法测定棉花纤维中的木质素含量2010-12-30实施2010-12-30实施新疆维吾尔自治区质量技术监督局发布IDB65/T3184—2010本标准依据GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》和GB/T20001.4-2001《标准编写规则第4部分：化学分析方法》编写。本标准由新疆农业科学院提出。本标准由新疆维吾尔自治区农业厅归口。本标准起草单位：新疆农业科学院核技术生物技术研究所。本标准起草人：范玲，胡文冉，曹双瑜1DB65/T3184—2010巯基乙酸法测定棉花纤维中的木质素含量本标准规定了棉花纤维样品的准备、标准曲线的绘制、巯基乙酸法测定棉花纤维中木质素含量。本标准适用于评估棉花纤维中木质素含量。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用丁本文件。GB/T6097-2006棉纤维试验取样方法3术语和定义3.1木质素：又称木质或木素，是苯丙烷类化合物的代谢产物，由三种醇单体(对香豆醇、松柏醇、芥子醇)形成的一种复杂酚类聚合物，是存在于植物纤维中的一种芳香族高分子化合物。3.2巯基乙酸法：是分析植物组织中木质素含量的经典方法之一，其分析出的木质素含量仅是植物体内含有的木质素的一部分，但该方法反应的是最真实的木质素。分析的原理是利用巯基乙酸(含有盐酸)与木质素中的苯甲醇基形成巯醚衍生物，化学修饰后的木质素含有酸性基团而溶解在碱性溶液中，再用浓盐酸酸化生成巯基乙酸木质素沉淀，根据木质素在280nm波长处的吸收值与木质素的浓度值成正比，通过测定280nm波长处的吸收值测定木质素的含量。巯基乙酸(Sigma-Aldrich);碱木质素(Sigma-Aldrich);TritonX-100(分析纯);Tris-HCI(分析纯);NaCl(分析纯);丙酮(分析纯)血清瓶(内垫为聚乙烯四氟);天平(ACCULABALC-310.3型);电热恒温震荡水槽(DKZ-2型);MYLAB通风橱；高速冷冻离心机(CR20B2);紫外-可见分光光度计(CINTRA-20型)。6准备工作6.1采样采摘种植在大田自然成熟的棉花纤维，按GB/T6097-2006《棉纤维试验取样方法》进行取样，反复挑拣棉花纤维，彻底拣去棉花纤维中的非纤维杂质。2DB65/T3184--20106.2匀一化缓冲液(HBuffer)的配制50mmol/LTris-HCl,10g/LTritonX-100,1mol/LNaCl;pH8.36.3棉花纤维样品的清洗称取1.0g棉样，分别用40mL均一化缓冲液(H-buffer)清洗两次，40mL80%丙酮洗两次，40mL纯丙酮洗一次，避免可溶物质对分析的干扰。每次清洗后都涡旋、反复挤压、最后用金属夹蒜器将纤维中的残留溶液挤干，45℃烘干备用。7标准曲线的绘制用0.5mol/LNaOH溶液溶解碱木质素，配制成浓度为0、10、20、30、40、50、60μg/mL的碱木质素溶液。用紫外/可见分光光度计在280nm处测定吸光度值，获得吸光度值与溶液木质素含量之间的线性回归方程。8木质素含量的测定8.1准确称取0.10g清洗过的棉纤维，置于30mL血清瓶内，加5mL2mol/LHCI,0.75mL巯基乙酸，充分混匀后旋紧瓶盖，置于电热恒温振荡水浴锅中，98℃轻缓震荡(约60rpm/min)水浴4h;8.2反应完成后将血清瓶取出后置于冰上快速冷却以终止反应。将溶液转入50mL离心管，12,000rpm,室温，离心15min,弃上清，用10mL蒸馏水再清洗两次，离心弃上清；8.3加5mL0.5mol/LNaOH,混匀后放置在摇床上250rpm,室温下摇动10h~12h;12,000rpm,室温，离心15min,收集上清保存于4℃;8.4重复步骤6.3,将两次上清合并，保存于4℃;8.5将沉淀加5mL2mol/LNaOH,混匀置摇床250rpm,室温下摇动10h~12h,12,000rpm,室温，离心15min,将上清合并，保存于4℃;8.6向存有三次上清的离心管中加入1.5mL浓盐酸，4℃下放置4h,12,000rpm,4℃,离心20min,8.7沉淀干燥后加5mL0.5mol/LNaOH溶解，以0.5mol/LNaOH为空白溶液，在280nm波长测其吸光值。如果测定的吸光度值不在所用的标准曲线的吸光度值范围内，则用0.5mol/LNaOH溶液稀释所测溶液。8.8棉花纤维中巯基乙酸木质素含量的计算8.8.1根据标准曲线和测定溶液的吸光度值计算溶液的浓度C=a+b×AB₂80式中：C-—待测提取液的浓度，ug/mL;a---—回归方程的截距；b回归方程的回归系数；AB₂280——待测溶液在280nm处的吸光值