梅毒的实验室检测方法

梅毒的实验室检测方法（一）在梅毒的诊断治疗中，梅毒的实验室检测结果起到了很重要的作用，具有决定性的意义，下面就梅毒的检测方法做一个简单的介绍。

一、梅毒常用的检测方法

梅毒一般常用的检测方法是两种：病原学检测，血清学检测。

两种方法检测的标志物不同，病原学检测的直接检测梅毒螺旋体，而血清学检测是检测血液或者组织液中的梅毒抗体；两种方法各有优缺点，针对不同的感染情况，采用最合适的检测方法，就能够起到及时诊断治疗，对治疗的时机和效果有着重要的意义。

二、病原学检测

病原学检测是直接检测组织液中的梅毒螺旋体，是一种小而纤细的螺旋状微生物，因其透明不易染色，故称为苍白螺旋体，长度为8μm～20μm，平均8μm～10μm，直径<0.2μm，有6～12个螺旋。

梅毒螺旋体检查是诊断早期梅毒的最佳方法，也通过羊膜穿刺术获得孕妇的羊水作暗视野显微镜检查，对先天梅毒具有诊断价值。

原理：一期、二期梅毒时，取硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗视野显微镜下，光线从聚光器的边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮光，从而可根据其特殊形态和运动方式进行检测。

检测主要有几种方法：暗视显微镜检查，镀银染色法，直接荧光法。用暗视野检查法检查病损内的梅毒螺旋体，这是一种最可靠的简单而常用的方法；免疫荧光检查法是一种可区别病损中的螺旋体是梅毒螺旋体或其他非致病螺旋体的方法，此法同样具有特异性；而银染色法是一种可显示内脏器官及皮肤损害中螺旋体的方法，但腐生螺旋体也可染色，因此是非特异性染色法。一般常用的是采用暗视显微镜检查。

暗视野映光检查是采用一个特殊的聚光器，中央为黑漆所遮蔽，光线只可从其圆周边缘斜射到载玻片上。倘若斜射光线遇到载玻片上的物体，如螺旋体等，由于菌体和周围液体折光率不同，引起散射的光线可通过镜筒达到观察者。因此，物体在暗视野内发光显现。

暗视野显微镜检查、镀银染色和荧光抗梅毒螺旋体单克隆抗体等检查方法，直接镜检到梅毒螺旋体，在临床可确诊梅毒，且具有快速、方便、易操作的特点。暗视野显微镜检查已被世界卫生组织指定为性病实验室必备项目之一。

螺旋体检查是诊断早期梅毒的最佳方法，对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十分重要的意义。

但如未检测出梅毒螺旋体，也并不能排除患梅毒的可能性，可能是由取材不当或皮损处螺旋体数量不足，或患者使用过抗生素，损害已接近自然消退等原因引起。可让患者复查及进行血清学检查。

三、血清学检测

梅毒的血清学检测是梅毒诊断和抗生素治疗后疗效评估的主要手段，目前大部分医疗机构基本上都是采用此种方法对梅毒进行诊断治疗。梅毒的抗体检测分为非梅毒螺旋体抗原血清学试验和梅毒螺旋体抗原血清学试验两种。

1、非梅毒螺旋体抗原血清学试验：主要有性病研究实验室试验（VDRL），不加热血清反应素试验（USR），快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）。

试验的原理：梅毒螺旋体一旦感染人体，宿主可对螺旋体表面的脂质作出免疫应答，产生抗类脂抗原的抗体（非特异性抗体），试验试剂的基本成分是心磷脂、卵磷脂和胆固醇，抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉眼所见。VDSL：二十世纪50、60年代最为常用的梅毒血清学试验，所用的抗原是从牛心中提取的心磷脂和从鸡蛋黄中提取的卵磷脂及胆固醇等有效成分，梅毒螺旋体在破坏机体组织的过程中，体内释放一种心磷脂抗原，这种抗原可**机体产生相应的抗体即反应素，其与牛心中提取的心磷脂在体外可产生免疫结合反应，试验中所用的卵磷脂的作用是加强心磷脂的抗原性，胆固醇可增强抗原的敏感性。

此方法是唯一推荐检测脑脊液反应素的方法，用于神经梅毒脑脊液检测特异性高，检测阳性可以作为神经梅毒确诊依据，但敏感性较低，即检测阴性不能排除神经梅毒。

此试验有几个明显的缺点，抗原需要每天配制；血清标本要加热灭活处理；需在显微镜下观察结果。因此，后来又推出了改良的USR和RPR等方法。

USR：对VDRL抗原进行了改良，其将VDRL抗原用稀释液稀释后，再将该抗原悬液离心，然后在沉淀物中加入含有EDTA-Na2、氯化胆碱和防腐剂的一定量的缓冲液，EDTA可使抗原半年内不变性，氯化胆碱对补体有化学灭活作用，从而使用时无需每天配制抗原及血清加热灭活处理。

RPR：是在上述USR抗原的基础上加入一定量特制的活性炭颗粒，实验在特制的白色纸片卡上进行，从而使得抗原抗体反应在白色底板上出现黑色的凝集颗粒而可用肉眼观察，结果容易判断，直接用肉眼而不需要用显微镜观测结果。

TRUST：该方法是在抗原试剂中加入特制的染料甲苯胺红，由于甲苯胺红是化学染料，颗粒均匀，生产的批间差异小，结果易于观察。

TRUST是目前最为常用的梅毒筛查方法。

临床意义：非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速、敏感性和特异性较好，可作为梅毒筛查试验。因治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征；结合梅毒螺旋体抗原血清学试验，可以鉴别梅毒现症感染和既往感染。

几种方法的敏感性和特异性都基本相似。

非梅毒螺旋体抗原血清试验敏感性和特异性2.梅毒螺旋体抗原血清学试验：常用的主要有梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA），梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA），梅毒酶联免疫吸附试验（ELISA），化学发光免疫分析法（CLIA），还有如梅毒免疫层析法-梅毒快速检测（RT），荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS），梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB）。

TPHA：所用抗原为将梅毒螺旋体Nichols株经超声破碎后得到的可溶性抗原成分，用其致敏红细胞。同时用Reiter株制成吸收剂稀释血清，可将血清中的非特异性抗体吸收掉，以加强测定的特异性。

TPPA：测定原理基本上与TPHA类同，所不同的是TPPA所用的凝胶颗粒为明胶，而非TPHA中的红细胞。用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒与血清中的抗梅毒螺旋体抗体结合，产生可见的凝集反应，具有较高的敏感性和特异性，是目前公认的梅毒抗原血清学试验的“金标准”，常用于新方法、新试剂的参照标准。

TPPA试验原理示意图ELISA：采用双抗原夹心ELISA法检测梅毒螺旋体特异性IgM和IgG抗体。将高纯度的特异抗原（通常含相对分子质量为5500、17000、44500、47000的蛋白质）包被于微孔反应板（条），待测血清中如存在抗TP抗体，即可与之结合。再加入酶标记的高纯度抗原，在固相上形成抗原抗体复合物与酶标记物结合，待加入酶底物/色原（过氧化服ITMB）液时即产生呈色反应，用酶联检测仪判定试验阳性反应，呈色强度与抗体水平成正比。

本法可用于大样本血清检测，适用于自动化检测系统，是目前梅毒筛查的较好方法。

ELISA试验原理示意图近年出现采用基因工程重组表达的特异性梅毒螺旋体抗原包被固相板，使试验更具有敏感性和特异性，具有简单、快速和高通量的优点，应是梅毒血清学诊断试验的首选方法，但在工作中常出现假阳性的问题，而大多数是由于弱阳性反应引起的。

CLIA：原来与ELISA相同，是在ELISA技术基础上发展而来，以多种梅毒螺旋体特异性蛋白（TpN15、TpN17和TpN47）为固相抗原，并用辣根过氧化物酶（HRP）标记同种蛋白为标记抗原，与患者血清中的梅毒螺旋体抗体形成双抗原夹心复合物，经洗涤，加入底物（发光剂），根据发光强度（RLU）来判断患者血清中是否含有梅毒螺旋体特异性抗体。近年来推出的全自动化学发光法，具有简便、准确、经济的特点，且敏感性、特异性与其他常用方法结果相符合。

是放射免疫分析（Radioimmunoassay，RIA）与酶联免疫分析（Enzymeimmunoassay，EIA）的结合，采用双抗夹心法的原理，使用化学发光底物取代传统的显色底物，增加了检测的灵敏度。

CLIA试验原理示意图RT：一般常用的多是胶体金免疫层析（GICA），是20世纪90年代初建立的一种简易快速稳定的免疫学检测技术，是使用胶体金作为标记物的一种固相膜免疫测定方法。采用纯化重组基因的梅毒抗原包被膜条测试区，加入待测血清后，血清中的抗体与膜条上金标记抗IgG或抗IgM反应，然后通过毛细管效应层折至测试区与包被的特异抗原结合，在测试区出现紫红色条带为阳性。该法简便、快速，不需要特殊的仪器，适合于单人份操作，也适用于较紧急的场合。

有全血和血清、血浆法

全血法：血清、血浆法：FTA-ABS：方法是将梅毒螺旋体Nichols株抗原直接涂在载玻片上，然后将密螺旋体无毒株（Reiter株）制成吸收剂加至待测血清标本中反应30分钟，以去除同属抗原的交叉反应。再将吸收后的血清加到玻片的抗原膜上，37℃温育30分钟，用PBS缓冲液冲洗晾干，再加荧光素标记的抗人IgG，37℃温育后冲洗，晾干，最后在荧光显微镜下观察结果。

本试验由于吸收试剂的使用，提高了测定的特异性，可达92%。由于使用的是梅毒螺旋体Nichols株抗原，密螺旋体各种抗原分子均存在，提高了试验的敏感性，对一期梅毒的敏感80%，二期为99%～100%，三期为95%～100%。

FTA-ABS的结果观察WB：将梅毒螺旋体Nichols株菌体细胞破碎，使用凝胶电泳将梅毒螺旋体各种抗原成分转印到膜条上作为固相，膜条与待测血清和酶标抗体孵育，底物显色后，当血清中存在梅毒特异性抗体时，则在印迹膜上相应的特异性多肽抗原位置出现显色条带。

WB的试验结果：四、两种血清学检测方法的比较

非梅毒螺旋体抗原血清试验优点：1、非梅毒螺旋体血清试验阳性的患者往往是梅毒重症感染者，临床上即可开展治疗。2、非梅毒螺旋体血清试验可以作为疗效观察的指标。3、此类方法价格低廉，操作简便。

缺点：1、特异性：由于在多种疾病，如急性病毒性感染、自身免疫性疾病、结缔组织病、静脉***者以及孕妇中均可出现反应素，所以此类试验有时会出现假阳性反应。2、敏感性：约1%～2%的二期梅毒病人出现前带反应现象导致结