高中生物微生物的培养技术和应用高考知识点复习课件

微生物的培养技术和应用

2026年高考一轮复习

01考情解码·考点定标智能导览·极速定位02体系构建·思维领航03考点突破·考向探究04真题感知·命题洞见考点一

微生物的培养技术知识点1

培养基知识点2无菌技术知识点3微生物的纯培养考向一

培养基的成分、功能和应用分析考向二

无菌技术考向三

微生物的纯培养考点二微生物的选择培养与计数知识点1微生物的选择培养——稀释涂布平板法的操作步骤知识点2微生物的数量测定知识点3土壤中分解尿素的细菌的分离与计数知识点4分解纤维素的微生物的分离

考向一

微生物的选择与培育考向二

微生物的分离与计数

05学以致用·能力提升长句作答类比较归纳类01考情解码·考点定标考情解码·考点定标考点要求考查形式近3年出现频率微生物的培养技术简答题选择题2025.湖南.T52025.江苏.T112025.黑吉辽·T42025.河北.T18

2024·湖南·T6

2024·黑吉辽·T19

2024·山东·T152024·浙江6月选考.T102023·全国乙·T37

2023·河北·T12

2023·重庆·T9

微生物的选择培养与计数简答题选择题2025.黑吉辽·T42025.山东.T152024·贵州·T212024·江西·T172024·重庆·T132024·广东·T21

2024·浙江6月选考·T11考情解码·考点定标考情分析从命题题型来看，参考2025年全国其他地区真题，微生物的培养技术及应用模块可能会以选择题和非选择题的形式出现，且非选择题的比重可能较大。选择题可能会考查微生物的接种方法、培养基的制备等基础知识，非选择题则可能结合生产生活实际，考查微生物的选择培养、计数等。从命题内容上，预计会重点考查培养基的配方、无菌技术、微生物的纯培养过程等，还可能涉及微生物的应用，如利用微生物降解污染物等。考生需要熟练掌握相关实验操作和原理，能够运用所学知识解决实际问题。复习目标1.获得纯净的微生物培养物是发酵工程的基础。2.阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的基础。3.阐明无菌技术是在操作过程中，保持无菌物品和无菌区域不被微生物污染的技术。4.举例说明通过调整培养基的配方可有目的的培养某种微生物。5.概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法。6.概述稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量的常用方法。02体系构建·思维领航体系构建·思维领航无菌技术微生物的接种培养基培养基的种类

培养基营养成分消毒灭菌湿热灭菌干热灭菌灼烧灭菌平板划线法微生物的培养紫外线消毒化学药物消毒巴氏消毒煮沸消毒稀释涂布平板法微生物的选择培养和计数稀释涂布平板法的操作过程微生物的数量测定微生物的选择培养选择培养基间接计数法—稀释涂布平板法直接计数—计数板计数法氮源、碳源、水、无机盐03考点突破·考向探究知识点1

培养基知识夯基

考向研析考点一

微生物的培养技术

人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。1.定义：2.作用：用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。3、培养基的种类：培养基种类培养基特点作用

培养基加凝固剂，如_____半固体培养基容器放倒不致流出，剧烈震动则破散观察微生物的运动、分类鉴定

培养基不加凝固剂固体琼脂液体微生物的分离与鉴定，活菌计数常用于工业生产、微生物的扩大培养知识点1

培养基知识夯基

考向研析考点一

微生物的培养技术注：琼脂仅作为凝固剂，不为微生物生长提供能量和碳源(按物理性质分)知识点1

培养基知识夯基

考向研析考点一

微生物的培养技术选择培养基鉴别培养基如含抗生素的培养基如不加氮源的培养基伊红亚甲蓝（大肠杆菌）酚红（分解尿素菌）刚果红（分解纤维素菌）加高浓度NaCl的培养基培养基的种类(按用途分)选择培养基鉴别培养基如含抗生素的培养基如不加氮源的培养基伊红亚甲蓝（大肠杆菌）酚红（分解尿素菌）刚果红（分解纤维素菌）加高浓度NaCl的培养基培养基的种类(按用途分)知识点1

培养基知识夯基

考向研析考点一

微生物的培养技术水、碳源、氮源、无机盐①碳源无机碳源：有机碳源：②氮源NH4＋、NO3-、NH3等。牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等。CO2、CO32-、HCO3-。葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等。无机氮源：有机氮源：来源于动物，含有糖、维生素和有机氮等营养物质③无机盐Zn、Cu、Mn、Co、Mo等大量元素：微量元素：Ca、K、Mg等牛肉膏、蛋白胨：（自养微生物）（异养微生物）（异养微生物）（自养微生物）④水成分：4、基本成分：知识点1

培养基知识夯基

考向研析考点一

微生物的培养技术其他条件：pH、特殊营养物质和氧气。如下表：微生物乳酸杆菌霉菌细菌厌氧微生物特殊需求添加______pH调至____pH调至____________________维生素酸性中性或弱碱性无氧组分含量

提供的主要营养牛肉膏

5g蛋白胨10gNaCl5g无机盐H2O定容至1000mL水琼脂20g凝固剂培养基的基本成分(主要营养物质)——4种碳源、氮源、磷酸盐和维生素等碳源、氮源和维生素等知识点1

培养基知识夯基

考向研析考点一

微生物的培养技术1.为什么培养基需要氮源？是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的。2.培养微生物时，培养基中是否必须有碳源和氮源？不一定。例如，培养自养型微生物时，一般不需要添加碳源，微生物可以利用空气中的二氧化碳；培养固氮微生物时，一般不需要添加氮源，微生物可以利用空气中的氮气。根据碳/氮源的种类判断微生物同化作用是自养还是异养a.异养型微生物的碳源为b.自养型微生物的碳源为含碳有机物含碳无机物知识点1

培养基知识夯基

考向研析考点一

微生物的培养技术几种微生物的营养和能量来源微生物碳源氮源能源蓝细菌CO2光能硝化细菌CO2NH3NH3的氧化根瘤菌糖类等有机物N2有机物大肠杆菌糖类、蛋白质等有机物蛋白质等有机物自养微生物异养微生物知识点2

无菌技术知识夯基

考向研析考点一

微生物的培养技术1.目的：2.关键：3.方法：获得

的微生物培养物。纯净防止

污染。杂菌消毒与灭菌项目消毒灭菌作用强度较为

的理化因素

的理化因素作用程度杀死物体表面或内部_____微生物杀死物体内外的

微生物芽孢和孢子一般不能杀灭能杀灭适用对象实验操作的空间、操作者衣着和双手微生物培养器皿、接种用具和培养基等温和强烈一部分所有知识夯基

考向研析考点一

微生物的培养技术4.消毒与灭菌的比较：类型适用范围操作方法消毒灭菌较为温和理化方法，杀死部分微生物(不包括芽孢、孢子)强烈的理化方法，杀死所有微生物(包括芽孢、孢子)煮沸消毒法日常生活用品100℃煮沸5～6min巴氏消毒法不耐高温的液体62～65℃煮30min或80-90℃煮30s-1min化学药剂生物活体、水源等擦拭等,如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源紫外线紫外线照射30min灼烧灭菌接种的金属工具、接种时用的试管口或瓶口等直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧干热灭菌耐高温、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金属用具等物品放入干热灭菌箱,160～170℃加热2～3h湿热灭菌培养基、培养皿等,生产和实验室常用高压蒸汽灭菌锅内,100kPa,温度121℃,15～30min接种室、接种箱，超净工作台知识点2

无菌技术知识夯基

考向研析考点一

微生物的培养技术【教材隐性知识】教材隐性知识：源于选择性必修3P10“相关信息”：生物消毒法是指利用生物或其_________除去环境中的部分微生物的方法。代谢物注意：消毒和灭菌的原理都是使微生物的蛋白质变性，借此杀死微生物。但两者的实质不同。消毒的结果实际上是部分灭菌。知识点2

无菌技术注：使用后的培养基必须灭菌后才能丢弃，以免污染环境。知识夯基

考向研析考点一

微生物的培养技术知识点2

无菌技术芽

孢

和

孢

子孢子：细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖作用的无性生殖细胞。能直接发育成新个体。芽孢：有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体(不是繁殖体)，叫作芽孢。知识夯基

考向研析考点一

微生物的培养技术知识点2

无菌技术1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。(1)培养细菌用的培养基与培养皿(2)玻棒、试管、烧瓶和吸管(3)实验操作者的双手无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。(1)、(2)需要灭菌；(3)需要消毒。思考知识夯基

考向研析考点一

微生物的培养技术知识点3

微生物的纯培养最常用的接种方法是______________和_______________。灭菌

分离

平板划线法

稀释涂布平板法

①培养物：②纯培养物：接种于培养基内，在合适条件下形成的含特定种类微生物的群体③纯培养：获得纯培养物的过程1、培养物、纯培养物、纯培养的概念(2)菌落的概念由一个微生物细胞繁殖而来的肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体。配制培养基、________、接种、________和培养等。由单一个体繁殖所获得的微生物群体概念：步骤：④接种方法：微生物在固体培养基表面或内部生长，可以形成肉眼可见的菌落念珠菌霉菌酵母菌放线菌菌落是鉴定菌种的重要依据区分依据：形状、大小、光泽度、颜色、透明度等。知识夯基

考向研析考点一

微生物的培养技术知识点3

微生物的纯培养知识夯基

考向研析考点一

微生物的培养技术知识点3

微生物的纯培养2.酵母菌纯培养的操作步骤配制培养基灭菌接种分离培养等倒平板平板划线法稀释涂布平板法知识夯基

考向研析考点一

微生物的培养技术知识点3

微生物的纯培养15～20g琼脂湿热灭菌(高压蒸汽灭菌)法干热灭菌灭菌前调pH倒平板2.酵母菌纯培养的操作步骤：知识夯基

考向研析考点一

微生物的培养技术知识点3

微生物的纯培养防止水分蒸发过快，防止皿盖上的水珠落入培养基。倒平板注意事项：温度：50℃左右冷凝后平板倒置操作：在酒精灯火焰附近酒精灯火焰灼烧灭菌知识夯基

考向研析考点一

微生物的培养技术知识点3

微生物的纯培养2.酵母菌纯培养的操作步骤：知识夯基

考向研析考点一

微生物的培养技术知识点3

微生物的纯培养平板划线法和稀释涂布平板法恒温培养箱28作对照，检测培养基灭菌是否合格知识夯基

考向研析考点一

微生物的培养技术知识点3

微生物的纯培养用图中字母和箭头表示平板划线操作的正确步骤：

。d→b→f→a→e→c→h→g平板划线法通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。经过数次划线后培养可以分离得到单菌落。知识夯基

考向研析考点一

微生物的培养技术知识点3

微生物的纯培养灼烧时期目的取菌种前每次划线前接种结束后杀死接种环上原有微生物。杀死上次划线残留菌种,使下次划线菌种直接来自上次划线末端杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。12345①接种环只蘸一次菌液平板划线法在划线时注意哪些问题？③划线首尾不能相接④每次划线前灼烧接种环，待冷却后再开始画线。②第二次及其后的划线操作应从上一次划线的末端开始划线知识夯基

考向研析考点一

微生物的培养技术知识点3

微生物的纯培养平板划线法方法：原理：接种和分离对照组：实验组：培养酵母菌未接种平板倒置培养接种平板倒置培养单个细胞聚集的菌种单个菌落连续划线分散生长繁殖结果分析①在未接种的培养基表面是否有菌落生长。②在接种酵母菌的培养基上是否可观察到菌落颜色、形状、大小基本一致，并符合酵母菌菌落特点的单菌落。恒温培养箱知识夯基

考向研析考点一

微生物的培养技术知识点3

微生物的纯培养(1)在未接种的培养基表面是否有菌落生长?如果有,说明了什么?实验结果分析与评价在未接种的培养基表面应该没有菌落生长，如果有，说明培养基被杂菌污染或灭菌不彻底。可以在培养12h和24h后，观察菌落的大小、形状、颜色。培养24h后，菌落的大小、形状是否发生变化，菌落颜色是否加深，光泽度是否增加，等等在接种酵母菌的培养基上可观察到单菌落。如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合酵母菌菌落的特点（一般菌落表面光滑，多呈乳白色)，则说明纯化酵母菌的操作成功；如果观察到了不同形态的菌落，可能是接种的菌种不纯或者无菌操作不规范等原因引起的。(2)在接种酵母菌的培养基上,你是否观察到了单菌落?这些菌落的颜色、形状和大小是否一致?如果你观察到了不同形态的菌落,你能分析出可能是由哪些原因引起的吗?(3)你是如何记录实验结果的?请与其他同学交流、互评。A需要调节PH值才能保证微生物正常生长需要添加碳源也可以用固体培养基

1.培养细菌、真菌的过程一般包括配制培养基、高温灭菌冷却、接种、恒温培养等步骤。下列关于配制培养基的叙述，正确的是（）配制培养基是指将各种营养物质按照一定的比例混合在一起，制成适合细菌、真菌生长的营养基质，一般包括称量、溶解、灭菌等步骤B.配制培养基只能用液体培养基，不能用固体培养基C.培养基中不需要添加碳源，因为细菌、真菌都能自己合成碳源D.配制培养基时不需要考虑pH值，细菌、真菌对pH值要求不高知识夯基考向研析考向1

培养基的成分、功能和应用分析考点一

微生物的培养技术

2.（2020，浙江卷）下列关于微生物培养及利用的叙述，错误的是()A.利用尿素固体培养基可迅速杀死其他微生物，而保留利用尿素的微生物B.配制培养基时应根据微生物的种类调整培养基的pHC.酵母菌不能直接利用糯米淀粉发酵得到糯米酒D.适宜浓度的酒精可使醋化醋杆菌活化A利用尿素固体培养基筛选尿素分解菌时，尿素固体培养基并不直接杀死其他微生物，而是其他微生物不能以尿素为氮源，无法在尿素固体培养基中存活知识夯基考向研析考向1

培养基的成分、功能和应用分析考点一

微生物的培养技术

还要进行湿热灭菌操作3.下表为某培养基的配方，下列叙述正确的是()成分牛肉膏葡萄糖伊红—亚甲蓝琼脂蒸馏水含量适量注：伊红—亚甲蓝可用于检测大肠杆菌，使菌落染成深紫色，带金属光泽。A琼脂是凝固剂，不能为细菌提供碳源能生长多种微生物知识夯基考向研析考向1

培养基的成分、功能和应用分析考点一

微生物的培养技术4.2某同学将5个手指尖在贴有“洗手前”标签的固体培养基上轻轻按一下，然后用肥皂将该手洗干净，再将5个手指尖在贴有“洗手后”标签的同种培养基上轻轻按一下。将这两个培养皿放入37℃恒温培养箱中培养24h后，发现贴有“洗手后”标签的培养皿中菌落较少。下列相关叙述错误的是(

)A.这个实验中需要进行灭菌处理的材料用具有培养皿和培养基等B.“将手指尖在培养基上轻轻按一下”相当于微生物培养中的接种C.从实验结果来看，洗手后的操作不会污染培养基D.培养基中的氮元素是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的C不能说明不会污染培养基知识夯基考向研析考向2

无菌技术考点一

微生物的培养技术5.（2022·湖北卷）灭菌、消毒、无菌操作是生物学实验中常见的操作。下列叙述正确的是()A．动、植物细胞DNA的提取必须在无菌条件下进行B．微生物、动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染C．为防止蛋白质变性，不能用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌D．可用湿热灭菌法对实验中所使用的微量离心管、细胞培养瓶等进行灭菌D动物细胞培养基中需添加一定量抗生素以防止污染，而微生物培养不能加动、植物细胞DNA的提取不需要在无菌条件下进行一般用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌，以防止杂菌污染知识夯基考向研析考向2

无菌技术考点一

微生物的培养技术6.防止杂菌污染是获得纯净的微生物培养物的关键。下列叙述错误的是()A．利用微生物能够寄生于多种细菌体内使细菌裂解，可实现生物消毒B．利用紫外线对超净工作台进行消毒前，喷洒消毒液可加强消毒效果C．利用干热灭菌箱对培养基进行灭菌时，应在160～170℃的热空气中维持1～2hD．利用酒精灯对金属用具进行灼烧灭菌时，应在酒精灯火焰充分燃烧层进行C应用湿热灭菌法（高压蒸汽灭菌法）对培养基进行灭菌知识夯基考向研析考向2

无菌技术考点一

微生物的培养技术D7.下列关于“酵母菌的纯培养”实验的叙述，错误的是(

)A.马铃薯捣烂后的滤液中含有酵母菌生长所需的多种营养成分B.接种环灭菌时，顶端的环和环后的部分柄均需通过火焰灼烧C.平板划线时，接种环应在固体培养基表面轻轻地连续划线D.完成平板划线后，应将平板立刻倒置培养以免污染培养基完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，再将平板倒置培养知识夯基考向研析考向3

微生物的纯培养考点一

微生物的培养技术8.物质A是一种难降解的有机物，细菌X体内存在可降解A的酶。科研人员欲从淤泥中分离得到细菌X，相关叙述正确的是（）需对配制好的培养基进行湿热灭菌用于分离X的培养基蛋添加葡萄糖作为碳源细菌X的纯化与计数可使用平板划线法培养后某平板无菌落生长，则原因不可能是样品稀释倍数过大A只能以物质A为唯一的碳源平板划线法不能用于计数样品稀释倍数过大是可能的原因知识夯基考向研析考向3

微生物的纯培养考点一

微生物的培养技术9.分散的微生物在适宜的固体培养基表面繁殖形成的肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，称为菌落。由单个微生物在固体培养基表面繁殖形成的单菌落就是纯培养物，获取纯培养物的常用方法是平板划线法和稀释涂布平板法。下列有关这两种方法的说法，错误的是(

)A.这两种方法的关键都是要防止杂菌污染以保证获得培养物的纯度B.这两种方法均需同时将接种的平板和未接种的平板倒置进行培养C.接种环和涂布器均需要在火焰上灼烧，且涂布器灼烧前需用酒精引燃D.用稀释涂布平板法统计菌落数目时，所获得的数据往往比实际值大D当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，故用稀释涂布平板法进行微生物的计数时，所获得的数据往往比实际值小。知识夯基考向研析考向3

微生物的纯培养考点一

微生物的培养技术

B

知识夯基考向研析考向3

微生物的纯培养考点一

微生物的培养技术11.(2024·湖南卷)微生物平板划线和培养的

具体操作如图所示，下列操作正确的是(

)DA.①②⑤⑥ B.③④⑥⑦C.①②⑦⑧ D.①③④⑤②中拔出棉塞后应握住棉塞上部；⑥中划线时不能将培养皿的皿盖完全拿开，应只打开一条缝隙；⑦中划线时第5次的划线不能与第1次的划线相连；⑧中平板应倒置培养知识夯基考向研析考向3

微生物的纯培养考点一

微生物的培养技术12.(2020·江苏卷)为纯化菌种，在鉴别培养基上划线接种纤维素降解细菌，培养结果如图所示。下列叙述正确的是(

)BA.倒平板后需间歇晃动，以保证表面平整B.图中Ⅰ、Ⅱ区的细菌数量均太多，应从Ⅲ区挑取单菌落C.该实验结果因单菌落太多，不能达到菌种纯化的目的D.菌落周围的纤维素被降解后，可被刚果红染成红色无需间歇晃动存在单菌落，能达到菌种纯化的目的刚果红能与纤维素形成红色复合物，但不能和纤维素水解后的纤维二糖和葡萄糖等形成红色复合物，因此菌落周围的纤维素被降解后，不能被刚果红染成红色知识夯基考向研析考向3

微生物的纯培养考点一

微生物的培养技术知识点1

微生物的选择培养--稀释涂布平板法的操作步骤知识夯基

考向研析考点二

微生物的选择培养与计数

人为提供有利于目的菌生长的条件（包括营养、温度和pH等），同时抑制或阻止其他微生物的生长。

在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称为选择培养基。实验室中微生物筛选的原理：选择培养基的概念：加入青霉素的培养基不加氮源的无氮培养基不加含碳有机物的无碳培养基分离自养型微生物分离固氮菌分离酵母菌、霉菌等真菌分离金黄色葡萄球菌分离能消除石油污染的微生物加高浓度食盐石油是唯一碳源1.选择培养基项目选择培养基鉴别培养基原理用途举例图示加入不影响甚至促进目标微生物生长，而抑制或阻止其他种类微生物生长的化学物质加入某种指示剂或化学药品(不影响微生物正常生长)，使微生物的某种代谢产物与培养基中的特定指示剂或化学药品发生反应培养、分离出目标微生物鉴别目标微生物培养酵母菌和霉菌时，可在培养基中加入青霉素，抑制细菌的生长；利用以尿素为唯一氮源的培养基来培养可分解尿素的细菌可用伊红亚甲蓝培养基鉴定饮用水或乳制品中是否含有大肠杆菌(若有，则菌落呈深紫色，并有金属光泽知识点1

微生物的选择培养--稀释涂布平板法的操作步骤知识夯基

考向研析考点二

微生物的选择培养与计数

2.选择培养基与鉴别培养基的比较怎样选择出抗氨苄青霉素能力的细菌?培养基中加氨苄青霉素具有氨苄青霉素抗性的菌落没有氨苄青霉素抗性的细菌培养基应有菌落没有氨苄青霉素抗性的细菌被淘汰怎么证明一个选择培养基具有选择性呢？知识点1

微生物的选择培养--稀释涂布平板法的操作步骤知识夯基

考向研析考点二

微生物的选择培养与计数

应该设置基础培养基（如牛肉膏蛋白胨培养基）或完全培养基作为对照，若基础培养基或完全培养基中生长的菌落数菌多于该选择培养基，则该选择培养基具有选择性。基础培养基怎么证明一个选择培养基具有选择性呢？如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？选择培养基知识点1

微生物的选择培养--稀释涂布平板法的操作步骤知识夯基

考向研析考点二

微生物的选择培养与计数

如果想知道1g土壤中有多少能分解尿素的细菌，还需对土壤菌液进行稀释及科学的微生物数量测定方法---稀释涂布平板法。90mL无菌水2铲取土样，将样品装入纸袋中。将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶，充分摇匀13取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中1×101×102知识点1

微生物的选择培养--稀释涂布平板法的操作步骤知识夯基

考向研析考点二

微生物的选择培养与计数

1mL1mL1mL1mL1mL3取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。1×1021×1031×1041×1051×1061×107知识点1

微生物的选择培养--稀释涂布平板法的操作步骤知识夯基

考向研析考点二

微生物的选择培养与计数

1×107知识点1

微生物的选择培养--稀释涂布平板法的操作步骤知识夯基

考向研析考点二

微生物的选择培养与计数

待涂布的菌液被培养基吸收后,将平板倒置,放入30~37℃的恒温培养箱中培养1~2d。在涂有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落培养：7知识点1

微生物的选择培养--稀释涂布平板法的操作步骤知识夯基

考向研析考点二

微生物的选择培养与计数

主要方法稀释涂布平板法平板划线法主要步骤接种工具菌体获取能否用于计数共同点系列梯度稀释操作和涂布平板操作接种环在固体培养基表面连续划线涂布器接种环从适宜稀释度的平板上的菌落中挑取菌体在具有显著的菌落特征的区域挑取菌体可以计数，但是操作复杂，需涂布多个平板不能计数使培养基上形成由单个细菌细胞繁殖而来的子细胞群体——菌落稀释涂布平板法和平板划线法的比较知识点1

微生物的选择培养--稀释涂布平板法的操作步骤知识夯基

考向研析考点二

微生物的选择培养与计数

稀释涂布平板计数法——间接计数法（1）原理：当样品的稀释度足够

时，培养基表面生长的一个

，来源于

中的一个

。通过计数平板上的

数，就能推测出样品中大约含有多少

。高菌落样品稀释液活菌菌落活菌样品的稀释度将直接影响平板上的菌落数目知识点2

微生物的数量测定知识夯基

考向研析考点二

微生物的选择培养与计数

（2）计数原则：选择菌落数为30~300的平板计数。同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值统计的菌落往往比活菌的实际数目低统计的结果一般用菌落数而不是活菌数。恰当的稀释度、涂布是否均匀是成功统计菌落数目的关键。原因：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。知识点2

微生物的数量测定知识夯基

考向研析考点二

微生物的选择培养与计数

稀释涂布平板计数法——间接计数法快速、直观显微镜直接计数法——直接计数法两者计数原理相同原理：利用细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下观察、计数。优点：缺点：

不能区分死菌与活菌对细菌等较小的细胞进行观察和计数常用于相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数思考:为了避免上述缺点，我们该如何做？可以染色（如使用台盼蓝，死细胞会被染成蓝色）后再进行显微镜计数。知识点2

微生物的数量测定知识夯基

考向研析考点二

微生物的选择培养与计数

知识夯基

考向研析考点二

微生物的选择培养与计数

项目直接计数法间接计数法原理利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌主要用具显微镜、细菌计数板培养基计数数据菌体本身培养基上菌落数优点计数方便、操作简单计数的是活菌缺点死菌、活菌都计算在内操作较复杂，有一定误差计算公式每毫升原液含菌数=每小格平均菌体数×400×10000×稀释倍数每毫升原液含菌数=培养基上平均菌落数×稀释倍数÷涂布液体积比较稀释涂布平板法和显微镜直接计数法知识点2

微生物的数量测定尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素施入土壤后，会被土壤中的某些细菌分解成NH3，再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。而这些细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可以作为细菌生长的氮源。讨论：1.如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养

基的配方该如何设计？设计一种选择培养基，以尿素作为唯一氮源。(细菌生长的氮源)尿素NH3脲酶尿素分解菌尿素2.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？

除以尿素作为唯一氮源外，该培养基的其他营养成分与普通培养基基本相同。知识点3

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数知识夯基

考向研析考点二

微生物的选择培养与计数

知识夯基

考向研析考点二

微生物的选择培养与计数

实验原理①士壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶；②配制以尿素为唯一氮源的培养基，能够在该培养基中生长的细菌就是能分解尿素的细菌葡萄糖10.0g尿素1.0gKH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g琼脂15.0g蒸馏水1000ml①制备选择培养基（尿素为唯一氮源）提供无机盐；调节pH②制备牛肉膏蛋白胨培养基培养基的制备知识点3

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数细菌宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤中生长，绝大部分分布在距地表3~8cm的土壤层。铲去表层土3cm左右，取样，将样品装入事先准备好的信封中。①土壤取样

取土样时用的铁铲和取样袋在使用前都需要灭菌。操作完成后，一定要洗手。步骤：公园里、街道旁、花盆中城市：农田里、菜园里农村：知识夯基

考向研析考点二

微生物的选择培养与计数

知识点3

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数测细菌数：一般用104、105、106稀释液。测放线菌：一般用103、104、105稀释液。测真菌数：一般用102、103、104稀释液。不同微生物在土壤中含量不同，分离不同的微生物采用不同的稀释度，以保证获得菌落数在30～300之间适于计数的平板。在初次实验中，对于稀释的范围没有把握，怎样做才能保证从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数？选用稀释范围更大的稀释液进行平板培养知识夯基

考向研析考点二

微生物的选择培养与计数

知识点3

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。1×101mL1mL1mL1mL1mL1mL1×1021×1031×1041×1051×1061×1079mL无菌水90mL无菌水10g②样品的稀释知识夯基

考向研析考点二

微生物的选择培养与计数

知识点3

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数步骤：(1)每个浓度设置了

个平板，3个平板是选择培养基（

实验），1个平板为

培养基（条件对照：验证选择培养基是否具有选择作用）；(2)另外，整个实验还要设置

个空白

对照平板：未接种的__________________________培养基，以验证培养基

中是否有杂菌污染。4重复牛肉膏蛋白胨2

选择培养基和牛肉膏蛋白胨③样品的稀释与涂布平板知识夯基

考向研析考点二

微生物的选择培养与计数

知识点3

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数步骤：设置对照：判断选择培养基是否具有筛选作用以验证培养基中是否含有杂菌通用型培养基上所有菌种都生长选择培养基上部分菌种才能生长不涂布稀释液的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基知识夯基

考向研析考点二

微生物的选择培养与计数

知识点3

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数步骤：④培养与观察恒温培养箱待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30-37℃的恒温培养箱中，培养1-2d。知识夯基

考向研析考点二

微生物的选择培养与计数

知识点3

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数步骤：内容现象结论有无杂菌污染的判断对照的培养皿中无菌落生长未被杂菌污染培养基中菌落数偏高被杂菌污染菌落形态多样，菌落数偏高培养基中混入其他杂菌选择培养基的筛选作用牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目大于选择培养基上的数目选择培养基具有筛选作用样品的稀释操作得到3个或3个以上菌落数目在30~300的平板操作成功重复组的结果若选取同一土样，统计结果应接近知识夯基

考向研析考点二

微生物的选择培养与计数

知识点3

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数总结1.结合对照组，分析培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出一些菌落。如果没有接种的培养基上没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。如果接种后的完全培养基上的菌落数明显多于选择培养基上的菌落数，说明选择培养基筛选出了一些尿素分解菌。2.你是否获得了某一稀释度下菌落数为30-300的平板？在这一稀释度下，是否至少有2个平板的菌落数接近？如果得到了两个或多个菌落数为30-300的平板，说明稀释度合适，操作比较成功，能够进行菌落的计数。知识夯基

考向研析考点二

微生物的选择培养与计数

知识点3

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数思考3.你统计的每克土样中能分解尿素的细菌的菌落数是多少？与其他同学统计的结果接近吗？如果差异很大，可能是什么原因引起的？如果是用同一土样进行的操作，数据应该比较接近。如果差异很大，就需要从操作是否规范、培养基配制是否合理等方面查找原因。4.得到的菌落一定是分解尿素的细菌吗？不一定，还需要进一步的鉴定如自生固氮菌或利用（分解尿素的）细菌的代谢物进行生长繁殖的微生物知识夯基

考向研析考点二

微生物的选择培养与计数

知识点3

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数思考知识夯基

考向研析考点二

微生物的选择培养与计数

知识点3

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数进一步探究在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。原理：脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→酚红变红酚红培养基——鉴定分解尿素的细菌脲酶CO（NH2）2+H2O CO2+2NH3知识夯基

考向研析考点二

微生物的选择培养与计数

知识点4

分解纤维素的微生物的分离分离方法与原理方法：鉴定原理：利用富含纤维素的选择培养基进行选择培养以纤维素为唯一碳源，加入刚果红染料纤维素刚果红红色复合物培养基成分：纤维素酶红色消失现透明圈纤维素分解菌红色环带直径与菌落直径比值越大，说明分解能力越强。知识夯基

考向研析考点二

微生物的选择培养与计数

知识点4

分解纤维素的微生物的分离土壤取样→富含纤维素的环境→制备系列稀释液→筛选产生透明圈的菌落梯度稀释富集培养涂布平板挑选→以纤维素为唯一碳源，增加目的菌浓度（选择培养基）→将样品涂布到含刚果红的培养基上（鉴别培养基）1.(2023·广东卷)研究者拟从堆肥中取样并筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌。根据堆肥温度变化曲线(如图)和选择培养基筛选原理来判断，下列最可能筛选到目标菌的条件组合是(

)DA.A点时取样、尿素氮源培养基B.B点时取样、角蛋白氮源培养基C.B点时取样、蛋白胨氮源培养基D.C点时取样、角蛋白氮源培养基研究目的是筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌，因此目标菌具有既耐高温，又能够高效降解角蛋白的功能，所以在C点时取样，并且用角蛋白氮源培养基进行选择培养知识夯基考向研析考向1

微生物的选择与培育考点二

微生物的选择培养与计数

A2.野生型大肠杆菌菌株能在基本培养基上生长，氨基酸营养缺陷型突变株无法合成某种氨基酸，只能在完全培养基上生长，下图为纯化某氨基酸营养缺陷型突变株的部分流程图，①②③④代表培养基，A、B、C表示操作步骤，D、E为菌落。下列叙述错误的是(

)A.图中①②④为基本培养基，③为完全培养基B.A操作的目的是提高突变频率，增加突变株的数量C.B的正确操作是用涂布器把菌液均匀地涂布在②表面D.经C过程原位影印及培养后，可从④中挑取D进行纯化培养知识夯基考向研析考向1

微生物的选择与培育考点二

微生物的选择培养与计数

菌落①的透明圈范围大，而且菌落小，说明菌落①降解纤维素能力强，因此菌落①是需要筛选和分离的目标菌株3.研究人员筛选和分离纤维素分解菌，在刚果红培养基平板上，筛选到有透明圈的菌落，所形成的菌落如图所示。相关说法错误的是()DA.纤维素基本单位是葡萄糖B.透明圈的形成是由于纤维素被分解后刚果红不能与纤维素结合形成红色复合物C.透明圈可能是分解刚果红的菌种形成的，为确定得到的是纤维素分解菌还需进行发酵产纤维素酶实验D.菌落②的中心区域最大，纤维素分解菌含量多，是需要筛选和分离的目标菌株知识夯基考向研析考向1

微生物的选择与培育考点二

微生物的选择培养与计数

4.厨房中的厨余垃圾多为湿垃圾，湿垃圾处理的有效方法之一是用微生物对其进行降解。如图表示筛选高效降解淀粉菌种的过程。下列有关叙述错误的是(

)DA.配制培养基后需进行灭菌处理，常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌法B.菌落①与菌落②周围产生了透明圈，说明菌落①与菌落②能产生淀粉酶C.培养基上的一个菌落可能来源于样品稀释液中的一个甚至几个活菌D.初步判断培养基上菌种的类型，需要用显微镜观察菌体的形态特征菌落肉眼可见知识夯基考向研析考向1

微生物的选择与培育考点二

微生物的选择培养与计数

5.(2024·重庆卷)养殖场粪便是农家肥的重要来源，其中某些微生物可使氨氮化合物转化为尿素进而产生NH3，影响畜禽健康。为筛选粪便中能利用氨氮化合物且减少NH3产生的微生物。兴趣小组按图进行实验获得目的菌株，正确的是(

)CA.①通常在等比稀释后用平板划线法获取单个菌落B.②挑取在2种培养基上均能生长的用于后续的实验C.③可通过添加脲酶并检测活性，筛选得到甲、乙D.粪便中添加菌株甲比乙更有利于NH3的减少平板划线法无需稀释②筛选不能在尿素唯一氮源培养基上生长，而能在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌株用于后续的实验菌株乙比甲更有利于NH3的减少知识夯基考向研析考向2

微生物的分离与计数

考点二

微生物的选择培养与计数

A6.北京冬奥会食堂让各国运动健儿爱上中国味道，其餐余垃圾在垃圾集中点采用生化＋雾化＋膜过滤技术处理后，可以达到无二次污染的标准。为筛选对抗生素有抗性、高效降解淀粉的微生物，提高“生化”处理的效率，研究人员将餐余垃圾机械化处理后加入装有无菌水的锥形瓶中制备餐余垃圾浸出液，然后进行如图所示操作，下列说法错误的是(

)A.餐余垃圾浸出液在接种前通常需要进行高压蒸汽灭菌处理B.可用稀释涂布平板法将餐余垃圾浸出液接种在X培养基上C.X培养基含有淀粉和抗生素，Y培养基是不含琼脂的液体培养基D.图中高效降解淀粉的微生物是⑤，可根据菌落特征初步判断微生物类型知识夯基考向研析考向2

微生物的分离与计数

考点二

微生物的选择培养与计数

计数结果较真实值低7.尿素是一种重要的农业肥料，经土壤中的细菌分解后才能被植物利用。某生物兴趣小组开展了“土壤中分解尿素的细菌分离与计数”的实验，具体操作流程如图所示。某同学接种了3个培养基平板，一段时间后3个平板中分别长出了54个、46个、50个菌落。下列相关叙述错误的是()D知识夯基考向研析考向2

微生物的分离与计数

考点二

微生物的选择培养与计数

8.(2024·浙江6月)脲酶催化尿素水解，产生的氨可作为细菌的氮源。脲酶被去除镍后失去活性。下列叙述错误的是()A.镍是组成脲酶的重要元素B.镍能提高尿素水解反应的活化能C.产脲酶细菌可在以NH4Cl为唯一氮源的培养基生长繁殖D.以尿素为唯一氮源的培养基可用于筛选产脲酶细菌B脲酶催化尿素水解的机理为降低化学反应所需的活化能，镍作为脲酶的重要组成元素，应该与降低尿素水解反应的活化能有关知识夯基考向研析考向2

微生物的分离与计数

考点二

微生物的选择培养与计数

04真题感知·命题洞见1.（2025，安徽，节选）稻瘟病是一种真菌病害，水稻叶片某些内生放线菌对该致病菌有抑制作用。科研小组分离筛选出内生放线菌，并开展了相关研究。回答下列问题。（1）采集有病斑的水稻叶片，经表面消毒、研磨处理，制备研磨液。此后，采用______________（填方法）将研磨液接种于不同的选择培养基，分别置于不同温度下培养，目的是______________________________________。(1)稀释涂布平板法

分离不同条件下生长的内生放线菌

真题感知·命题洞见（1）从含有多种微生物的研磨液中分离出单一菌落，并接种到选择培养基中常用的接种方法是稀释涂布平板法。使用选择培养基和不同的温度条件，目的是为了抑制其他杂菌的生长，分离不同条件下生长的内生放线菌。2.（2025·湖南）采集果园土壤进行微生物分离或计数。下列叙述正确的是（）A.稀释涂布平板法和平板划线法都能用于尿素分解菌的分离和计数B.完成平板划线后，培养时需增加一个未接种的平板作为对照C.土壤中分离得到的醋酸菌能在无氧条件下将葡萄糖分离成乙酸D.用于筛选尿素分解菌的培养基含有蛋白胨、尿素和无机盐等营养物质B真题感知·命题洞见稀释涂布平板法可通过菌落数进行计数，而平板划线法仅用于分离纯化菌种，无法计数，A错误；醋酸菌为严格好氧菌，其代谢需氧气，无氧条件下无法将葡萄糖转化为乙酸，C错误；筛选尿素分解菌的培养基应以尿素为唯一氮源，若含蛋白胨（含其他氮源），则无法筛选目标菌，D错误。3.（2025·山东）深海淤泥中含有某种能降解纤维素的细菌。探究不同压强下，该细菌在以纤维素或淀粉为唯一碳源的培养基上的生长情况。其他条件相同且适宜，实验处理及结果如表所示。下列说法正确的是（

）A.可用平板划线法对该菌计数B.制备培养基的过程中，应先倒平板再进行高压蒸汽灭菌组别压强纤维素淀粉菌落①常压-+-②常压+--③高压-+-④高压+-+D真题感知·命题洞见注：

“+”表示有；“一”表示无C.由②④组可知，在以纤维素为唯一碳源的培养基上，该菌可在常压下生长D.由③④组可知，高压下该菌不能在以淀粉为唯一碳源的培养基上生长A、平板划线法是用来分离和纯化微生物，获得单个菌落的技术，其主要目的是分离而不是计数。用于活菌计数的方法通常是稀释涂布平板法，A错误；B、制备固体培养基（琼脂平板）的正确流程是：先将培养基成分溶解、调整pH值后，分装到三角瓶中，然后进行高压蒸汽灭菌。待培养基冷却至50℃左右时，再在无菌条件下（如超净工作台）倒入无菌的培养皿中（即“倒平板”），B错误；C、组②为常压+纤维素，结果无菌落，而组④为高压+纤维素，结果是有菌落。

这个对比恰好说明，在以纤维素为碳源的条件下，该菌不能在常压下生长，而能在高压下生长，C错误；D、③④组形成了一个对照实验，变量是碳源。实验结果表明，在高压条件下，该细菌可以利用纤维素生长（组④），但不能利用淀粉生长（组③），D正确。4.(2025·江苏)从种植草莓的土壤中分离致病菌，简易流程如下：制备土壤悬液、分离、纯化、鉴定。下列相关叙述正确的是（

）A．制备的培养基可用紫外线照射进行灭菌B．将土样加入无菌水混匀，梯度稀释后取悬液加入平板并涂布C．连续划线时，接上次划线的起始端开始划线D．鉴定后的致病菌，可接种在斜面培养基上，并在室温下长期保存B真题感知·命题洞见A、制备的培养基需用高压蒸汽灭菌法灭菌，紫外线仅用于表面或空气消毒，无法灭菌，A错误；

B、将土样加入无菌水制成悬液，经梯度稀释后，取各稀释度菌液涂布于培养基表面，分离并计数，B正确；

C、连续划线时，每次应从上次划线的末端开始，以逐步稀释菌体，若从起始端开始无法有效分离单菌落，C错误；D、斜面培养基保存菌种需置于4℃短期保存，长期保存应使用甘油管藏法（-20℃），室温下无法长期保存，D错误。5.(2025·河北)隐甲藻是一种好氧的异养真核微藻。多在海水中腐烂的植物叶片上生长繁殖，是工业生产DHA（一种功能性脂肪酸）的藻类之一、从海洋中筛选获得的高产油脂隐甲藻，可用于DHA的发酵生产。下列叙述正确的是（

）A．隐甲藻可从腐烂的叶片获得生长必需的碳源B．采集海水中腐烂的叶片，湿热灭菌后接种到固体培养基，以获得隐甲藻C．选择培养基中可加入抑制细菌生长的抗生素，以减少杂菌生长D．适当提高发酵时的通气量和搅拌速率均可增加溶氧量，以提高DHA产量ACD真题感知·命题洞见A、根据题目信息“隐甲藻是一种好氧的异养真核微藻，多在海水中腐烂的植物叶片上生长繁殖”可知，隐甲藻可从腐烂的叶片获得生长必需的碳源，A正确；B、采集海水中腐烂的叶片进行湿热灭菌后，会杀死所有的微生物，此时接种到固体培养基上无法获得隐甲藻，B错误；C、根据题目信息可知，隐甲藻为真核生物，抗生素可通过抑制细菌细胞壁合成或影响代谢过程来抑制细菌生长，不会影响真核生物的生命活动，因此在筛选或培养隐甲藻时，加入抗生素可有效抑制细菌杂菌，提高隐甲藻的纯度和生长效率，C正确；D、根据题目信息可知，隐甲藻为好氧生物，因此利用隐甲藻进行DHA发酵生产时，适当提高发酵时的通气量和搅拌速率均可增加溶氧量，以提高DHA产量，D正确。05学以致用·能力提升(1)(选择性必修3P10)培养基的化学成分包括

等。(2)(选择性必修3P10)获得纯净的微生物培养物的关键是

，无菌技术除了用来

外，还能

。(3)(选择性必修3P12)菌落是指_______________