pcr技术上岗证考试题及答案

pcr技术上岗证考试题及答案PCR技术上岗证考试试卷一、单项选择题（每题2分，共30分）1.PCR技术是由谁发明的？（）A.穆里斯B.沃森C.克里克D.桑格2.PCR反应的基本步骤不包括以下哪一项？（）A.变性B.退火C.延伸D.转录3.在PCR反应中，引物的作用是（）A.提供模板B.催化反应C.确定扩增的起始和终止位置D.提供能量4.PCR反应中，TaqDNA聚合酶的最适温度是（）A.55℃B.72℃C.94℃D.37℃5.下列哪种物质不是PCR反应体系的组成成分？（）A.模板DNAB.dNTPC.引物D.蛋白酶6.PCR反应中，变性温度一般为（）A.5565℃B.72℃C.9498℃D.37℃7.退火温度通常取决于（）A.引物的长度B.引物的GC含量C.模板的长度D.模板的GC含量8.以下哪种PCR技术可以用于定量检测核酸的含量？（）A.普通PCRB.实时荧光定量PCRC.巢式PCRD.逆转录PCR9.在实时荧光定量PCR中，常用的荧光标记方法不包括（）A.SYBRGreenI荧光染料法B.TaqMan探针法C.分子信标法D.免疫荧光法10.逆转录PCR（RTPCR）的第一步是（）A.DNA变性B.RNA逆转录为cDNAC.引物退火D.DNA延伸11.巢式PCR与普通PCR相比，其主要优点是（）A.扩增效率更高B.特异性更强C.灵敏度更高D.操作更简单12.PCR实验室的分区不包括以下哪个区域？（）A.试剂准备区B.标本制备区C.扩增区D.血清学检测区13.PCR实验室的空气流向应该是（）A.从污染区流向清洁区B.从清洁区流向污染区C.各区域独立，无空气流通D.随意流动14.在PCR实验中，防止交叉污染的措施不包括（）A.严格分区操作B.定期对实验室进行清洁和消毒C.不同实验使用同一套移液器D.使用一次性耗材15.以下哪种情况可能导致PCR扩增失败？（）A.引物设计不合理B.TaqDNA聚合酶活性过高C.dNTP浓度过高D.模板DNA量过多二、多项选择题（每题3分，共30分）1.PCR技术的应用领域包括（）A.基因克隆B.疾病诊断C.法医鉴定D.物种鉴定2.PCR反应体系中，dNTP的作用包括（）A.提供合成DNA的原料B.维持反应体系的pH值C.参与DNA链的延伸D.提供能量3.影响PCR扩增效果的因素有（）A.引物的质量和浓度B.模板DNA的质量和浓度C.TaqDNA聚合酶的活性D.反应缓冲液的成分和pH值4.实时荧光定量PCR的优点有（）A.灵敏度高B.特异性强C.可进行定量分析D.无需电泳检测5.TaqMan探针法的特点包括（）A.特异性高B.荧光信号强C.可进行多重PCR检测D.价格相对较低6.逆转录PCR可用于（）A.检测RNA病毒B.分析基因表达水平C.合成cDNA文库D.扩增DNA片段7.巢式PCR的特点有（）A.两轮PCR扩增B.使用两对引物C.特异性高D.灵敏度高8.PCR实验室的质量控制措施包括（）A.人员培训B.仪器设备的校准和维护C.室内质量控制D.室间质量评价9.在PCR实验中，正确的操作规范包括（）A.戴手套和口罩B.严格按照操作规程进行加样C.避免移液器头接触试剂和样品以外的物品D.实验结束后及时清理工作台10.导致PCR产物出现非特异性扩增的原因可能有（）A.引物特异性差B.退火温度过低C.模板DNA中存在杂质D.TaqDNA聚合酶用量过多三、判断题（每题2分，共20分）1.PCR技术只能扩增双链DNA模板。（）2.在PCR反应中，dNTP的浓度越高，扩增效果越好。（）3.实时荧光定量PCR可以对核酸进行绝对定量和相对定量分析。（）4.TaqMan探针法的荧光信号是在PCR延伸阶段产生的。（）5.逆转录PCR只能用于检测RNA病毒。（）6.巢式PCR的第二轮PCR扩增使用的引物与第一轮相同。（）7.PCR实验室的各个区域可以不设置缓冲间。（）8.为了提高PCR扩增效率，可以随意增加TaqDNA聚合酶的用量。（）9.在PCR实验中，只要引物设计合理，就不会出现非特异性扩增。（）10.PCR产物的大小可以通过电泳检测来确定。（）四、简答题（每题10分，共20分）1.简述PCR技术的基本原理。2.请列举三种防止PCR实验中交叉污染的措施，并简要说明。答案一、单项选择题1.A2.D3.C4.B5.D6.C7.B8.B9.D10.B11.B12.D13.B14.C15.A二、多项选择题1.ABCD2.AC3.ABCD4.ABCD5.ABC6.ABC7.ABCD8.ABCD9.ABCD10.ABCD三、判断题1.×2.×3.√4.√5.×6.×7.×8.×9.×10.√四、简答题1.PCR技术的基本原理：PCR即聚合酶链式反应，是一种体外扩增特定DNA片段的技术。其基本原理类似于DNA的天然复制过程，主要包括以下几个步骤：首先将含有待扩增DNA片段的双链DNA模板在高温（一般为9498℃）下进行变性，使双链DNA解开成为单链，为引物结合提供模板；然后降低温度（一般为5565℃），使人工合成的一对特异性引物分别与两条单链DNA模板的互补序列结合，这个过程称为退火；接着在适宜的温度（一般为72℃）下，TaqDNA聚合酶以dNTP为原料，从引物的3’端开始，沿着模板链按照碱基互补配对的原则合成新的DNA链，这个过程称为延伸。经过一轮变性、退火和延伸，DNA模板的数量增加一倍。重复进行上述循环，每一轮循环都会使DNA模板的数量呈指数级增长，经过n轮循环后，DNA片段的扩增倍数理论上可达2ⁿ倍。2.防止PCR实验中交叉污染的措施：严格分区操作：PCR实验室通常分为试剂准备区、标本制备区、扩增区和产物分析区等不同区域。每个区域有独立的仪器设备和耗材，人员在不同区域操作时应更换工作服、手套和口罩等，严格按照从清洁区到污染区的顺序进行操作，避免不同区域之间的交叉污染。例如，在试剂准备区只进行PCR反应所需试剂的准备工作，在标本制备区进行样品的处理和核酸提取，在扩增区进行PCR扩增反应，在产物分析区进行扩增产物的检测和分析。使用一次性耗材：在PCR实验中，应使用一次性的移液器吸头、离心管等耗材，并且每吸取一种试剂或样品都要更换新的吸头，避免移液器吸头残留的试剂或样品污染其他试剂和样品。例如，在加样过程中，使用新的吸头吸取模板DNA、引物、dNTP等试剂，防止不同试剂之间的交叉污染。定期对实验室进行清洁和消毒：定