液相色谱仪操作规程标准化手册

液相色谱仪操作规程标准化手册前言本手册旨在规范液相色谱仪的操作流程，确保仪器分析过程的准确性、精密性与安全性，保障实验数据的可靠性，并延长仪器使用寿命。凡使用本实验室液相色谱仪的人员，均须仔细阅读并严格遵守本规程。本手册适用于常规分析操作，特殊分析方法可在此基础上制定补充规程。一、适用范围本规程适用于本实验室所配置的[此处可填写具体品牌型号，若为通用手册可省略或表述为“常规高效液相色谱仪”]及其配套的检测器（如紫外-可见检测器、二极管阵列检测器等）、自动进样器、柱温箱等模块。二、职责1.操作人员：负责按照本规程进行仪器的日常操作、样品分析、数据记录与初步处理，以及实验后仪器的清洁与整理。2.仪器管理员：负责仪器的定期维护保养、性能核查、故障报修，以及本规程的宣贯与修订。3.实验室负责人：监督本规程的执行情况，确保实验安全与质量。三、操作流程3.1操作前准备与检查1.环境检查：确认实验室温度、湿度在仪器要求范围内，无强烈震动、腐蚀性气体及易燃易爆物品。2.电源检查：检查供电系统是否稳定，接地是否良好。3.流动相准备：*根据分析方法要求，选用色谱纯或分析纯以上级别的溶剂，并确保其在有效期内。*流动相需经合适孔径的滤膜（如水相用有机相滤膜，有机相用有机相滤膜，混合相根据比例选择或分别过滤后混合）真空过滤，以去除颗粒物。*对需要脱气的流动相，进行超声脱气或在线脱气处理，以避免气泡对泵和检测的影响。注意超声脱气时应将容器盖子松开，防止溶剂挥发或容器爆裂。*检查流动相的组成、配比是否正确，标签是否清晰完整，注明名称、浓度、配制日期及配制人。4.样品准备：*样品需按照分析方法进行预处理（如溶解、萃取、稀释、过滤等）。*确保样品溶液澄清，必要时通过0.45μm或更小孔径的滤膜过滤，避免污染色谱柱和仪器流路。*将处理好的样品注入进样瓶，盖紧瓶盖，做好清晰标记。5.仪器部件检查：*色谱柱：根据分析方法选择合适的色谱柱，检查色谱柱型号、规格是否与方法一致，柱身有无破损，接头是否完好。新色谱柱使用前需查阅说明书进行活化，旧色谱柱需确认其是否适用于当前分析条件。*检测器：检查检测池是否清洁，光路是否正常（如紫外检测器的氘灯能量）。*自动进样器：检查样品盘是否清洁，进样针是否通畅、有无弯曲损坏，废液瓶是否需要清空。*溶剂瓶：检查溶剂瓶是否清洁，瓶盖及管路连接处是否密封良好，溶剂过滤头是否清洁、无堵塞。3.2开机与系统平衡1.安装流动相：将配制好的流动相正确装入溶剂瓶，确保管路过滤器完全浸入液面以下。若更换了不同种类的溶剂，应先用新溶剂冲洗溶剂瓶和管路过滤器。2.连接色谱柱：小心将色谱柱安装到柱温箱中，注意流向标识，确保连接方向正确。连接时避免过度用力，以防损坏螺纹或色谱柱接口。若系统久未使用或更换了流动相体系，建议先断开色谱柱与检测器的连接，用两通代替，待流动相流经色谱柱后再连接检测器，以避免污染检测池。3.开机顺序：通常建议先开启泵和柱温箱，待系统压力稳定、柱温达到设定值后，再开启检测器和工作站软件。具体顺序可参考仪器说明书。4.排气泡：*打开purge阀（或松开泵头排气螺丝），设定较低流速（如5mL/min左右，具体参照仪器说明），启动泵，让流动相流经管路，直至管路中无气泡排出。*关闭purge阀（或拧紧泵头排气螺丝），观察系统压力是否平稳。5.设置参数：在工作站软件中设置或调用分析方法，包括流动相组成（比例或梯度程序）、流速、柱温、检测波长（或其他检测参数）、进样量、运行时间等。6.系统平衡：启动泵，以分析流速运行流动相，对色谱柱进行平衡。观察基线变化，直至基线平稳（噪音和漂移在可接受范围内），通常需要至少30分钟，对于某些特殊色谱柱或流动相体系，可能需要更长时间。平衡过程中，检测器应处于开启状态。3.3样品分析1.样品装载：将准备好的样品瓶按顺序放入自动进样器的样品盘中，并在软件中正确设置样品位置信息。2.方法确认：再次核对工作站中当前调用或设置的分析方法参数是否与实验要求一致。3.空白与标准品运行：*通常先注入空白样品（如流动相或样品溶剂），检查系统是否有干扰峰。*然后注入标准品溶液，进行系统适用性试验，检查理论塔板数、分离度、重复性、拖尾因子等是否符合方法要求。若不符合，需查找原因并解决后方可进行样品分析。4.样品测定：按照设定的序列或手动进样方式，启动样品分析程序。5.过程监控：分析过程中，密切关注工作站软件显示的压力曲线、基线、色谱峰形等，如有异常（如压力突然升高或降低、基线剧烈波动、峰形异常等），应及时暂停实验，查明原因并处理。6.数据记录：确保工作站软件正确记录所有样品的色谱图及相关数据。3.4关机程序1.实验结束确认：所有样品分析完成后，确认数据已正确保存。2.冲洗系统：*反相色谱：若流动相中含有缓冲盐，应先使用不含盐的过渡流动相（如甲醇/水或乙腈/水，比例与原流动相近）冲洗系统和色谱柱（通常需冲洗至少15-30个柱体积），以去除色谱柱中的盐类，防止盐析出堵塞色谱柱或管路。然后再用纯有机溶剂（如甲醇或乙腈）冲洗色谱柱（通常10-15个柱体积），以保护色谱柱。*正相色谱：根据所用流动相和色谱柱的要求，选择合适的溶剂进行冲洗和保存。*冲洗过程中，可适当提高流速，但不宜超过色谱柱的最大耐受流速。冲洗时检测器可关闭或置于备用状态。3.停泵与关闭模块：*冲洗完成后，停止泵运行。*依次关闭检测器、柱温箱等模块的电源。4.关闭工作站与总电源：退出工作站软件，关闭计算机。最后关闭仪器主电源及实验室总电源（若有必要）。5.拆卸色谱柱（如需要）：若仪器长时间不使用，可将色谱柱从仪器上拆下，两端用堵头密封，妥善保存于规定环境中。3.5实验后整理1.清理实验台面：及时清理实验过程中产生的废液、废弃物，保持台面整洁。2.流动相处理：剩余流动相应妥善保存或按规定处理，不得随意倾倒。3.进样器清洁：若使用手动进样器，实验结束后应用适当溶剂冲洗进样针和进样阀。自动进样器按仪器维护要求定期清洁。4.填写记录：认真填写仪器使用记录，包括使用日期、时间、样品名称、分析方法、仪器运行状况、有无异常等。四、注意事项1.安全第一：*操作有机试剂时，应在通风橱内进行，避免吸入挥发气体。*佩戴适当的个人防护用品，如实验服、护目镜、手套等。*注意防火防爆，远离火源，妥善保管易燃易爆溶剂。2.流动相相关：*避免使用会引起色谱柱损伤或检测器响应异常的溶剂。*混合流动相时，注意混合顺序，防止因混合放热或溶解度变化产生沉淀。*含盐流动相应现用现配，避免长期放置产生微生物或沉淀。3.色谱柱保护：*避免剧烈震动和撞击色谱柱。*严格控制样品的pH值范围，避免超出色谱柱的耐受范围。*避免将大量不溶性微粒或强保留物质注入色谱柱。*色谱柱在不使用时应两端密封，存放于合适温度和湿度环境中。4.压力监控：操作过程中密切关注系统压力，若压力突然升高，可能是管路堵塞或色谱柱堵塞，应立即停泵检查，排除故障后方可继续使用，严禁强行升压。若压力突然下降，可能是漏液或泵故障。5.检测器维护：*紫外检测器应避免强光直射，氘灯有一定使用寿命，应注意更换。*保持检测池清洁，避免污染。6.数据管理：实验数据应及时备份，妥善保存，确保数据的完整性和可追溯性。7.异常处理：仪器发生故障时，应立即停止使用，及时报告仪器管理员或实验室负责人，不得擅自拆卸或维修。五、日常维护与保养1.每日维护：*检查溶剂瓶中溶剂余量，及时补充。*清理废液瓶，避免废液溢出。*检查仪器各连接部位是否有漏液现象。*记录仪器运行状态。2.每周/每月维护（根据使用频率调整）：*冲洗溶剂过滤头（可用稀硝酸或有机溶剂超声清洗）。*检查进样针是否堵塞或损坏，必要时清洗或更换。*清洁自动进样器样品盘和针座。*检查柱温箱内是否洁净。3.定期维护：*根据仪器说明书要求，定期更换泵密封垫、单向阀等易损件。*定期对检测器进行性能校验。*色谱柱按其说明书进行维护和保存，定期进行柱效测试。六、故障应急处理（简述）1.系统无压力或压力过低：检查溶剂是否用尽、管路是否连接松动或破裂、过滤器是否堵塞、泵是否正常工作、purge阀是否关闭。2.系统压力过高：检查色谱柱是否堵塞、保护柱是否堵塞、管路是否打折或堵塞、流动相是否未脱气产生气泡（有时气泡也会导致压力不稳或升高）。3.基线噪音大或漂移严重：检查流动相是否纯净或已变质、检测器是否有故障（如氘灯能量不足）、色谱柱是否污染、系统是否有气泡、实验室电压是否稳定、温度是否波动过大。4.不出峰或峰面积过小：检查进样是否正常、样品是否制备有误、检测器参数设置是否正确、色谱柱是否与样品不匹配或损坏。5.峰形异常（拖尾、前伸、分叉等）：检查色谱柱是否污染或损坏