复方骨参颗粒的制备工艺研究

引言复方骨参方为临床验方，由骨碎补、党参、茯苓、白术、补骨脂、淫羊藿、山萸肉、苍术、黄柏、薏苡仁、黄连、醋龟甲、牡丹皮、延胡索组成，这些药材协同作用，共同发挥出温肾健脾益骨、祛湿通络的显著疗效。在临床应用中，复方骨参方特别针对脾虚湿困型骨质疏松症进行治疗，以促进患者的骨骼健康。最初，复方骨参方是通过汤剂形式内服给药的，这种方式虽然能够保持药效，但却存在一些不便之处。比如煎煮过程复杂，容易造成药物成分的流失；携带和使用也较为繁琐；加之汤液本身苦涩难咽，对于不太习惯中药味道的患者来说，服用体验并不理想，为了解决这些问题，经过预实验选择将其制成颗粒剂，本研究对复方骨参颗粒的制备工艺进行优选，确定最佳工艺参数。1文献综述1.1复方骨参方来源复方骨参方由骨碎补、党参、茯苓、白术、补骨脂、淫羊藿、山萸肉、苍术、黄柏、薏苡仁、黄连、醋龟甲、牡丹皮、延胡索等十四味中药组成，根据岭南地区气候特点，参考《宋·太平惠民和剂局方》的参苓白术散及张秉成所著的《成方便读》的四妙散，形成的经验方。有临床数据证实，复方骨参颗粒可以减轻属脾虚湿困的骨质疏松患者腰背疼痛感，有效预防骨质疏松症的并发症，提高患者的生活质量REF_Ref17488\r\h[1]。1.2复方骨参方方解方中骨碎补、党参为君药，健脾益肾。茯苓补中健脾、白术渗湿以助运，二者互为补充，再与党参配伍，可使补气健脾、补骨脂温肾壮阳、补肾壮骨、山萸肉补肝肾，同为君药。苍术、黄柏、薏苡仁、黄连等药物具有清热燥湿的功效，四味药合用，具有健脾燥湿、标本兼治的作用；醋鳖甲入肝肾经，养阴潜阳，人参益气，牡丹皮有清泻相火的功效，又有温骨碎补的功效，所以，这几味药材一起用来佐药。延胡索有活血化瘀之功效，可治全身上下之痛，且可使药物在全身经脉中畅通无阻。与其配伍，具有温肾健脾、补骨、燥湿通络的功效。方中诸药各司其职，相互配合，共同构成了一个综合性的治疗体系，旨在全面改善患者的体质状况，恢复和增强其脏腑功能。这样的方剂配伍，体现了中医理论中“君臣佐使”的原则，强调了药物间的平衡与协调，使治疗过程既精准又温和，最终达到祛病强身的目的。1.3处方中饮片所含化学成分及药理作用研究现状1.3.1骨碎补本品在本方中起到接骨续筋的作用，为方中君药。研究表明，骨碎补作为一种传统中药材，其药理作用广泛，其中包含的化学成分是现代研究的重点。这些成分主要包括黄酮类化合物、三萜类以及苯丙素类等物质[2]。根据现代药理学的研究，骨碎补拥有多种药理效应，包括促进骨细胞增殖和分化、优化微循环、对抗骨质疏松、修复骨损伤、抗炎和镇痛、加速骨折愈合、对抗骨质疏松、保护关节软骨以及促进周围神经的修复等[3-6]。因此，本品宜采用水煎煮工艺。1.3.2党参本品在方中起到补中益气，健脾益肺的作用，为方中君药。党参的化学成分结构种类繁多，涵盖了黄酮类、甾体类、萜烯类、木脂素类、酚酸类、生物碱类、多糖类、有机酸类、香豆素类以及酯类等多种成分[7]。党参多糖是发挥其药理作用的关键成分之一，有研究表明，党参多糖主要功能包括增强机体的免疫功能，及抗炎和改善贫血的效果[8-12]。因此，本品宜采用水煎煮工艺。1.3.3茯苓本品在本方中起到健脾渗湿的作用，为方中臣药。茯苓多糖类和三萜类是主其主要的药理活性成分[13]。根据现代药理学的研究，茯苓被证实具有多种药理效应，包括促进机体代谢、调整胃肠功能、具有镇静和催眠效果、对抗肿瘤以及保护肝脏等[14-16]。因此，本品宜采用水煎煮工艺。1.3.4白术本品在本方中起到渗湿助运的作用，为方中臣药。白术中含有倍半萜类、内酯类、黄酮类、苯丙素类、炔类、多糖类等[17]。现代药理研究表明，白术有抗炎、抗肿瘤、改善胃肠功能、调节泌尿系统、增强神经功能、增强免疫、激活子宫平滑肌、降血脂、降血糖等作用[18]。研究表明，白术内酯I和III化学成分有显著的抗炎效果[19]。因此，本品宜采用水煎煮工艺。1.3.5补骨脂本品在方中起到温肾助阳，纳气止泄的功效，为方中臣药。根据现代药理学的研究，补骨脂的主要活性成分包括香豆素类、黄酮类和单萜类酚类这三大类化合物[20]。有科学研究揭示，补骨脂拥有多种药理效应，其中包括促进骨骼生长[21-22]。因此，本品宜采用水煎煮工艺。1.3.6淫羊藿本品在本方中起到补肾阳，强筋骨，祛风湿的作用，为方中臣药。淫羊藿的主要化学成分包括黄酮、多糖以及微量元素等[23]。根据现代药理学的研究，淫羊藿有抗炎、对抗骨质疏松和防止细胞凋亡等多种药理效果[24]。张锦明等[25]发现淫羊藿苷缓解骨质疏松的症状。淫羊藿能够刺激成骨细胞的生成，而成骨细胞是确保骨骼健康的重要因素[26]。淫羊藿中的总黄酮对于免疫系统具有明显的保护效果[27]。因此，本品宜采用水煎煮工艺。1.3.7山萸肉本品在本方中起到补益肝肾的作用，为方中臣药。山萸肉的主要化学成分有要包括环烯醚萜类、甾体类、生物碱类、挥发油类等[28]。有研究认为，山萸肉可以加速肝细胞修复，抗氧化，抗衰老，神经保护，抗肿瘤活性、抑制糖尿病肾病的发展等生物活性[29-31]。因此，本品宜采用水煎煮工艺。1.3.8苍术本品在本方中起到健脾燥湿、散湿邪的作用，为方中佐药。苍术的主要成分包括非挥发性油类物质以及挥发性油类物质，苍术醇是苍术挥发油中的关键化学物质[32]。最新的药物学研究指出，苍术的挥发油是其主要的有效成分，它具备出色的健脾燥湿、消炎、调节胃肠道和保护肝脏的功能[33-37]。因此，本品宜采用水煎煮工艺。1.3.9黄柏本品在本方中起到主入下焦，清热燥湿的作用，为方中佐药。黄柏的化学成分主要为生物碱、酚酸、柠檬苦素、苯丙素以及萜烯等成分[38]。现代药学研究证实，黄柏煎剂具有显著的抗炎效果[39]。黄柏中的水煎液显示出了明显的抑菌效果[40]。因此，本品宜采用水煎煮工艺。1.3.10薏苡仁本品在本方中起到燥湿健脾，治标兼治本的作用，为方中佐药。薏苡仁富含多种化学成分，其中薏苡仁多糖主要药理效应有抗氧化、增强免疫系统以及降低血糖水平[41-42]。实践证明，薏苡仁提取物可以促进机体的成骨细胞的增殖[43]。因此，本品宜采用水煎煮工艺。1.3.11黄连本品在本方中起到清热燥湿、泻火解毒的作用，为方中佐药。目前已从黄连中分离得到许多化学成分，如生物碱，木脂素，黄酮，酸性物质，挥发油等[44]。根据现代药理学的研究，黄连有对抗心律不齐、抗炎、对抗肿瘤、抗菌、神经保护以及抗纤维化等多种药理效果[45]。刘建鑫等[46]在实验中观察到，黄连解毒汤有效地缓解小鼠关节部位炎症的损伤。因此，本品宜采用水煎煮工艺。1.3.12醋龟甲本品在本方中起到滋阴潜阳，并助党参之润的作用，为方中佐药。醋龟甲的主要成分包括动物胶、角质、以及多种微量元素等[47]。最新的药理学研究指出，利用龟甲改善甲亢型导致阴虚大鼠出现的阴虚症状[48]。因此，本品宜采用水煎煮工艺。1.3.13牡丹皮本品在本方中起到功善清泄相火，并与骨碎补之温的作用，为方中佐药。牡丹皮中主要含有酚类、酚苷类成分，此外还含有三萜、甾醇及其苷类、黄酮类、有机酸、香豆素等成分[49]。现代药理研究表明，牡丹皮有一定的抗炎、解热作用[50]。丹皮酚与芍药苷是牡丹皮中的关键有效化学物质，它们具备对抗肿瘤、对抗心律不齐、增强身体免疫力以及促进微循环的多种功效[51]。因此，本品宜采用水煎煮工艺。1.3.14延胡索本品在本方中起到功善清泄相火，并与骨碎补之温的作用，为方中佐药。延胡索中其主要的活性成分是原小檗碱类生物碱[52]。现代药理学的研究发现，延胡索中的生物碱成分有抗氧化及抗心肌缺血的功效[53-54]。因此，本品宜采用水煎煮工艺。综上所述，针对处方中药物的性质及其所含的有效成分、药理作用及临床用药要求，制定其煎煮工艺路线，本实验采用全方加水煎煮工艺，保持了原方汤剂用药的传统。1.4复方颗粒制备工艺研究现状中药颗粒剂是将中药提取液与适当的辅料或中药细粉按一定方法均匀混匀而成的一种新剂型。与传统中药汤剂、散剂相比，颗粒剂用量更小、便于携带、贮存、运输和使用的特点[55]。中药颗粒剂的制备过程包括原辅料处理、制粒、干燥和总混工序，其中制粒工艺是关键步骤之一，主要采用挤压制粒等技术。此外，中药颗粒剂的生产还涉及到提取工艺、干燥工艺等多个环节[56]。中药复方颗粒在中医药理论的指导下，通过长期和广泛的临床使用，已经显示出了一定的疗效，复方颗粒剂不仅保持了中医药的特点和优势，具有安全卫生、疗效确切的特点，而且还便于服用、贮存和携带等优势，满足了患者的实际应用需求，同时其产业也已发展到一定的市场规模。1.5研究目的及研究意义骨质疏松症（osteporosis），是在多因素和多种机制相互作用的影响下，一种全身性代谢的骨骼疾病，它会导致骨骼的密度、质量和韧性的降低，容易引起骨折REF_Ref17488\r\h[57]。骨质疏松症患病率在全球呈现上升趋势，研究表明，每1小时全球大约出现1200例骨质疏松住院或瘫痪的骨质疏松患者REF_Ref17488\r\h[58]。骨质疏松性骨折及其并发症给患者带来了巨大的痛苦，同时也给家庭带来了巨大的经济负担和社会压力REF_Ref17488\r\h[59]。近年来，抗骨质疏松类颗粒剂的发展，通过保留传统汤剂的药理作用，同时简化使用和贮存条件，为患者提供了一种更方便、更易于使用的治疗方式，满足临床用药和制剂生产需要[60]。复方骨参方为临床验方，该方治疗脾虚湿困型骨质疏松症疗效显著。该方原以汤剂内服用于临床，疗效较好，经过预实验选择将其制成颗粒剂，本实验以指标成分含量和固形物质量的综合评分值为指标，通过正交试验优选影响水提工艺的加水量、提取次数、提取时间等参数；以莫诺苷、马钱苷总含量的保留率为指标，通过浓缩终点的考察优选浓缩工艺；以莫诺苷、马钱苷总含量的保留率、水分、浸膏粉黏壁情况为指标，综合评价以确定最佳干燥工艺；通过综合评分法筛选最佳成型工艺。通过研究颗粒成型率、制粒情况和颗粒外观为指标，考察辅料种类与用量，确定颗粒最优成型工艺；以颗粒吸湿增重为指标，考察包装材料对颗粒稳定性的影响，选择最优的包装材料。通过设计合理的实验方案，对复方骨参颗粒的制备工艺条件进行优化，将其制成携带方便、口感佳的颗粒制剂，方便临床使用和提高病人的顺应性。2试剂与仪器2.1试药2.1.1饮片信息表1饮片信息饮片饮片来源质量要求骨碎补水龙骨科植物槲蕨Drynariafortunei（Kunze）J.Sm.的干燥根茎的炮制加工品符合《中国药典》2020年版一部骨碎补项下的有关规定党参片桔梗科植物党参Codonopsispilosula(Franch.)Nannf.干燥根的炮制加工品符合《中国药典》2020年版一部党参片项下的有关规定

续表1饮片饮片来源质量要求茯苓多孔菌科真菌茯苓Poriacocos（Schw.）Wolf的干燥菌核的炮制加工品符合《中国药典》2020版一部茯苓项下的有关规定白术菊科植物白术AtractylodesmacrocephalaKoidz.的干燥根茎的炮制加工品质量符合《中国药典》2020版一部白术项下的有关规定补骨脂豆科植物补骨脂PsoraleacorylifoliaL.的干燥成熟果实的炮制加工品质量符合《中国药典》2020年版一部补骨脂项下的有关规定淫羊藿小檗科植物淫羊藿EpimediumbrevicornuMaxim.i的干燥叶的炮制加工品质量符合《中国药典》2020版一部山萸肉项下的有关规定山萸肉山茱萸科植物山茱萸CornusofficinalisSieb.etZucc.的干燥成熟果肉的炮制加工品质量符合《中国药典》2020年版一部淫羊藿项下的有关规定苍术菊科植物茅苍术Atractylodeslancea（Thunb.）DC.的干燥根茎的炮制加工品质量符合《中国药典》2020版一部苍术项下的有关规定黄柏芸香科植物黄皮树PhellodendronchinenseSchneid.的干燥树皮的炮制加工品质量符合《中国药典》2020版一部黄柏项下的有关规定薏苡仁禾本科植物薏米Coixlacryma-jobiL.var.ma-yuen(Roman.)Stapf的干燥成熟种仁的炮制加工品质量符合《中国药典》2020版一部薏苡仁项下的有关规定黄连毛茛科植物黄连CoptischinensisFranch.的干燥根茎的炮制加工品质量符合《中国药典》2020版一部黄柏项下的有关规定醋龟甲龟科动物乌龟Chinemysreevesii（Gray）的背甲及腹甲的炮制加工品质量符合《中国药典》2020版一部醋龟甲项下的有关规定牡丹皮毛茛科植物牡丹PaeoniasuffruticosaAndr.的干燥根皮的炮制加工品质量符合《中国药典》2020版一部牡丹皮项下的有关规定延胡索罂粟科植物延胡索CorydalisyanhusuoW.T.Wang的干燥块茎的炮制加工品质量符合《中国药典》2020版一部延胡索项下的有关规定2.1.2标准品和实验试剂以下表2为标准品信息，表3为实验试剂信息。表2标准品及其批号、含量标准品批号含量莫诺苷111998-20160296.3%马钱苷111640-20180899.0%表3实验试剂及其厂家列表试剂厂家甲醇美国Merck公司乙腈美国Merck公司磷酸广州化学试剂厂液相用水美国默克密理博公司麦芽糊精山东西王糖业有限公司乳糖河南万邦实业有限公司可溶性淀粉安徽山河药用辅料股份有限公司糊精安徽山河药用辅料股份有限公司三氯蔗糖徐州丰瑞生物科技有限公司甜菊糖苷河南洪莱生物科技有限公司2.2仪器表4试验所需主要仪器及其厂家设备型号厂家YP1002N型电子天平上海沪粤明科学仪器有限公司DC-NSG-30型多功能提取浓缩机组上海达程R1005旋转蒸发仪郑州长城科工贸有限公司Agilent1200高效液相色谱仪美国安捷伦科技有限公司HU-1500喷雾干燥机上海沪程机械科技有限公司

续表4设备型号厂家JP-500B型高速多功能粉碎机浙江久品商贸有限公司GLZ2-25干法制粒机江苏国朗机械制造有限公司BPG-9070A型精密鼓风干燥箱上海本昂科学仪器有限公司METTLERMJ33型红外水分测定仪瑞士梅勒特-托利多有限公司GLF-1300铝箔包装机星火包装器械3提取工艺研究复方骨参方由骨碎补、党参、茯苓、白术、补骨脂、淫羊藿、山萸肉、苍术、黄柏、薏苡仁、黄连、醋龟甲、牡丹皮、延胡索等十四味中药组成，山萸肉的主要有效成分马钱苷及莫诺苷，原方为汤剂采取加水煎煮提取，本实验以山萸肉中指标成分莫诺苷、马钱苷总含量和固形物质量的综合评分值为考察指标，通过正交试验考察影响水提工艺的加水量、提取时间及提取次数，优选最优的水提取工艺参数。3.1莫诺苷和马钱苷含量含量测定3.1.1色谱条件照高效液相色谱法（《中国药典》2020年版四部通则0512）测定。色谱条件：phenomenexKinetexXB-C18100ALCColumn(4.6*250mm,5μm)；流动相A：乙腈，流动相B：0.3%磷酸溶液，以表5中的规定比例进行梯度洗脱；检测波长为240nm；柱温为35℃，流速：0.8mL/min。表5梯度洗脱时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）0~2079320~507→2093→803.1.2溶液的制备对照品溶液的制备将莫诺苷和马钱苷这两种对照品置于天平上，通过精密的称量来确定其适当的剂量，取适量的80%甲醇加入到每个标准溶液中制成每1mL混合溶液中含有50μg莫诺苷和50μg马钱苷，即得。供试品溶液的制备按处方比例称取全方，加水煎煮，过滤，浓缩。精密移取浓缩液，置10mL量瓶中，加80%甲醇适量，超声处理（功率140W，频率42Hz）30min，放冷，加80%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。阴性对照溶液的制备在进行药材的准备过程中，首先根据处方上明确规定的比例对除山萸肉之外的饮片进行称量。这些饮片随后按照供试品溶液的制备方法制得阴性样品溶液。正交样品的制备按照处方量准备9份饮片，按表7中所示的正交试验设计，采用适当的方法进行提取操作。随后，将得到的煎液合并到一个容器中，并通过精密的过滤器去除杂质，定容，备用。正交供试品溶液的制备精密吸取各正交样品溶液于10ml容量瓶中，加80%的甲醇，为确保实验的精确性，先进行超声波处理，冷却溶液至室温，以80%的甲醇定容至刻度，为了保持溶液的均匀性和避免气泡产生，充分摇匀溶液，滤过，取出一定量的滤液，即得正交供试品溶液。3.1.3专属性试验吸取了上述的供试品样本、对照品溶液以及阴性对照溶液各约10uL，分别注入到了各自配置好的液相色谱仪中，随后，通过操作仪器来记录和分析色谱图，记录色谱图，结果见图一。1122331马钱苷+莫诺苷对照品2供试品（全方）3阴性缺山萸肉对照样品图1莫诺苷和马钱苷含量测定专属性图谱结果表明：阴性对照图谱与对照品图谱、供试品图谱中在莫诺苷和马钱苷对应位置无吸收，表明此方法专属性好，处方中其他药味对本测定无干扰。3.1.4标准曲线的绘制精密量取莫诺苷和马钱苷混合对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0

mL置于1mL容量瓶内，加入80%的甲醇至刻度，摇动均匀，即得到莫诺苷、马钱苷混合对照品溶液，按上述所选的色谱条件进样，并做相应的数据处理，测定各样品的峰面积，并以进样质量作为横轴，以峰面积作为纵轴，绘制标准曲线，并计算线性回归方程。Y莫诺苷=1.87×104X-1.33×104，r=0.9999；Y马钱苷=2.31×104X-6.05×104，r=0.9999。3.2水溶性固形物质量的测定精密吸取50mL正交样本溶液，放入清洁、干燥、重量恒定的蒸发皿中，在水浴中烘干，然后按照干燥失重测定法（《中国药典》2020版第4部分2201)项下水溶性浸出物测定法的热浸法进行测定，计算水溶性固形物得率（%），公式如下：水溶性固形物得率（%）=（W×V)/(50×Wt）×100%式1W为50ml浓缩液中水溶性固形物量，V为定容体积，Wt为饮片量。3.3最佳提取工艺考察3.3.1正交试验因素水平设计参考相关文献资料，结合预试验结果，选取加水量（A）、提取时间（B）、提取次数（C）为考察因素，用正交表进行试验，正交试验因素水平表见表6。表6正交试验因素水平表水平ABC加水量（倍）提取时间（小时）提取次数(次）181.012101.523122.033.3.2正交试验结果及工艺优选用综合加权评分法，以总固形物得率和莫诺苷、马钱苷含量的9次试验的最大值为100分，将各指标成分的总量分别转换为评分值，莫诺苷、马钱苷总含量的加权系数确定为0.6，固形物质量的加权系数为0.4，将每次试验的各指标成分的评10分值乘以相应的加权系数后求和，得综合评分值，以综合评分值计算正交试验结果，并进行方差分析。表7正交试验安排及结果实验号ABCD莫诺苷、马钱苷总含量/%固形物质量/g综合评分111110.674.7760.59212220.927.7888.55313331.019947.4688.33522310.929.0494.04623120.725.8968.44续表7实验号ABCD莫诺苷、马钱苷总含量/%固形物质量/g综合评分731320.998.4095.41832130.755.8269.91933210.978.2393.48K1249.14244.33198.94248.11K2250.81252.5270.36252.4K3258.8261.92289.45258.24k183.0581.4466.3182.70k283.6084.1790.1284.13k386.2787.3196.4886.08极差3.2205.86430.1703.377综合评分=（莫诺苷、马钱苷总含量/最大莫诺苷、马钱苷总含量）×60+（固形物质量/最大固形物质量）×40表8方差分析结果方差来源离差平方和自由度均方（MS）F值PA17.7728.891.03>0.05B51.66225.832.996>0.05C1517.482758.7488.02<0.05误差17.3188.655据直观分析可得，提取次数（C）对复方提取率的影响最大，其次为提取时间（B)、加水量（A）。方差分析显示，提取时间（B）、加水量（A）等因素对提取效果的影响不大。加水量（A）和提取时间（B）的三个水平K值接近，均选择第一水平，提取次数（C）第二水平与第三水平K值接近，因此，从缩短生产周期、降低生产成本等角度出发，选取了第二水平。于是，决定将提取工艺条件定为A1B1C2，即加入处方药量中8倍量的水，提取2次，每次提取1

h。3.3.3最佳提取工艺的验证按处方比例，称取饮片3份，按照优化工艺提取，测定莫诺、马钱苷总含量和固形物质量。表9验证试验结果试验号123平均值莫诺苷、马钱苷总含量/%0.991.000.960.98固形物质量/g8.528.548.558.53固形物得率/%35.3335.4535.5235.43综合评分值95.9396.6194.2895.61结果表明：验证试验莫诺苷、马钱苷总含量均值为0.98%，固形物质量均值为8.53g及固形物得率均值为35.43%，与正交试验综合评分值最大值接近，说明正交试验优选的工艺条件合理，稳定可行。4浓缩工艺研究结合生产实际条件，本试验采用减压浓缩。按处方比例，称取饮片3份，每份为3倍量的处方量，按照优化工艺提取，称定重量，再分别取提取液，减压浓缩，测定浓缩液中莫诺苷、马钱苷的总含量，并计算浓缩过程莫诺苷、马钱苷保留率，结果见表10。莫诺苷、马前苷保留率%=W0×式中，W0为浓缩液莫诺苷、马钱苷含量（μg·mL-1）；M0为浓缩液重量（g）；W1为提取液莫诺苷、马钱苷含量（μg·mL-1）；M1为提取液重量（g）；表10浓缩试验结果表试验号提取液中莫诺苷、马钱苷总量/μg·mL-1提取液重量/g药液相对密度（60℃）浓缩液重量/g浓缩液中莫诺苷、马钱苷总量/μg·mL-1保留率/%130.4113751.051659201.196.5230.4113751.101162284.695.6330.4113751.15889370.795.3结论：药液相对密度为1.05（60℃）、1.10（60℃）、1.15（60℃）的减压浓缩液，其莫诺苷和马钱苷总量保留率均大于95%，因此选择减压浓缩至药液相对密度1.05~1.15（60℃)开展进一步考察，通过喷雾干燥试验，考察药液相对密度对喷雾干燥工艺的影响，确定浓缩终点。5干燥工艺研究根据现有的干燥条件，本品浸膏的干燥采用喷雾干燥法。按处方比例称取饮片3份，按前述工艺提取、浓缩，将浓缩液吸取置喷雾干燥机中干燥，记录黏壁浸膏质量、测定干浸膏水分，并测定干粉中莫诺苷、马钱苷的总含量，计算干燥过程中莫诺苷、马钱苷的保留率，结果见表11。马诺苷、马钱苷保留率%=干浸膏粉中莫诺苷、马钱苷含量表11喷雾干燥工艺考察试验号浓缩液相对密度（60℃）浓缩液中莫诺苷、马钱苷含量/%干粉中含莫诺苷、马钱苷总含量/%保留率/%黏壁干浸膏质量/g干浸膏粉水分/%11.050.110.1090.925.203.2021.100.090.0888.926.934.1131.150.080.0675%33.686.4541.200.080.0675%35.747.84比较不同相对密度的浓缩液喷雾干燥后粘附于设备内部的干浸膏重量，以设备内粘附的干浸膏量少为好，并比较指标成分的保留率、干浸膏粉水分。结果表明：莫诺苷、马钱苷保留率由大到小：药液相对密度1.05（60℃）>1.10（60℃）>1.15（60℃）>1.20（60℃）时，且药液相对密度1.05（60℃）和1.10（60℃）保留率约为90%，黏壁情况优于药液相对密度1.15（60℃）和1.20（60℃）。因此，本工艺选择以制成密度为1.05~1.10（60℃）浓缩液进行喷雾干燥。6成型工艺研究6.1浸膏粉吸湿速率的考察取适量干浸膏粉，在P2O5干燥器中使其恒重48h，然后将底部装有NaCl饱和溶液的玻璃干燥器放置于25℃恒温培养箱中，恒温24h，然后将2mm厚度的粉末装入已恒重量的称重瓶底，精密称定，放置于所述干燥器中，于第1、2、6、12、24、48、72、120、168h取出称重，并计算其吸收水分百分率，用吸湿率与时间作图表，从而得出吸湿曲线，结果见图2。图2复方参骨方粉末吸湿速率由图2可知，复方参骨颗粒干膏粉在120h时吸湿基本达到平衡，吸湿率约为23%，说明干膏粉具有较强的吸湿性，需要加入适宜的辅料以降低干膏粉的吸湿性，有利于颗粒的成型。6.2处方中浸膏粉与辅料配比的确定该处方拟每天服用2次，每次服用量为25g，药材以出膏率约为35%计算，即每次服8.75g干浸膏，若按每次1包的服用量，拟定每包规格为10g，即辅料用量约为1.25g，即干浸膏粉与辅料比约为7:1。6.3填充剂种类筛选中药颗粒剂常用填充剂为乳糖、麦芽糊精、可溶性淀粉、糊精等。称取浸膏粉5份，50g/份，按表10处方配比加入各辅料，干压制粒，14目筛制粒，50~60℃干燥，12目筛整粒，以颗粒收率、溶化性和吸湿率为指标，考察上述各辅料的成型性，结果见表12。根据文献报道及实践经验，确定辅料的种类。表12辅料筛选方案处方号12345浸膏粉87777麦芽糊精-1可溶性淀粉--1--糊精1-乳糖1颗粒收率：将制备好的颗粒称重，依次过一号筛及四号筛，收集通过一号筛而不能通过四号筛的颗粒，称重，按下列公式计算：颗粒收率（%）=吸湿性：称取样品颗粒约2g，置干燥至恒重称量瓶中，精密称重，置相对湿度为75%的干燥器（25℃）中，室温放置48h，精密称量，计算吸湿率，平行操作三份。吸湿率%=吸湿后的重量−吸湿前的重量溶化性：取颗粒5g加热水至100mL，搅拌5分钟，观察颗粒溶化情况，以3000rpm离心10min，弃去上清夜，将残渣烘干至恒重，精密称定重量，平行操作三份，计算颗粒溶化率。颗粒溶化率（%）=表12辅料种类筛选结果辅料溶化情况溶化性/%收率/%吸湿性/%原浸膏粉2min内溶解，静置后，底部有的少量粉状沉淀物，轻摇即散。85.9577.3517.71麦芽糊精1min内溶解，静置后，底部有的少量粉状沉淀物，轻摇即散。90.5690.4513.39可溶性淀粉2min内溶解，静置后，底部有的少量粉状沉淀物，轻摇即散。81.7487.6315.50糊精3min内溶解，静置后，底部有的少量粉状沉淀物，轻摇即散。75.3983.1615.71乳糖2min内溶解，静置后，底部有的少量粉状沉淀物，轻摇即散。89.6882.609.49从表12可知，溶化性从大到小：麦芽糊精＞乳糖＞原浸膏粉＞可溶性淀粉＞糊精；颗粒收率从大到小：麦芽糊精＞可溶性淀粉＞糊精＞乳糖＞原浸膏粉；吸湿性从大到小：原浸膏粉＞糊精＞可溶性淀粉＞麦芽糊精＞乳糖。结果显示，乳糖和麦芽糊精所制颗粒溶化性、成形性和吸湿性能较好，综合考虑生产成本等各因素，选择麦芽糊精为填充剂，提高生产效率，降低生产成本。6.4矫味剂选择及用量考察中药无糖型颗粒常用的矫味剂甜菊糖苷和三氯蔗糖等，由于本品口味苦、涩，一般患者难以接受，因此需加入适当的矫味剂对其口味进行改善，以增加患者用药顺应性。取处方2浸膏混合物3份，每份10g，分别0.5%的甜菊糖苷或三氯蔗糖，混匀，20倍热水溶解，搅拌5min，试口感。结果如表13所示。表13矫味剂种类筛选结果试验号三氯蔗糖加入量甜菊糖苷加入量涩味苦味1//+++++++20.5%/++++3/0.5%++注：“+”代表酸苦程度，“+”号越多酸味苦味越重。结果表明，甜菊糖苷对本品加味效果优于三氯蔗糖，因此，选用甜菊糖苷为本品甜味剂。进一步考察甜菊糖苷的用量，取处方2浸膏混合物3份，每份10g，分别加入0%、0.25%、0.5%的甜菊糖苷混匀，20倍热水溶解，搅拌5min，试口感，结果如表13所示，当甜菊糖苷用量为制成量的0.5%时，可改善浸膏粉的涩味和苦味，因此，确定甜菊糖苷用量为本品制成量的0.5%。表14甜菊素用量筛选结果处方号甜菊糖苷用量/mg酸味苦味10%+++++++20.25%++++30.5%++6.5混合工艺考察由于混合均匀的时间和设备型号相关性强，故本试验于中试试验时进行观察。试验时取处方量干浸膏粉、甜菊糖苷和麦芽糊精，置槽型混合机中，分别搅拌15、20、25、30、35、40min取混合槽中混合物，平铺并观察其外观颜色，判断搅拌混合是否均匀，结果见表15。表15混合工艺结果混合时间/min混合结果15有较多色斑，成团分布20有少量色斑，成点状分布25偶见色斑，颜色均匀性基本一致30混合粉色泽均一，无色斑，混合均匀35混合粉色泽均一，无色斑，混合均匀40混合粉色泽均一，无色斑，混合均匀结果表明：以混合粉色泽外观为指标，机器混合30min混合粉的色泽均一，无色斑，混合均匀，因此确定混合时间30min为最佳混合工艺。6.6颗粒制备6.6.1制粒方法的确定鉴于干式制粒的优点，本研究采用干式制粒技术。由于物料的含水量是影响干式制粒的重要因素，所以本实验以一次干法造粒的成型率、成粒情况及成品外观为指标，考察最佳的干式制粒物料含水量。在整个试验阶段，我们特别注重精确控制物料含水量的变化，以确保研究结果的可靠性和有效性。为此，我们引入了METTLERMJ33型红外水分测定仪来实时监测物料的含水量。该仪器采用红外光穿透物料表面的原理，能够快速而准确地测量出物料中的水分含量。将干浸膏粉、甜菊糖苷以及麦芽糊精按照一定的比例进行称量，混合均匀，然后将其干燥或喷洒适量的纯净水，使得该混合物的水分含量为2%~3%、3%~4%、4%~5%、5%~6%、6~7%，用GLZ2-25型干法制粒机制粒，14目筛制粒，经一次干式制粒后，获得12-40目的颗粒为合格颗粒，其余为不合格颗粒，计算成型率，对成品的外观均匀性进行观察。结果见表16。成品率（%）=合格颗粒重（g）合格颗粒重（g）+不合格颗粒重(g)表16不同水分含量物料一次干式制粒的结果试验号物料含水量/%干式制粒情况及颗粒硬度颗粒硬度颗粒外观成型率/%12.52物料偏干、不易成条，可压性稍差颗粒偏松棕褐色，色泽均匀59.5822.98物料偏干、不易成条，可压性稍差颗粒偏松棕褐色，色泽均匀85.5333.07物料水分适宜，可压性好颗粒硬度适中棕褐色，色泽均匀88.5644.14物料水分适宜，可压性好颗粒硬度适中棕褐色，色泽均匀86.8455.07物料水分适宜，可压性好颗粒硬度适中棕褐色，色泽均匀87.5865.53物料粘黏在压轮上，可压性差颗粒偏硬颗粒偏黑，有少量花斑59.6676.14物料粘黏在压轮上，可压性差颗粒偏硬颗粒偏黑，有少量花斑53.18结果表明：随着物料含水量的增加，颗粒成型率提高；当含水量低于3%时物料偏干不易成条可压性查，当含水量超过5%时则物料黏在压轮上、颗粒出现少量花斑现象。因此，干式制粒物料水分控制在3~5%之间。6.6.2颗粒临界相对湿度的测定配制不同盐分的过饱和溶液放入玻璃干燥器中，在25℃下保持48h，以达到调节室内湿度的目的。将所得到的微粒干燥到恒定重量，称取一定数量（大约2g），然后平放在一个已经干燥到恒定重量的称量瓶（厚度大约2mm）中，精确称定，然后将称重瓶分别置于所述干燥器中，将称量瓶盖打开，置于上述不同RH干燥器中，48h后取出，精密称定，每个湿度平行操作2份。用吸湿率的百分率作为纵坐标，以相对湿度作为横坐标，用公式求出了吸湿率的百分率。结果显示在表17，图3。吸湿率（%）=吸湿至恒重的颗粒重量（g）−表17半成品颗粒在不同RH%中的吸湿百分率溶液CH3COOKMgCl2K2CO3Mg(NO3)2NaBrCRH%22.5132.7843.1654.3857.57吸湿率%0.921.733.896.378.47溶液KINaClNH4ClKClKNO3CRH%68.8675.2979.8984.3493.58吸湿率%11.5915.4115.7720.0925.70图3颗粒临界相对湿度曲线图结果表明：颗粒剂的临界相对湿度为55%。因此，在颗粒生产和储存过程中，环境湿度必须保持在55%以下，以减少水分对药物的影响。6.7包装材料的选择分别取聚酯/铝/聚乙烯药用复合膜袋18袋，精密称量各小袋重量，每一个小袋都加10g颗粒，并使用高质量的烫封技术确保密封效果，然后把包装好的颗粒剂样本精密称重，再放在底部含有饱和氯化钠溶液（RH75%）的干燥器中，在40±2℃下进行10天的试验，在第5天和第10天取样测量样品的吸湿量，计算颗粒的吸湿增重，并观察10天样品的外观。颗粒吸湿增重%=（吸湿后重量−包材重量）−（吸湿前重量−包材重量）表18包装材料考察结果（n=6）0d5d10d吸湿增重/%01.081.68颗粒外观棕褐色，无结块无明显变化无明显变化结果表明：包装材料上选择聚酯/铝/聚乙烯药用复合膜，将样品放于底部含饱和氯化钠溶液（RH75%）干燥器中，于40±2℃考察10d，分别于第5d取样测定样品吸湿增重为1.08%，颗粒外观无明显变化、10d取样测定样品吸湿增重为1.68%，颗粒外观无明显变化。因此，包装材料上可选择聚酯/铝/聚乙烯药用复合膜。7制备工艺7.1水煎煮按处方量称取饮片，加水煎煮2次，每次加8倍量水，煎煮1h，合并煎液，200目筛滤过，备用。7.2浓缩提取液减压浓缩至相对密度为1.05～1.10（60℃），100目筛滤过，备用。7.3浸膏干燥取浓缩液，喷雾干燥，控制进风温度180±5℃，出风温度90±5℃，收集干浸膏粉，备用。7.4混合取干浸膏粉，加入麦芽糊精和甜菊糖苷至制成总量，混合30min，备用。7.5干式制粒取“7.4”项下的混合干浸膏粉进行干式制粒（挤压压力2～8bar），14目筛制粒，收集14～40目的合格颗粒，干燥至颗粒水分≤5.5%（采用红外水分测定仪测定），备用。7.6分装取“7.5”项下的颗粒，装入聚酯/铝/聚乙烯药用复合膜袋，每袋装10g，即得。8讨论8.1考察指标的选择研究表明山萸肉的主要有效成分莫诺苷、马钱苷均有促进成骨细胞增殖作用，达到抗骨质疏松的作用[61]。骨碎补的主要有效成分为柚皮苷也可以促进骨细胞的增殖和分化，治疗骨损伤[62]。通过高效液相色谱法含量测定，实验结果表明，骨碎补中柚皮苷含量较低，故山萸肉中莫诺苷、马钱苷更适合作为本次实验的指标成分。通过专属性试验结果表明，阴性对照图谱与对照品、供试品图谱中莫诺苷和马钱苷相应的保留时间无其他峰干扰，此方法专属性好，处方中其它药味对本测定无干扰，因此确定山萸肉的莫诺苷、马钱苷为考察指标。8.3提取工艺的选择复方骨参方由骨碎补、党参、茯苓、白术、补骨脂、淫羊藿、山萸肉、苍术、黄柏、薏苡仁、黄连、醋龟甲、牡丹皮、延胡索等十四味中药组成，山萸肉的主要有效成分马钱苷及莫诺苷，原方为汤剂采取加水煎煮提取，本实验以山萸肉中指标成分莫诺苷、马钱苷总含量和固形物质量的综合评分值为考察指标，依据有效成分溶解性，设计不同的提取方法，通过L9（34）正交试验法考察，最终确定最优的水提取工艺为：加入处方药量中8倍量的水，提取2次，每次提取1h。8.2制粒工艺的选择在现代药品行业中，制粒工艺扮演着至关重要的角色。制粒工艺有湿法制粒和干式制粒。制粒工艺决定了产品最终的形态和性能，而干式制粒技术则是这一领域内备受推崇的创新解决方案之一。干式制粒采用先进的机械原理来实现高效制粒过程。具体来说，该工艺涉及将干燥的粉状或微小的晶体状原料置于一个固定的压轮上，利用强大的压力使原料形成薄片。这些薄片随后被送入专门设计的破碎机构中进行进一步的处理，包括破碎、整粒以及过筛等工序，确保每一个颗粒都符合预设的尺寸要求，并且大小均匀。相较于传统的湿法制粒技术，干式制粒展现出了诸多优势。首先，它简化了操作流程，减少了对工人技能的依赖，降低了生产过程中可能出现的错误。其次，与传统湿法相比，干式制粒的生产周期明显缩短，这意味着可以更快地完成大批量生产，满足市场对快速响应的需求。此外，由于干式制粒不需要额外的润湿、混合或干燥等步骤，大大减少了物料接触水分和热量的机会，从而提高了制剂的稳定性。在中药领域上，干式制粒同样展现出其独特的应用价值。由于中药浸膏粉通常含有大量的水分子，传统的湿法制粒技术往往难以处理这类复杂的物料。然而，干式制粒技术能够直接将中药浸膏粉与适量的辅料混合并制粒，这样既保持了药材的有效成分，又避免了湿法制粒过程中的水分和热量问题。这种方法不仅提高了药效，而且还可以根据实际情况调整药粒的大小和形状，以达到最佳的临床效果。鉴于干式制粒的优点，本研究采用干式制粒技术。结论综上所述，原方为汤剂采取加水煎煮提取，本实验以山萸肉中指标成分莫诺苷、马钱苷总含量和固形物质量的综合评分值为考察指标，采用正交设计L9（34）正交试验法考察影响水提工艺的加水量、提取时间及提取次数，优选最优的水提取工艺参数为加入处方药量中8倍量的水，提取2次，每次提取1h。以复方骨参浓缩液中指标成分保留率为考察指标，对浓缩工艺进行考察，药液相对密度为1.05（60℃）、1.10（60℃）、1.15（60℃）的减压浓缩液，其莫诺苷和马钱苷总量保留率均大于95%，因此选择减压浓缩至药液相对密度1.05~1.15（60℃）开展进一步考察，通过喷雾干燥试验，考察药液相对密度对喷雾干燥工艺的影响，确定浓缩终点。以干浸膏粉中指标成分保留率、水分、性状为考察指标，考察药液相对密度对干燥工艺的影响，选择以密度为1.05~1.10（60℃）浓缩液进行喷雾干燥为最佳干燥工艺；通过研究颗粒成型率、制粒情况和颗粒外观为指标，考察辅料种类与用量，确定颗粒最优成型工艺为：干浸膏粉与麦芽糊精、甜菊糖苷，置槽型混合机中，混合30min后混合粉的色泽均一，无色斑，混合均匀，且干式制粒物料水分控制在3~5%之间。包装材料上选择聚酯/铝/聚乙烯药用复合膜，将样品放于底部含饱和氯化钠溶液（RH75%）干燥器中，于40±2℃考察10d，分别于第5d取样测定样品吸湿增重为1.08%、10d取样测定样品吸湿增重为1.68%；最后通过验证性实验，各工艺参数稳定，表明复方骨参颗粒制备工艺合理可行，适合大生产。参考文献：钟卓蓓.参骨颗粒治疗脾虚湿困型老年性骨质疏松症的临床研究[D].广州中医药大学,2019.彭双,韩立峰,王涛,等.骨碎补中的化学成分及药理作用研究进展[J].天津中医药大学学报,2012,31(02):122-125.于大鹏,孙卫强.骨碎补及其提取物应用于骨科疾病的药理作用研究概况[J].环球中医药,2021,14(04):761-766.谌顺清,梁伟,张雪妹,等.骨碎补化学成分和药理作用研究进展[J].中国中药杂志,2021,46(11):2737-2745.谢雁鸣,秦林林,邓文龙,等.骨碎补总黄酮对成骨细胞体外培养作用的机制研究[J].中华中医药杂志,2005(03):161-162+135.ShaoYangjie,YouDongqi,LouYiting,etal.ControlledReleaseofNaringininGelMA-IncorporatedRutileNanorodFilmstoRegulateOsteogenicDifferentiationofMesenchymalStemCells[J].ACSomega,2019,4(21):19350-19357.苏圆锦,奚佳玉,史奇,等.药食同源中药党参的研究进展[J].中草药,2023,54(08):2607-2617.夏召弟,马若昕,王凤云,等.党参免疫调节活性及其机制的研究进展[J].中草药,2023,54(13):4334-4345.樊长征,洪巧瑜.党参对人体各系统作用的现代药理研究进展[J].中国医药导报,2016,13(10):39-43.BAIRB,ZHANGYJ,FANJM,etal.Immune-enhancementeffectsofoligosaccharidesfromCodonopsispilosulaoncyclophosphamideinducedimmunosuppressioninmice[J].FoodFunct,2020,11(4):3306-3315.孟燕,徐玉洁,张宝徽,等.党参多糖不同组分的抗炎活性及机制研究[J].中国药房,2020,31(11):1348-1352.邢秀玲,赵海鹰,李丽君,等.党参多糖对环磷酰胺所致小鼠贫血的治疗效果观察[J].临床误诊误治,2022,35(01):99-102.高满军,赵宝清,莫启贵,等.茯苓的化学成分及其调节糖脂代谢的研究进展[J].湖北科技学院学报(医学版),2023,37(03):272-276.左军,祁天立,胡晓阳.茯苓化学成分及现代药理研究进展[J].中医药学报,2023,51(01):110-114.叶青,刘东升,王兰霞,等.茯苓化学成分､药理作用及质量控制研究进展[J].中医药信息,2023,40(02):75-79.刘琦,耿晓桐,花娇娇,等.茯苓化学成分及药理作用研究进展[J].品牌与标准化,2023(02):106-109.张楠,陶源,李春燕,等.白术的化学成分及药理作用研究进展[J].新乡医学院学报,2023,40(06):579-586.颜莉玫,覃婕,黄万金.白术的现代药理研究及其在功能性消化不良中的临床应用[J].基层医学论坛,2023,27(16):104-106+113.张雯翔.FAM3B介导高血糖诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移的分子机制研究[D].南京师范大学,2016.胡万弟,王诗雨,徐翱昌,等.基于UHPLC-Q-TOF-MS技术的中药补骨脂化学成分表征与鉴定[J].中国中药杂志,2023,48(11):2989-2999.鲁亚奇,张晓,王金金,等.补骨脂化学成分及药理作用研究进展[J].中国实验方剂学杂志,2019,25(03):180-189.杨胜杰,钟少达,杨进平,等.补骨脂酚的提取纯化工艺优选及其对骨质疏松症的治疗作用分析[J].中国实验方剂学杂志,2017,23(22):43-47.李莉,王嘉瑞,王晶,等.淫羊藿的主要化学成分､药理作用研究进展及质量标志物的预测分析[J].中华中医药学刊,2023,41(11):143-151.周晓洁,姚辛敏,周妍妍.淫羊藿的药理作用研究进展[J].中医药学报,2022,50(11):112-115.张锦明,田滢舟,赵玲,等.淫羊藿苷促进骨髓间充质干细胞成骨分化缓解小鼠骨质疏松的机制[J].中国组织工程研究,2022,26(19):2991-2996.龚华乾,高敏,柴艺汇,等.淫羊藿化学成分与药理作用研究进展[J].湖北民族大学学报(医学版),2021,38(04):75-78.BendickovaKamila,FricJan.RolesofIL-2inbridgingadaptiveandinnateimmunity,andasatoolforcellularimmunotherapy[J].Journalofleukocytebiology,2020,108(1):427-437.杨青,余永亮,许兰杰,等.山茱萸化学成分研究进展[J].安徽农业科学,2022,50(21):25-27.王世全.山茱萸主要化学成分及药理学研究进展[J].医学信息(上旬刊),2010,23(12):4867.楚晋,李林.山萸肉化学成分及其药理活性的研究[J].中国自然医学杂志,1999(01):46-48.范倩,陈雪冰,荣莉,等.山茱萸化学成分、生物活性、复方应用及质量控制研究进展[J].天然产物研究与开发,2020,32(07):1244-1258.陈研,黄荣,周一,等.苍术有效成分提取工艺及合成途径研究进展[J].特产研究,2023,45(03):144-149+156.秦聪聪,杜沁圆,张义敏,等.苍术挥发油化学成分及药理作用研究进展[J].中成药,2023,45(06):1944-1952.王金华,薛宝云,梁爱华,等.苍术有效成分β-桉叶醇对小鼠小肠推进功能的影响[J].中国药学杂志,2002(04):28-30.刘芬,刘艳菊,田春漫.苍术提取物对实验性脾虚证大鼠胃肠动力及免疫功能的影响[J].吉林大学学报（医学版）,2015,41(2):255-260.窦增娥,姚惠青,赵永祥,等.基于“肺与大肠相表里”复方苍术方治疗慢性阻塞性肺疾病[J].世界中医药,2021,16(01):137-141.王玉良.苍术、白术的药理学研究[J].日本医学介绍,1984(12):30-31.路舜,崔红倩,申远.黄柏与关黄柏化学成分及药理作用研究进展[J].新乡医学院学报,2023,40(05):478-482