超高效液相色谱仪使用说明书

超高效液相色谱仪使用说明书超高效液相色谱仪（Ultra-HighPerformanceLiquidChromatograph，UHPLC）凭借高压驱动、细粒径色谱柱及高灵敏度检测技术，可实现复杂样品的快速、高效分离分析，广泛应用于药物研发、食品检测、环境监测等领域。本说明书将从仪器操作、维护及故障排查等方面，为您提供专业且实用的指导。一、仪器组成与工作原理（一）核心组件1.高压输液泵：提供稳定且高压的流动相输送动力，确保流动相流速精准可控，压力范围通常可达1000bar以上，以适配细粒径色谱柱的分离需求。2.自动进样器：实现样品的精准定量进样，进样体积精度高，且具备样品温控或避光功能，防止样品降解。3.色谱柱：采用粒径1.7-2.5μm的硅胶或聚合物基质填料，柱长多为50-150mm，通过固定相和流动相的相互作用实现样品组分分离。4.检测器：常见类型有紫外-可见检测器（UV-Vis）、二极管阵列检测器（DAD）、质谱检测器（MS）等，可根据分析需求选择，用于检测分离后组分的信号响应。5.柱温箱：精准控制色谱柱温度，稳定保留时间与分离效率，控温范围一般为室温+5℃至80℃。6.数据处理系统：通过工作站软件采集、处理检测信号，实现峰积分、定性定量分析及报告生成。（二）工作原理基于“相似相溶”原理，样品随流动相在高压驱动下通过色谱柱，不同组分因与固定相的吸附、分配、离子交换等作用差异，在柱内实现分离，随后依次进入检测器产生信号，经数据处理后得到色谱图，据此对样品进行定性（保留时间）和定量（峰面积/峰高）分析。二、前期准备工作（一）环境要求温度：保持在15-30℃，避免温度剧烈波动，可通过空调或恒温设备调控。湿度：相对湿度≤80%，防止仪器电路受潮或色谱柱填料水解。电源：配备稳压电源，电压波动≤±10%，接地良好，避免电磁干扰。（二）试剂与溶剂流动相：选用色谱纯级别试剂（如水、甲醇、乙腈、缓冲盐等），使用前需经0.22μm（或更细）滤膜过滤，去除颗粒杂质；若含缓冲盐，需用超声脱气10-15分钟，或使用在线脱气机，避免流动相中的气泡影响泵的稳定性和检测信号。样品：固体样品需用合适溶剂溶解，过0.22μm滤膜（与流动相互溶）；液体样品可直接过滤或稀释后过滤，确保无颗粒堵塞色谱柱。（三）色谱柱安装根据分析物性质选择色谱柱（如反相柱C18、C8，正相柱硅胶柱等），确认柱长、粒径及pH适用范围。安装时，确保色谱柱两端接头清洁，按柱上箭头方向（流动相流向）连接，用手拧紧后再用扳手轻拧1/4圈，避免过度拧紧损坏接头或柱床。三、操作流程（一）开机前检查确认溶剂瓶内流动相液位充足，废液桶无溢出。检查色谱柱连接是否牢固，流动相管路无弯折、漏液。确认仪器电源、工作站软件正常，无报错提示。（二）开机与系统排气1.依次开启稳压电源、仪器各模块（泵、进样器、柱温箱、检测器），等待仪器自检完成（约3-5分钟）。2.泵排气：在工作站软件中设置泵流速为5mL/min（或根据泵说明书），打开泵的排气阀（通常为旋钮或按键），观察排气口流出的流动相无气泡后，关闭排气阀，将流速调至分析流速（如0.3-1.0mL/min）。（三）方法设置在工作站软件中新建方法，设置以下参数：流动相比例：如甲醇-水（80:20），可通过梯度或等度模式设置。流速：根据色谱柱规格选择，细粒径柱常用0.3-1.0mL/min。柱温：如30℃，需与柱温箱设置一致。检测波长：根据样品最大吸收波长设置（如254nm），DAD检测器可设置波长范围扫描。进样量：如5μL，根据样品浓度和检测灵敏度调整。运行时间：需覆盖所有组分出峰时间，可通过预实验确定。（四）色谱柱平衡设置初始流动相条件，让流动相以分析流速通过色谱柱，观察基线（检测器信号），待基线平稳（噪声≤0.1mAU，漂移≤0.5mAU/h）后，方可进样。平衡时间通常为10-30分钟，若流动相为梯度，需运行1-2个梯度循环。（五）样品分析1.样品准备：将过滤后的样品置于进样小瓶，盖紧瓶盖，放入自动进样器样品盘，设置样品位。2.进样与采集：在软件中选择样品位，点击“进样”或“开始”，仪器自动完成进样、分离及信号采集，过程中可实时观察色谱图。（六）数据分析采集完成后，在软件中对色谱峰进行积分（调整积分参数如斜率、峰宽等，确保峰积分准确），通过外标法（标准曲线）或内标法进行定量分析，最后生成分析报告（包含保留时间、峰面积、含量等信息）。（七）关机与色谱柱维护1.冲洗色谱柱：若流动相含缓冲盐，需先将泵流速调至1.0mL/min，用10-20倍柱体积的纯水（或低有机相溶液，如5%甲醇-水）冲洗色谱柱，去除盐残留；再用10-20倍柱体积的纯有机相（如甲醇或乙腈）冲洗，保存色谱柱（若长期不用，可将柱两端用堵头密封，置于原包装盒）。2.关机：依次关闭检测器、柱温箱、进样器、泵，最后关闭稳压电源和工作站软件。四、维护与保养（一）日常维护流动相：每次实验前检查溶剂瓶，及时补充；每周更换一次（或根据使用频率），防止溶剂变质。进样针：每次进样后，用甲醇或流动相清洗进样针（自动进样器可设置洗针程序），防止样品残留。废液桶：每周清理一次，避免废液溢出腐蚀仪器。（二）定期维护色谱柱：每使用50-100次（或根据压力变化），对色谱柱进行冲洗维护；若柱压升高或分离度下降，可尝试反向冲洗（需确认色谱柱支持反向冲洗）或更换柱芯（部分色谱柱可拆换）。泵密封垫：每使用1000-2000小时（或根据泵压力波动），检查并更换泵密封垫，防止漏液。检测器：紫外灯每使用2000-3000小时（或根据能量提示）更换；流通池每季度用10%硝酸（或专用清洗液）浸泡清洗，去除污染物。五、常见故障排查（一）压力异常压力过高：可能因色谱柱堵塞（流动相过滤不良、样品未过滤）、管路堵塞（如单向阀污染）、流动相黏度大（如低温或高浓度缓冲盐）。解决方法：用纯水或低有机相反向冲洗色谱柱；超声清洗单向阀；调整环境温度或稀释缓冲盐。压力过低：可能因漏液（接头松动、密封垫损坏）、泵流速设置错误、流动相不足。解决方法：检查管路接头，重新拧紧或更换密封垫；确认泵流速设置；补充流动相。（二）基线噪声大原因：检测器灯能量低（更换灯）、流通池污染（清洗流通池）、电源干扰（检查接地或远离干扰源）、流动相含气泡（重新脱气）。解决：按上述原因逐一排查，更换或清洗相应部件，确保流动相脱气完全。（三）峰形异常峰拖尾/前伸：可能因色谱柱柱效下降（冲洗或更换色谱柱）、进样量过大（减少进样量）、流动相pH不匹配（调整流动相pH）。峰分裂：可能因进样体积过大（减少进样量）、色谱柱污染（冲洗色谱柱）、管路死体积大（更换短管路或接