CN105929053A Aseuplc测定通宣理肺丸中盐酸麻黄碱的方法 （广西壮族自治区梧州食品药品检验所）

(71)申请人广西壮族自治区梧州食品药品检验所代理事务所(普通合伙)取，所述的提取温度为80℃,静态提取时间为为提取溶剂，提取温度为80℃,静态提取时间为21.一种ASE-UPLC测定通宣理肺丸中盐酸麻黄碱的方法，其特征在于，依次包括下述步1)准确称取样品1g置于10mL萃取池中，用正己烷对样品进行除酯提取，所述的提取温度为80℃,静态提取时间为5min,提取次数为1次，冲洗体积100%,再以甲醇为提取溶剂，提取温度为80℃,静态提取时间为8min,提取次数为3次；提取完成后将提取液定容至25mL,吸取1.5mL于装有300mgPSA的2mL离心管中，漩涡2min,15000r/min离心3min,取上清液进行超高效液相分析；2)精密吸取0.3942g·L⁻¹的1mL,采用体积比1:1000的盐酸和甲醇溶液定容至25mL容量瓶中，制成0.0158g·L⁻¹的标准溶液，进样量分别为0.2,0.4,0.6,0.8,1,1.2μL,平行测定2次，以峰面积对质量浓度mg进行线性回归，在2.根据权利要求1所述的ASE-UPLC测定通宣理肺丸中盐酸麻黄碱的方法，其特征在于，所述的萃取仪为ASE350。3.根据权利要求1所述的ASE-UPLC测定通宣理肺丸中盐酸麻黄碱的方法，其特征在于，所述的超高效液相色谱仪为Agilent1290超高效液相色谱仪。4.根据权利要求1所述的ASE-UPLC测定通宣理肺丸中盐酸麻黄碱的方法，其特征在于，所述的分析柱ACEExcel2C18-PFP,流速0.5ml·min⁻¹,柱温35℃,检测波长210nm,进样量5.根据权利要求1所述的ASE-UPLC测定通宣理肺丸中盐酸麻黄碱的方法，其特征在于，所述的标准储备液的制备方法是精密称定盐酸麻黄碱对照品19.77mg,用体积比1:1000的盐酸和甲醇溶液定容至50mL容量瓶中，制成0.3942g·L⁻¹的标准储备液。3ASE-UPLC测定通宣理肺丸中盐酸麻黄碱的方法[0001]本发明公开了一种盐酸麻黄碱的测定方法，具体地说，是采用ASE-UPLC测定通宣理肺丸中盐酸麻黄碱的方法；属于化学检测技术领域。背景技术黄碱。《中国药典》2015年版一部规定通宣理肺[0003]快速溶剂萃取(ASE)是指在密闭容器内于高温(50～200℃)和高压(500~3000psi)条件下，在短时间内，用有机溶剂提取固体或半固体样品的一种新型样品前处理短、萃取效率高、操作简单方便、安全和自动化程度高等优点。国外已有学者将这项技术应用于植物药定量和定性分析中样品的前处理，但在中成药有效成分的定量和定性分析中作为样品的前处理方法应用较少，用于通宣理肺丸中盐酸麻黄碱提取的研究未见报道味。发明内容[0004]本发明的目的是提供一种提取时间短，且重现性好，提取完全并且可控性强的ASE-UPLC测定通宣理肺丸中盐酸麻黄碱的方法。[0005]为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案是这样的：[0007]1)精密称定盐酸麻黄碱对照品19.77mg,用体积比1:1000的盐酸和甲醇溶液定容[0008]2)准确称取样品1g置于10mL萃取池中，用正己烷对样品进行除酯提取，所述的提取温度为80℃,静态提取时间为5min,提取次数为1次，冲洗体积100%,再以甲醇为提取溶剂，提取温度为80℃,静态提取时间为8min,提取次数为3次；提取完成后将提取液定容至液进行超高效液相分析；[0009]3)精密吸取0.3942g·L⁻¹的标准储备液1mL,采用体积比1:1000的盐酸和甲醇溶液定容至25mL容量瓶中，制成0.0158g·L⁻¹的标准溶液，进样量分别为0.2,0.4,0.6,0.8,1,1.2μL,平行测定2次，以峰面积对质量浓度mg进行线性回归，在0.00315～0.0189g·L⁻¹线性[0010]进一步的，上述的ASE-UPLC测定通宣理肺丸中盐酸麻黄碱的方法，所述的萃取仪[0011]进一步的，上述的ASE-UPLC测定通宣理肺丸中盐酸麻黄碱的方法，所述的超高效4液相色谱仪为Agilent1290超高效液相色谱仪。[0012]进一步的，上述的ASE-UPLC测定通宣理肺丸中盐酸麻黄碱的方法，所述的分析柱ACEExcel2C18-PFP,流速0.5ml·min⁻¹,柱温35℃,检测波长210nm,进样量为1μL;流动相A为乙腈，流动相B为0.1%磷酸溶液；梯度洗脱程序：0～3.5min,2%A、98%B;3.5～4min,[0013]与现有技术相比，本发明提供的ASE法极大限度地节省了提取时间，由原来的48h以上，缩短为40min,且省略了繁琐的萃取净化步骤及挥干的过程，减少了盐酸麻黄碱在提取和后处理中的降解及损失，保证结果的可靠性。ASE法提取通宣理肺丸中盐酸麻黄碱可行，适用于通宣理肺丸中盐酸麻黄碱的提取。附图说明[0014]图1是标准品液相色谱图；[0015]图2通宣理肺丸中盐酸麻黄碱高效液相色谱图。具体实施方式[0016]下面结合具体实施方式，对本发明的权利要求做进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制，任何在本发明权利要求保护范围所做的有限次的修改，仍在本发明的权利要求保护范围之内。[0017]本发明所涉及的到百分含量浓度，除特殊说明外，溶质为液体的均为体积浓度，溶质为固定的均为质量浓度。[0018]实施例1测器，二元梯度泵，自动进样器(美国Agilent公司);XA205DU电子天平(瑞士梅特勒公司);3K15高速离心机(德国Sigma);ClassicUVF超纯水器(英国ELGA)。[0021]盐酸麻黄碱标准品(中国食品药品检定研究院，批号171241-201007);乙腈(色谱纯，德国Merck公司),其余试剂均为分析纯；[0022]2实验部分[0023]2.1样品来源[0024]通宣理肺丸(大蜜丸，由广西梧州三鹤药业有限公司生产，批号140201、140803、[0025]2.2标准溶液配制[0026]标准储备液：精密称定盐酸麻黄碱对照品19.77mg,用盐酸甲醇溶液(1→1000)定[0027]2.3色谱条件[0028]分析柱ACEExcel2C18-PFP(2.1mm×75mm,2μm),流速0.5ml·min⁻¹,柱温35℃,检5[0029]2.4实验方法[0030]ASE法：准确称取样品1g置于10mL萃取池中，用正己烷对样品进行除酯(提取温度为80℃,静态提取时间为5min,提取次数为1次，冲洗体积100%)后以甲醇为提取溶剂，提取温度为80℃,静态提取时间为8min,提取次数为3次。提取完成后将提取液定容至25mL,吸取1.5mL于装有300mgPSA的2mL离心管中，漩涡2min,15000r/min离心3min,取上清液进行超高效液相分析。[0031]3结果与讨论[0032]3.1液相色谱条件的选择[0033]《中国药典》一部中使用0.02mol·L⁻¹磷酸二氢钾(含0.2%三乙胺，磷酸调节PH至2.7)作为水相流动相，考虑到使用缓冲盐以及调节流动相酸度的不便，尝试用0.1%磷酸作为水相流动相，分别采用PhenomenexsynergiPolar-RP80A(4.6mm×250mm,4μm)、[0034]3.2单因素考察[0035]取批号为150702作为考察样品，影响ASE效率的因素有提取溶剂、提取温度、提取时间、提取次数等。本实验考察了这些因素对通宣理肺丸中盐酸麻黄碱提取效率的影响，并采用正交实验对提取条件进行优化，当考察某个单因素时，只改变该因素的条件，其他条件不变。提取参数的考察均以盐酸麻黄碱HPLC测定含量为评[0036]3.2.1提取溶剂和取样量的选择：准确称取通宣理肺丸样品2g,分别用正丁醇、乙酸乙酯、氨水-正丁醇、氨水-乙酸乙酯、氨水-乙醇-乙酸乙酯(3:10:90)、1.44%磷酸、碱性甲醇(pH8～9)、甲醇作为提取溶剂，在100℃下萃取5min,萃取3次，考察不同提取溶剂对盐酸麻黄碱提取效果的影响。[0037]磷酸或碱性甲醇提取效率较高，但基质影响较大；氨水-乙醇-乙酸乙酯(3:10:90)条件下提取效率较高且基质影响较小，但考虑酸、碱溶剂对ASE仪器的影响，故选择甲醇作为提取溶剂。[0038]由于实验使用的10mL萃取池溶剂冲洗体积有限，对于2g样品提取会不充分，因此选择取样量为1g。[0039]3.2.2提取温度的选择：准确称取通宣理肺丸样品1g,用甲醇作为提取溶剂，在80℃、100℃、120℃下分别提取3次，每次8min,考察不同提取温度对盐酸麻黄碱提取效果的影碱受热易降解，考虑降低温度以提高提取效率。[0040]由于甲醇的沸点约为64℃,结合ASE的高压穿透性，故选择70℃、80℃和90℃对提取方法进行摸索，考察提取温度对通宣理肺丸中盐酸麻黄碱的提取效率影响。准确称取通宣理肺丸1g,用甲醇作为提取溶剂，在70℃、80℃和90℃下分别提取3次，每次8min,考察不同提取温度对盐酸麻黄碱提取效果的影响。结果见表1。[0041]表1不同提取温度对盐酸麻黄碱的提取效果6提取温度/℃取样量/g含量(mg/丸)由以上数据可见，温度对提取效率的影响较大，在考虑盐酸麻黄碱的提取效率时，应充分考虑其高温降解的影响及其所使用溶剂的熔沸点。时间对提取效率也有一定的影甲醇可确定温度在80℃左右，进一步优化提取温度与提取时间、循环次数、杂质净化等因[0044]3.3ASE提取正交实验结果：根据以上单因素试验的结果，确定甲醇为提取溶剂，采用L₉(3⁴)正交试验，以提取温度/℃(A)、提取时间/min(B)和提取次数/次(C)这3个因素对通宣理肺丸中盐酸麻黄碱提取含量的影响，每个因素三个水平，进行ASE法提取通宣理肺丸中盐酸麻黄碱的条件优化。正交试验结果见表2,方差分析结果见表3。[0045]表2L₉(3⁴)正交试验表及结果分析含量(mg/丸)ABC空白152128323434533584162275428823931R[0047]表3方差分析表7因素自由度提取温度/℃(A)2提取时间/min(B)2提取次数/次(C)2误差2[0049]由正交试验结果可知，影响通宣理肺丸中盐酸麻黄碱ASE提取效果的各因素主次顺序为：C(提取次数)>B(提取时间)>A(提取温度),得到最佳提取条件为：A₂B₂C₂,即称样量为1g,甲醇作为提取溶剂，提取温度为80℃,提取时间为8min,提取次数3次。[0050]3.4杂质净化方法：由于样品通宣理肺丸为大蜜丸，以甲醇作为提取溶剂，处方中极性小的酯类成分以及丸剂中糖类杂质溶出较多，基质对盐酸麻黄碱液相分析干扰较大，需要前处理去掉相应的杂质干扰。[0051]3.4.1小极性杂质净化方法考察：在《中国药典》中盐酸麻黄碱使用了乙醚进行脂溶性成分的去除，由于乙醚不能适用于ASE法，尝试用正己烷对样品进行预处理，提取温度为80℃,静态提取时间为5min,提取次数为1次，冲洗体积100%,结果发现部分小极性脂类物质被去除，且盐酸麻黄碱在此条件下没有损失。[0052]3.4.2糖类杂质净化方法考察：尝试在萃取池底部填充一定量的净化材料，如硅增加，净化效果越好，但中性氧化铝和碱性氧化铝对目标化合物对盐酸麻黄碱有一定吸附作用，损失率约为15%～18%。PSA(N-丙基乙二胺)吸附糖类物质效果较好，且基本没有损失，但考虑到在萃取池中直接加PSA的量较大，成本较高，故改用Quechers净化方法。即对min离心3min,取上清液进行超高效液相分析。[0053]3.4.3净化量考察：分别吸取1.5mLASE萃取液置于装有50,100,200,300,400,500mgPSA的2mL净化管中，漩涡2min,[0054]3.5方法学考察[0055]3.5.1线性关系精密吸取0.3942g·L⁻¹的标准储备液1mL,用盐酸甲醇溶液(1→1000)定容至25mL容量瓶中，制成0.0158g·L⁻¹的标准溶液。进样量分别为0.2,0.4,0.6,0.8,1,1.2μL,平行测定2次，以峰面积(Y)对质量浓度mg(X)进行线性回归，在0.00315~[0056]3.5.2方法重复性和回收率考察：准确称取通宣理肺丸(批号：150702)1g共6份，再准确称取通宣理肺丸(批号：150702)0.5g共6份，精确加入盐酸麻黄碱标准溶液0.3mL(含盐酸麻黄碱0.11826mg),按2.5.1方法进行提取及检测。结果如表4,重复性RSD为3.0%,加标8回收率范围为92%～102%,由于