2025年化学发光免疫分析考核试题及答案

2025年化学发光免疫分析考核试题及答案一、单项选择题（每题1分，共30分）1.化学发光免疫分析中，最常用于标记抗体的发光底物是A.鲁米诺B.吖啶酯C.辣根过氧化物酶D.碱性磷酸酶答案：B2.在磁微粒化学发光体系中，分离游离与结合相的核心步骤是A.离心B.过滤C.磁场吸附D.电泳答案：C3.下列哪项不是影响化学发光信号强度的主要因素A.温度B.pHC.离子强度D.抗体亲和力答案：D4.吖啶酯发光反应需要的触发剂是A.过氧化氢+碱B.过氧化氢+酸C.过氧化氢+酶D.过氧化氢+还原剂答案：A5.关于ALP-AMPPD体系，描述正确的是A.发光为闪光型B.信号半衰期<5sC.需持续激发光D.发光为辉光型，可持续数十分钟答案：D6.化学发光免疫分析中，封闭液通常不含A.牛血清白蛋白B.酪蛋白C.聚乙二醇D.表面活性剂答案：C7.在双抗体夹心法中，若待测抗原浓度过高出现钩状效应，信号表现是A.持续升高B.平台后下降C.线性下降D.无变化答案：B8.磁微粒表面最常用于偶联抗体的活性基团是A.羟基B.羧基C.醚键D.苯环答案：B9.化学发光仪PMT高压增益降低，最可能导致A.本底升高B.灵敏度下降C.线性范围扩大D.精密度提高答案：B10.关于试剂批间差控制，错误的是A.使用同一批磁珠B.校准品可互换C.记录发光值CVD.采用同一批发光底物答案：B11.下列哪种干扰物最易引起假性升高A.生物素B.血红蛋白C.胆红素D.甘油三酯答案：A12.化学发光平台中，最常用于甲状腺激素检测的方法是A.竞争法B.夹心法C.间接法D.捕获法答案：A13.对于发光底物稳定性考察，加速实验通常选择A.4℃，7天B.25℃，7天C.37℃，7天D.45℃，7天答案：C14.在试剂盒线性验证中，要求相关系数r不低于A.0.95B.0.98C.0.99D.0.999答案：C15.关于吖啶酯标记抗体，最佳保存缓冲液pH为A.4.0B.6.0C.7.4D.9.0答案：C16.化学发光免疫分析中，最常用于降低非特异性结合的阻断剂是A.Tween-20B.SDSC.尿素D.甘氨酸答案：A17.若校准品发光值逐渐降低，首要排查A.底物失效B.校准品降解C.仪器污染D.电压不稳答案：B18.对于高剂量钩状效应，最佳解决方案是A.稀释样本B.增加抗体量C.降低孵育时间D.提高底物浓度答案：A19.化学发光信号采集时间窗口一般设置为A.0.1sB.1sC.5sD.10s答案：B20.关于AMPPD，描述错误的是A.全称为金刚烷基-1,2-二氧环己烷磷酸酯B.产物为金刚酮与激发态中间体C.发光波长470nmD.需辣根过氧化物酶催化答案：D21.在试剂盒注册检中，重复性实验要求CVA.≤5%B.≤8%C.≤10%D.≤15%答案：C22.化学发光仪每日质控，通常采用A.阴性对照B.低值质控C.高值质控D.以上均含答案：D23.关于生物素-链霉亲和素放大系统，优势不包括A.多级放大B.降低LODC.缩短反应时间D.降低抗体用量答案：C24.若样本溶血，最可能干扰的检测项目是A.TSHB.FT3C.CA125D.PCT答案：B25.化学发光平台中，最常用于心肌标志物检测的标记酶是A.HRPB.ALPC.GOxD.CAT答案：B26.关于校准曲线拟合，四参数Logistic函数中决定曲线对称性的参数是A.AB.BC.CD.D答案：B27.在试剂盒稳定性研究中，实时保存条件为A.4℃B.−20℃C.25℃/60%RHD.37℃答案：C28.化学发光信号单位通常表示为A.ODB.RLUC.cpsD.AU答案：B29.若质控品连续3天偏高，首先应A.更换底物B.重新校准C.清洗管路D.检查温控答案：B30.关于吖啶酯标记效率测定，常用方法是A.紫外吸收B.荧光强度C.发光强度比D.质谱答案：C二、配伍题（每空1分，共20分）A.鲁米诺体系B.吖啶酯体系C.ALP-AMPPD体系D.电化学发光体系31.需三联吡啶钌标记，三丙胺参与反应答案：D32.发光为闪光型，信号峰值<5s答案：B33.需HRP催化，过氧化氢参与答案：A34.发光为辉光型，信号持续>30min答案：C35.可用便携式小型仪，适合床旁检测答案：AA.竞争法B.夹心法C.间接法D.捕获法36.小分子激素检测常用答案：A37.病毒IgM抗体检测常用答案：D38.肿瘤标志物CA153检测常用答案：B39.总抗体筛查常用答案：C40.T3检测常用答案：AA.生物素B.血红蛋白C.胆红素D.甘油三酯41.引起信号抑制，假性降低答案：B42.引起链霉亲和素竞争，假性升高答案：A43.引起底物消耗，背景升高答案：D44.引起非特异性吸附，背景升高答案：C45.可通过沉淀离心去除答案：DA.37℃加速B.强光照射C.反复冻融D.开瓶稳定性46.考察运输条件答案：A47.考察使用周期答案：D48.考察标记物光降解答案：B49.考察蛋白构象变化答案：C50.考察试剂盒整体稳定性答案：A三、填空题（每空1分，共20分）51.化学发光免疫分析英文缩写为________。答案：CLIA52.吖啶酯发光反应触发剂中碱常用________。答案：NaOH53.ALP最适发光底物AMPPD全称为________。答案：adamantyl-1,2-dioxetanephosphate54.四参数Logistic方程中C值代表________。答案：拐点浓度55.磁微粒粒径一般选择________μm，兼顾沉降速度与表面积。答案：1–356.生物素与链霉亲和素亲和力常数约为________M⁻¹。答案：10¹⁵57.化学发光仪PMT工作温度常控制在________℃以降低暗电流。答案：5–1058.国家药监局对III类体外诊断试剂注册检要求不少于________例临床样本。答案：100059.重复性实验要求同一批次内CV≤________%。答案：1060.线性稀释回收率应在________%范围内。答案：85–11561.吖啶酯标记抗体常用缓冲液含________以稳定发光。答案：0.1%BSA62.竞争法标准曲线呈________斜率。答案：负63.夹心法检测下限主要受________限制。答案：背景信号64.化学发光信号与酶量关系在________范围内呈线性。答案：10³–10⁵RLU65.生物素干扰可通过________稀释降低。答案：链霉亲和素封闭66.溶血样本血红蛋白>________g/L需拒收。答案：567.校准品赋值溯源至________参考物质。答案：WHO68.试剂盒开封后稳定期一般≤________天。答案：3069.化学发光底物避光保存需使用________色瓶子。答案：棕70.质控图采用________规则判断失控。答案：1-3s/2-2s/R-4s四、判断题（每题1分，共10分）71.吖啶酯发光需酶催化。答案：错72.ALP-AMPPD体系发光波长为470nm。答案：对73.竞争法标准曲线呈正斜率。答案：错74.磁微粒浓度越高，非特异性结合越低。答案：错75.化学发光信号与温度呈正相关。答案：对76.生物素干扰可通过稀释样本消除。答案：对77.电化学发光需持续激发光。答案：错78.重复性实验需使用3个浓度水平。答案：对79.校准品可互换不同批次使用。答案：错80.化学发光仪需每日进行空白检测。答案：对五、简答题（每题8分，共40分）81.简述化学发光免疫分析相比酶联免疫的优势。答案：化学发光免疫分析以发光反应代替显色，信号动态范围宽10⁴–10⁶倍，检测限低至10⁻¹⁸mol/L；无需激发光，背景低；标记物稳定，半衰期长；全自动化程度高，孵育时间短；无放射性污染，试剂运输保存方便；线性范围宽，减少稀释步骤；可与生物素-链霉亲和素放大系统联用，进一步提高灵敏度；适合急诊高通量检测。82.说明吖啶酯标记抗体的实验步骤及注意事项。答案：步骤：1.抗体脱盐至pH7.4PBS；2.计算吖啶酯-NHS酯摩尔比1:10–20；3.室温避光反应1h；4.加入赖氨酸终止；5.超滤去除游离吖啶酯；6.测定标记率（发光强度/蛋白浓度）；7.加入保护剂分装−20℃保存。注意事项：避光操作，使用棕色管；控制pH7.2–7.6避免水解；反应后尽快去除游离发光物；标记率低于3需重新标记；保存液含0.1%BSA10%蔗糖防止聚集；避免反复冻融。83.解释高剂量钩状效应产生机制及解决策略。答案：机制：待测抗原远过量，同时占据捕获抗体与标记抗体结合位点，形成单抗-抗原复合物而非夹心，洗涤时被去除，信号反而下降。策略：1.两步法孵育，先样本与捕获抗体结合，洗涤后再加标记抗体；2.设置高值报警，自动稀释重测；3.优化抗体亲和力与用量，降低抗原过剩窗口；4.使用宽范围校准品覆盖；5.软件算法识别异常曲线并提示。84.描述ALP-AMPPD体系发光机理并给出优化方向。答案：机理：ALP催化AMPPD脱磷酸，生成不稳定的二氧环中间体，分解为金刚酮与激发态甲基芳基酸酯，跃迁回基态发出470nm光。优化：1.提高ALP比活性，采用基因工程酶；2.优化缓冲液pH9.5–10.0，添加Mg²⁺激活；3.加入增强剂如聚合物微球，提高量子产率；4.控制反应温度37℃±0.1℃；5.使用低吸附反应杯减少信号损失；6.底物现配现用，避光保存。85.说明化学发光试剂盒稳定性研究实验设计。答案：1.样本选择：三批中试产品；2.条件设置：实时25℃/60%RH0–24月；加速37℃0–6月；强光4500lx10天；反复冻融−20←→25℃5次；开瓶2–8℃1月；运输模拟4℃→45℃72h；3.评价指标：外观、空白、灵敏度、线性、质控CV、回收率、临床样本符合率；4.检测点：0、1、2、3、6、12、24月；5.统计：采用ANOVA分析变化趋势，以CV≤10%、偏差≤±10%为合格；6.结论：推算有效期，写进说明书。六、综合设计题（每题20分，共40分）86.设计一款高敏心肌肌钙蛋白I（cTnI）化学发光试剂盒，要求检测限≤1pg/mL，线性1–25000pg/mL，CV≤5%，并给出关键原材料选择、反应模式、校准策略、质控方案。答案：原材料：1.捕获抗体选用小鼠抗cTnIcentralregionIgG1，亲和力3×10⁻¹¹M⁻¹，生物素化；2.标记抗体选用小鼠抗cTnIN-terminalALP融合蛋白，比活性4000U/mg；3.磁珠选用2.8μm羧基化，链霉亲和素包被，结合能力≥80ngAb/mg；4.校准品采用重组cTnI全蛋白，添加10%海藻糖−70℃分装，溯源至NISTSRM2921；5.底物选用AMPPD增强型，含0.1%聚合物微球。反应模式：两步夹心，75μL样本+50μL捕获抗体-磁珠，37℃9min，磁场洗涤；加50μLALP-抗体，37℃9min，洗涤；加200μL底物，37℃5min，读数1s。校准策略：6点校准，四参数Logistic拟合，每批次随行，校准周期14天或质控失控。质控方案：采用独立三级质控（低5pg/mL、中500pg/mL、高15000pg/mL），每批次各2孔，Westgard多规则；日间CV目标≤5%；参与外部EQA计划。性能验证：空白限LoB=0.3pg/mL，检测限LoD=0.8pg/mL，定量限LoQ=1pg/mL（CV=5%）；线性验证覆盖1–25000pg/mL，r≥0.999；回收率95–105%；干扰实验：血红蛋白5g/L、胆红素400μmol/L、甘油三酯10mmol/L、生物素50ng/mL，偏差≤±10%；稳定性：实时18月，加速37℃6月偏差≤±10%。87.某实验室新引进化学发光仪，拟开展25-羟维生素D检测。请给出完整性能验证方案，包含精密度、正确度、线性、参考区间、干扰试验、可报告范围，并列出接受标准。答案：1.精密度：采用NCCLSEP15-A3，选取低（15ng/mL）、中（30ng/mL）、高（80ng/mL）样本，每日1