DB43∕T 701-2012 饲料中硝呋烯腙的测定 高效液相色谱法

饲料中硝呋烯腙的测定2012-07-24发布2012-07-24发布湖南省质量技术监督局发布 Ⅱ 12规范性引用文件 13原理 14试剂和材料 1 2 27测定步骤 28结果计算和表达 3 3附录A(资料性附录)硝呋烯腙高效液相色谱图 4工Ⅱ本标准按GB/T1.1—2009的规则编制。本标准由湖南省畜牧水产局提出并归口。本标准起草单位：湖南省畜禽水产品质量检验检测中心、湖南省兽药饲料监察所。本标准主要起草人：谭美英、易建希、陈福华、邓云波、肖安东、隆雪明、周玉洁、匡光伟、徐丽枚、宋跃君、邓昉、何红艳。12规范性引用文件凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法采用二甲亚砜-乙腈溶液提取试样中的硝呋烯腙，混合型阳离子固相萃取柱净化，氨化二甲亚砜-乙腈溶液洗脱，高效液相色谱(紫外检测器)测定，外标法定量。4试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682一级水的规定。4.2二甲亚砜色谱纯。4.4缓冲溶液：称取3.034g庚烷横酸钠和3.152g一水合柠檬酸，用水溶解并定容至1L,用三乙胺调节PH至2.5。4.5流动相：缓冲溶液+乙腈=55+45。4.6提取液(二甲亚砜-乙腈溶液):将40mL二甲亚砜与60mL乙腈混合均匀，即得。4.7洗脱液(4%氨水-二甲亚砜-乙腈溶液):将4mL氨水与96mL二甲亚砜-乙腈溶液混合均匀，即得。4.8硝呋烯腙对照品：含硝呋烯腙应大于98%。4.9标准储备液的配制：称取硝呋烯腙对照品0.01g(精确到0.00001g),置于10mL容量瓶中，加适量二甲亚砜超声溶解并用乙腈定容。配制成浓度为1.0mg/mL的标准储备溶液。4℃以下避光可保4.10标准工作溶液的配制：准确移取适量硝呋烯腙标准储备液，用流动相分别稀释配成0.5、1.0、4.11微孔滤膜：0.45um,有机膜。4.12SPE柱(混合型阳离子固相萃取柱):60mg/3mL。25仪器和设备5.2分析天平：感量0.00001g和0.001g。5.3固相萃取装置。5.4旋涡混匀器。5.6超声波清洗机。6采样6.1采样步骤：按GB/T14699.1-2005的规定执行。6.2试样的制备：将采集的饲料样品，用四分法缩减分取200g,粉碎过0.45mm孔径的筛，充分混匀，装入磨口瓶中备用。7测定步骤7.1样品提取称取试样5g(精确到0.001g),置于50mL离心管中，加入25.0mL提取液，涡旋混合均匀，超声提取10min,6000r/min离心10min,取上清液于具塞试管中，重复上述操作，合并两次上清液，旋涡混匀，备用。将SPE柱依次用乙腈5mL、二甲亚砜-乙腈溶液5mL活化，取上述提取液(配合饲料15.0mL、浓缩饲料10.0mL、添加剂预混合饲料5.0mL)过柱，用二甲亚砜-乙腈溶液5mL淋洗，真空抽干。用4%氨水-二甲亚砜-乙腈溶液5.0mL洗脱，收集洗脱液，混匀，过0.45μm微孔滤膜，供高效液相色谱分析。7.3.1高效液相色谱条件流速：1mL/min。检测波长：382nm。烯腙高效液相色谱图参见附录A,硝呋烯腙标准工作液色谱图参见附录A中图A.1,试样中添加硝呋烯38结果计算和表述以峰面积为横坐标，浓度为纵坐标作单点或多点校准。试样中硝呋烯腙的含量由色谱数据处理软件或按下式计算。X——试样中硝呋烯腙的含量，单位为毫克/千克(mg/kg);V₂——过固相萃取柱所用备用液体积，单位为毫升(mL);计算结果需扣除空白试样，测定结果用两次平行测定的算术平均值表示，测定结果保留三位有效数字。9检测方法灵敏度、准确度、精密度硝呋烯腙在饲料中的检出限为0.5mg/kg。9.2准确度本方法在0.5、1.0、2.5mg/kg添加浓度水平上的回收率范围为(75～105)%。9.3精密度本方法的批内变异系数≤10%,批间变