大型实验动物标准作业指导书

大型实验动物标准作业指导书一、概述

大型实验动物标准作业指导书旨在规范实验动物的操作流程，确保动物福利、实验数据准确性和人员安全。本指导书适用于各类涉及大型实验动物（如猪、羊、犬、猴等）的实验研究机构，内容涵盖动物饲养、健康管理、实验操作、环境控制及废弃物处理等关键环节。

二、动物饲养管理

（一）环境要求

1.实验动物房应保持恒温、恒湿、通风良好，温度控制在20±2℃，湿度控制在40%-60%。

2.空气过滤系统应定期更换滤网，确保空气洁净度达到10,000级标准。

3.地面、墙壁、天花板应采用易清洁材料，定期消毒（每周至少2次）。

（二）饲养管理

1.饲养密度：每平米饲养面积不超过2只动物，确保动物有足够活动空间。

2.饮食管理：提供营养均衡的饲料，每日定时喂食，保持饮水清洁（每日更换）。

3.清洁卫生：每日清理动物笼具，每周深度清洁1次，使用70%-75%酒精或消毒液消毒。

（三）健康管理

1.定期体检：每月进行1次健康检查，记录体重、体温、行为状态等数据。

2.疾病监测：建立疾病档案，发现异常及时隔离并报告。

3.兽医支持：配备专业兽医，提供紧急诊疗和手术支持。

三、实验操作规范

（一）实验前准备

1.动物筛选：选择健康、年龄匹配的实验动物，确保实验结果可靠性。

2.实验方案：提前审批实验方案，明确操作步骤、麻醉方式及数据采集方法。

3.设备检查：确保实验仪器（如手术台、呼吸机）功能正常，校准精度符合要求。

（二）实验过程

1.麻醉操作：使用合格麻醉剂，按体重精确给药，全程监测动物生命体征。

2.手术规范：严格无菌操作，使用消毒器械，减少手术创伤。

3.数据记录：实时记录实验数据，包括生理指标、行为变化等，确保数据完整性。

（三）实验后处理

1.动物恢复：术后放置恢复区，观察至少2小时，确认无生命危险后方可转移。

2.数据整理：汇总实验数据，分析结果并撰写报告。

3.动物处置：实验结束后的动物可继续用于其他研究或人道处理，过程需符合伦理要求。

四、环境与废弃物管理

（一）环境控制

1.气体排放：实验产生的有害气体需经过过滤装置处理，排放浓度低于国家标准。

2.噪音控制：设备运行噪音低于60分贝，避免对动物造成应激。

3.照明管理：提供12小时明暗交替的光照，模拟自然光照周期。

（二）废弃物处理

1.生物废弃物：手术器械、组织样本等需高压灭菌后焚烧处理。

2.化学废弃物：废液需分类收集，按危险品规定处理。

3.废弃物记录：建立废弃物台账，定期向监管机构汇报。

五、人员安全与培训

（一）人员防护

1.个人防护：实验人员需穿戴实验服、手套、护目镜等防护用品。

2.感染防控：接触动物前后需洗手消毒，避免交叉感染。

3.急救准备：实验区配备急救箱，人员熟悉应急处理流程。

（二）培训要求

1.新员工培训：上岗前需接受动物福利、操作规范及安全知识培训，考核合格后方可操作。

2.定期复训：每年进行1次复训，更新实验流程及安全标准。

3.持证上岗：关键岗位（如兽医、麻醉师）需持相关资格证书。

六、附录

（一）常用消毒剂配制表

1.70%-75%酒精：市售酒精稀释至所需浓度。

2.高锰酸钾溶液：0.1%-0.5%浓度，根据消毒对象调整。

3.过氧乙酸溶液：0.2%-0.5%浓度，用于器械浸泡。

（二）实验记录表模板

1.动物基本信息：编号、品种、体重、年龄。

2.实验过程记录：操作时间、麻醉剂量、生命体征变化。

3.数据分析结果：统计方法、结论建议。

（三）应急处理流程

1.动物攻击：立即启动隔离程序，人员撤离至安全区域。

2.设备故障：紧急联系维修人员，切换备用设备。

3.疾病爆发：隔离病患，上报兽医并调整实验方案。

**四、环境与废弃物管理**

（一）环境控制

1.**空气质量管理：**

*(1)**通风系统维护：**确保实验动物房通风系统（HVAC）正常运行，定期（建议每月）检查风机运行状况、风量分配，并更换或清洗空气过滤棉/滤网（初效、中效、高效滤网）。高效滤网（HEPA）的更换周期根据使用频率和压差监测结果确定，通常为6-12个月。通风量需满足动物需求并考虑人员活动，换气次数一般不低于15次/小时。

*(2)**有害气体控制：**对于可能产生氨气、二氧化碳等气体的区域（如饲育区、实验操作区），应设置独立通风或加强整体通风，并考虑安装气体监测报警装置，实时监控氨气浓度等关键指标，设定报警阈值（例如，氨气浓度低于0.5ppm）。定期检测通风系统对有害气体的排除效果。

*(3)**空气过滤：**在靠近动物饲养区或实验操作区的通风回风口可考虑增设活性炭滤网，以吸附实验中可能产生的挥发性有机物（VOCs），但需注意活性炭饱和后的及时更换，避免二次污染。

2.**噪音控制：**

*(1)**设备隔震：**对运行时产生较大噪音的设备（如空调压缩机、水泵、通风风机、真空泵等），应在其基础或设备与地面接触处安装隔震垫或设置隔震沟，减少振动和噪音传播。

*(2)**设备布局：**将高噪音设备尽量布置在远离动物饲养区和敏感实验区域的位置，利用建筑结构或隔墙进行阻隔。

*(3)**运行时间管理：**合理安排高噪音设备的运行时间，避免在动物休息时段（如夜间）进行维护或产生噪音的操作。

*(4)**定期检查：**定期检查设备运行状态，确保轴承润滑良好，避免因故障产生异常噪音。测量关键区域的噪音水平，确保符合标准（例如，动物饲养区白天噪音低于60分贝，夜间低于50分贝）。

3.**光照管理：**

*(1)**照明设计：**实验动物房照明应避免产生频闪，使用长寿命、光色适宜的灯具（如LED灯）。照明设计需模拟自然光照周期，采用定时开关或光控系统，实现每日12-14小时的明亮期和10-12小时的黑暗期。

*(2)**遮光措施：**黑暗期必须保证环境完全黑暗，窗帘、百叶窗等遮光设施应完好，防止外界光线干扰动物生理节律。定期检查遮光效果。

*(3)**照度测量：**定期使用照度计测量明亮期和黑暗期的光照强度，明亮区照度应均匀，一般不低于100勒克斯（lux），黑暗区应确保无可见光源。

（二）废弃物处理

1.**生物废弃物处理：**

*(1)**分类收集：**按照废弃物类型（如感染性废物、损伤性废物、体液废物、普通动物尸体等）进行严格分类收集。使用符合标准的、有明确标识的收集容器（如黄色防渗漏塑料袋、利器盒等）。

*(2)**感染性废物处理：**实验动物尸体、组织、血液、体液、被其污染的器械、纱布、手套等，应先置于生物安全柜内进行初步消毒（如使用10%漂白水或有效氯浓度为1000-2000ppm的消毒液浸泡30分钟），然后装入双层防渗漏包装袋，封口严密，并标注“感染性废物”字样。

*(3)**损伤性废物处理：**穿刺针、手术刀、玻璃碎片等锐器，应直接放入符合国际安全型锐器盒（防刺穿、防渗漏、防泄漏）中，直至盒满3/4时封口，并标注“锐器废物”。

*(4)**高温高压灭菌：**所有感染性废物和大部分体液废物，在转移前必须经过高压蒸汽灭菌处理（参数：压力121kPa，时间15-20分钟），灭菌效果需定期监测（如使用生物指示剂）。

*(5)**最终处置：**灭菌合格的医疗废物，按照当地regulations运至符合资质的医疗废物处理厂进行无害化处理（如焚烧）。未达到感染性标准的动物尸体，可进行化尸处理（如化尸炉），或经高压灭菌后作为普通垃圾处理（需确认当地法规允许）。

2.**化学废弃物处理：**

*(1)**分类收集：**废弃化学试剂、溶液、清洗剂等应根据其化学性质（如酸碱性、易燃性、毒性）进行分类收集。严禁将不相容的化学物质混装在同一容器中。

*(2)**废液处理：**废酸、废碱液应先进行中和处理（如酸碱中和法）至中性（pH6-8）后，再按照“普通化学废弃物”进行处理。含有重金属、有机溶剂等有毒有害物质的废液，需委托有资质的专业公司进行安全处置，严禁直接排放。

*(3)**包装标识：**所有化学废弃物容器必须贴有清晰标签，注明废物名称、产生日期、危险特性（如腐蚀、易燃、有毒）等信息。

*(4)**储存管理：**化学废弃物应储存在阴凉、通风、干燥的专门储存区域，远离热源、火源和incompatiblematerials，防止泄漏或混合反应。

3.**固体废弃物处理：**

*(1)**普通固体废弃物：**实验中产生的纸巾、实验记录纸、未被污染的包装材料等，应作为普通垃圾处理。收集时使用普通垃圾袋，但需确保垃圾袋完好无损，无渗漏风险。

*(2)**包装废弃物：**未使用或过期的动物饲料袋、药品包装等，根据材质分类处理，可回收利用的应交予回收部门。

*(3)**合规处置：**所有固体废弃物均需按照当地regulations进行分类收集和处置，确保符合环保要求。

4.**废弃物记录与处置追踪：**

*(1)**台账记录：**建立详细的废弃物管理台账，记录废弃物的种类、数量、产生日期、收集人员、转移日期、最终处置单位及方式等信息。台账保存期限根据法规要求执行。

*(2)**转移联单：**废弃物在转移过程中，必须使用环保部门规定的危险废物转移联单制度，确保废物去向清晰可追溯。

*(3)**定期审核：**定期（如每季度）对废弃物管理台账和处置记录进行审核，确保所有废弃物均得到合规、安全的处理。

**五、人员安全与培训**

（一）人员防护

1.**个人防护装备（PPE）选用与使用：**

*(1)**基础防护：**所有进入实验动物区域的人员必须穿戴工作服、工作帽，以减少对动物环境的污染和自身暴露风险。

*(2)**手部防护：**根据操作性质选择合适的防护手套。接触潜在感染性物质或化学试剂时，必须佩戴一次性无菌手套或耐化学手套（如丁腈手套）。接触动物（特别是非屏障环境）时，建议佩戴丁腈手套或橡胶手套。操作完成后必须及时脱掉手套并进行手部清洁。

*(3)**眼部防护：**在可能发生飞溅（如手术、注射、处理腐蚀性物质）的操作中，必须佩戴护目镜或面屏，必要时可佩戴全面罩。

*(4)**呼吸道防护：**在生物安全柜外进行可能产生气溶胶的操作（如气驱式吸痰、高压灭菌后开盖），或进入生物安全级别较低的动物房时，建议佩戴医用外科口罩。在处理高致病性病原体或存在未知感染风险时，必须佩戴N95/KN95或更高级别的防护口罩和防护面屏。

*(5)**身体防护：**进入动物房操作时，应穿着长袖实验服，避免皮肤暴露。根据需要可穿防渗透实验围裙或套袖。严禁佩戴可能掉落或被动物抓取的饰品（如戒指、手表、项链、耳环）。

2.**手部卫生：**

*(1)**洗手时机：**每次接触动物前后、摘掉手套后、处理污染物后、进食、饮水、吸烟、使用卫生间前后、进入和离开清洁区/缓冲区/污染区时，都必须进行手部清洗。

*(2)**洗手方法：**使用流动水和抗菌洗手液（含至少60%酒精或含氯消毒剂）彻底清洗双手，包括指缝和指尖，整个过程不少于20秒。必要时可用含70%-75%酒精的免洗手消毒液进行手部消毒。

*(3)**手部伤口处理：**手部如有破损伤口，必须先进行包扎，然后佩戴双层手套进行操作，或避免直接接触。

3.**着装规范：**

*(1)**工作服要求：**实验动物房的工作服应专用，保持清洁干燥，不得穿出实验区域。如有污染，应及时更换。

*(2)**进出管理：**进入动物房前，工作服应经过必要的清洁或消毒（如使用消毒液喷洒或紫外线照射）。离开动物房时，工作服不能接触到外界环境，应按规定流程处理或带回清洁区换装。

4.**生物安全柜使用：**

*(1)**操作前检查：**每次使用前检查生物安全柜的运行状态（灯光、风机声音、风速指示），确保过滤器完好（目视检查或根据使用时间/压差判断）。

*(2)**正确操作：**确保操作符合安全柜类型（B3/B2型）的要求，物品摆放不超过柜内有效工作区，避免阻碍气流。手部操作区域应靠近前窗中央。尽量减少开门次数和时间。

*(3)**清洁消毒：**每日工作结束后，对操作台面和内部表面进行清洁和消毒。定期（如每周或根据污染风险）进行内部彻底清洁和消毒。

（二）培训要求

1.**上岗前培训：**

*(1)**通用培训：**所有进入实验动物房的人员必须接受通用培训，内容包括：实验动物福利的基本原则、本指导书规定的各项操作规程、生物安全等级及防护要求、废弃物处理流程、应急预案等。培训后需通过考核。

*(2)**岗位专项培训：**根据岗位职责，接受专项培训：

*饲养人员：动物日常管理、健康监测、环境维护、基础保定、清洁消毒等。

*实验操作人员：实验方案执行、麻醉与镇痛技术、采样技术、手术操作（如需）、行为观察、数据记录等。

*兽医人员：动物疾病诊断与治疗、手术技术、安乐死规范、尸体剖检等。

*设备维护人员：相关仪器设备（HVAC、生物安全柜、监测设备等）的操作、维护与故障排除。

*(3)**实际操作培训：**理论培训后，必须在经验丰富的指导下进行实际操作练习，直至熟练掌握。

2.**定期复训与考核：**

*(1)**复训频率：**每