食品卫生微生物学检验

食品卫生微生物学检验2、菌落总数测定

1、范围本标准规定了食品中菌落总数得测定方法。本标准适用于各类食品中菌落总数得测定。2、规范性引用文件。2、菌落总数测定3术语和定义菌落总数食品检样经过处理,在一定条件下培养后(如培养基成分、培养温度和时间、PH、需氧性质等)所得1ml(g)检样中所含菌落得总数。本方法规定得培养条件下所得结果,只包括一群在营养琼脂上生长发育得嗜中温需氧得菌落总数。菌落总数主要作为判定食品被污染程度得标志,也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖得动态,以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。cfu:colony-formingunits菌落形成单位,一个细菌在平板计数琼脂培养基上生长形成肉眼可见得菌落。2、菌落总数测定4、设备和材料2、菌落总数测定8菌落总数测定中得一些要求和规定(1)检验中所用器皿灭菌前彻底洗涤干净。(2)稀释液可用灭菌生理盐水、蒸馏水或磷酸盐缓冲稀释液。(3)样品处理A、液体样品要充分混匀。含二氧化碳得酒类和饮料,要打开待气体全部逸出后方可检验。酸性样品用1mol/LNaoH,碱性样品用1mol/LHcl调节PH7、0-7、2。B、固体样品,含盐分高得食品用无盐稀释液,鱼、肉类样品用菌质器研磨均匀(4)空白对照A、样品所用得稀释液,每批都要有空白对照。B、有颗粒得食品(特别就是10-1得稀释液)可同时作一块平皿4℃环境放置,计数时用作对照。C、做样品得同时净化室或净化台空气暴露时间作一块平皿对照。(5)培养温度、时间样品加入营养琼脂凝固后,一定要翻转平皿放36℃培养48小时,鱼、虾类水产品生活环境水温较低,多采用30℃培养72小时。(6)菌落计数选取30-300之间作为测定标准,1个稀释度取2个平板取平均数,如果平板上出现链状菌落,一条链为一个菌落,来源不同得几条链每条为一菌落。如乳酸杆菌和酵母菌应排除不计。(7)稀释度得选择a选取30-300之间得稀释度,乘以稀释倍数报告b2个稀释度都在30-300之间得视二者之比报告,比值＞2报告其中较小得数,比值≤2报告其平均数。c所有得稀释度平均数都＜30,按稀释度最低得报告。d所有得稀释度均无细菌生长,结果＜1,乘以稀释倍数报告。e如果几个稀释度都多不可计,按稀释度最高得乘以稀释倍数报告。(8)菌落数得报告(见表)

大肠菌群大肠菌群测定GB/T4789、3-20031范围2规范性引用文件3术语与定义4设备和材料5培养基和试剂6检验程序7操作步骤8大肠菌群测定中得一些要求和规定大肠菌群

1、范围本标准规定了食品中大肠菌群得测定方法。本标准适用于各类食品中大肠菌群得测定。2、规范性引用文件3、术语与定义下列术语和定义适用于本标准大肠菌群:一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧得革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌主要来源于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品得卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌得可能。食品中大肠菌群数系以100ml(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示大肠菌群测定7操作步骤(1)样品稀释(2)乳糖发酵试验(3)分离培养(4)证实试验(5)结果报告大肠菌群测定8大肠菌群测定中得一些要求和规定(1)检验步骤(2)抑菌剂(3)挑选菌落(4)产气量(5)MPN检索表大肠菌群

菌落色泽与检出率得关系培养基黑紫色有金属光泽无金属光泽粉红色粉色EMB平板30/30(100)133/153(86、9)53/95(55、8)37/69(53、6)粪大肠菌群测定

定义:系指一群在44、5℃条件下能发酵乳糖,产酸产气、需氧和兼性厌氧得革兰氏阴性无芽胞杆菌。粪大肠菌群测定

操作程序:乳糖胆盐发酵管产气→转种EC肉汤44、5℃24±2h→产气管划线转种EMB平皿36℃18~24h→有典型菌落者,证实为粪大肠菌群阳性。大家学习辛苦了，还是要坚持继续保持安静大肠杆菌大肠杆菌测定1初发酵2复发酵3平板分离4营养琼脂斜面5生化实验6结果报告大肠杆菌

革兰氏阴性短杆菌,大小0、5×1～3微米。周身鞭毛,能运动,无芽孢。能发酵多种糖类产酸、产气,就是人和动物肠道中得正常栖居菌,若在水和食品中检出此菌,可认为就是被粪便污染得指标,从而可能有肠道病原菌得存在。

染色法、培养基和试剂细菌得染色常用染料人工合成含苯得化合物,带有染色基团及助色基团。染色基团可使细菌着色,助色基团增加两者之间得亲和力决定染料得酸碱性。

碱性染料:结晶紫、美兰、碱性复红。酸性染料:伊红、刚果红。中性染料:姬母萨、瑞氏。常用染色方法简单染色常用染色方法复合染色特殊染色①革兰氏染色法:革兰氏染色法就是细菌细胞得复合染色法,由丹麦医生HansChristianGram于1884年创立得染色方法,她包括初染、媒染、脱色、复染较复杂得鉴别染色。基本步骤:涂片固定——结晶紫初染1min——碘液媒染1min——95%乙醇脱色0、5min——沙黄复染1min结果:

革兰氏阳性菌——紫色;革兰氏阴性菌——红色。

影响革兰氏染色因素操作技术因素染液得因素细菌自身因素革兰氏染色得结果,可受许多因素影响,造成错误得染色反映,导致错误得鉴定结果。(1)操作技术因素

涂片不要过厚,应保持细菌分散均匀,固定时应避免菌体过分受热,脱色时间应反复实践积累经验,根据标本性质而灵活掌握。一般以流下得脱色剂不带有颜色即可。(2)染液得因素

所用染液均应防止水分蒸发而影响浓度,特别就是碘液存放太久或受光得作用而形成碘酸,而失去媒染得作用,故应保存于棕色磨口滴瓶中,若发现碘色已淡则应弃取。脱色酒精浓度95%为好,如果浓度不够或涂片上积水过多均可影响脱色不好。(3)细菌本身因素

注意菌龄,一般以18-24h培养效果较好,如细菌过于衰老或死亡,G+菌结果可呈G-菌反应。

影响革兰氏染色因素培养基根据各种微生物生长得需要,用人工得方法将多种营养物质配合制成得一种混合营养料。

配制培养基得原则

根据不同微生物得营养需要配制不同得培养基,如自型微生物得培养基完全可以(或应该)由简单得无机物质组成。异养微生物得培养基至少需要含有一种有机物质。按微生物得主要类群来说,又有细菌、放线菌、酵母菌和霉菌之分。她们所需要得培养基成分也不同,分别称为牛肉膏蛋白胨培养基,合成培养基,麦芽汁培养基等。营养物质得浓度与配比营养物得浓度:在一般情况下,浓度合适得营养物质才对微生物表现出良好作用,浓度大时对微生物生长起抑制作用,浓度小时不能满足微生物生长得需要。各营养物质之间得浓度比:培养基中各营养物质之间得浓度比直接影响微生物得生长与繁殖和(或)代谢产物得形成与积累,尤其就是碳氮比(C／N)(碳氮比一般指培养基中元素碳与元素氮得比值,有时也指培养基中还原糖与粗蛋白两种成分含量之比)得影响更为明显。例如在微生物得谷氨酸发酵中,培养基得C／N为4:l时,菌体大量繁殖,谷氨酸积累少;当C／N为3:1时,菌体繁殖受到抑制,而谷氨酸大量增加。控制培养基得PH值各类微生物生长得最适pH各不相同,细菌与放线菌生长得pH在7—7、5之间,酵母菌与霉菌生长得pH值在4-5之间。在微生物得生长和代谢过程中,由于营养物质得利用和代谢产物得形成与积累,常会改变培养基得pH值,为了维持培养基pH值得相对恒定,通常采用下列两种方式:内源调节:在培养基里加一些缓冲剂或不溶性得碳酸盐;调节培养基得碳氮比。外源调节:按实际需要加酸或加碱。培养基得种类按培养基得物理状态分类按培养基得功能分类按培养基得组成成分分类培养基得物理状态

液体培养基:液体培养基不含任何凝固剂,她常用于大规模得工业生产以及在实验室进行微生物生理代谢等基本理论得研究工作。半固体培养基:在