T-CITS 580-2025 乳腺癌tsRNA诊疗标志物筛查技术要求

乳腺癌tsRNA诊疗标志物筛查技术要求TechnicalrequirementsfortsRNA中国检验检测学会发布I前言 II引言 12规范性引用文件 13术语和定义 14技术要求 14.1样本采集与处理 14.2tsRNA提取与检测 24.3结果判定与解释 25质量控制 35.1内部质量控制 35.2外部质量控制 3附录A(资料性)乳腺癌组织中的tsRNA筛选、鉴定和验证图例 4附录B(资料性)乳腺癌细胞系中的tsRNA验证图例 7附录C(资料性)乳腺癌血液中的tsRNA验证图例 8 9参考文献 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由江苏省肿瘤医院和国军标(北京)标准化技术研究院提出。本文件由中国检验检测学会归口。本文件起草单位：江苏省肿瘤医院、国军标(北京)标准化技术研究院、西南医科大学附属医院、重庆大学附属仁济医院、北京列伯实验室技术交流中心、云南省第一人民医院、徐州医科大学、深圳市罗湖医院集团、北京实安科技有限公司、北京医学检验学会、北京中检体外诊断工程技术研究中心、广州医科大学附属肿瘤医院、海南省肿瘤医院、河北医科大学第四医院、黑龙江省医院、唐山市人民医院、新疆医科大学附属肿瘤医院。本文件主要起草人：严枫、刘万阳、王晓明、陆辉、刘靳波、张阳、孙鹭、周雪妍、罗迪贤、李娜、穆红、戴其全、王庆国、闵玲、陈鑫苹、汪治宇、王冬梅、刁岩、郑璇、李世龙、郭文佳。发展，早期诊断和个体化治疗已成为改善乳腺癌预后的关键。tsRNA作为一类新型的非编码RNA,在乳腺癌的发病机制、诊断及治疗应用中展现出了巨大的潜力。目前针对tsRNA作为乳腺癌诊疗标志物的研究方兴未艾，但国内外尚缺乏统一的技术标准来规范其阻碍了tsRNA从基础研究向临床应用的转化。可靠性、准确性和可比性，为提升乳腺癌的诊疗水平提供有力的技术支撑。1本文件规定了乳腺癌tsRNA诊疗标志物筛查的技术要求和质量控制。本文件适用于各级医疗机构利用tsRNA诊疗标志物开展的乳腺癌筛查工作。2规范性引用文件仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。WS/T661静脉血液标本采集指南3术语和定义标志物marker含量或活性可以代表系统、器官、组织、细胞及亚细胞结构功能变化或可能发生变化的生物分子。转运RNA(transferRNA,tRNA)在特定条件下可被精确切割产生一类新型非编码RNA-tRNA衍生诊断效能diagnosticefficacy/diagnosticperforma4.1样本采集与处理4.1.1采集要求4.1.1.1样本采集过程遵循无菌、无创或微创的原则，采集完成后应立即进行处理和保存。4.1.1.2采集的样本(如血液、组织等)应来源明确，符合伦理要求。4.1.2.1.1乳腺癌tsRNA诊断宜选择组织样本。24.1.2.1.2宜优先采集手术切除的乳腺癌组织及其癌旁组织(距离肿瘤边缘3cm之外)。4.1.2.1.3采集的组织样本不宜长时间暴露于空气或高温环境，宜在离体30min内进行检测。4.1.2.1.4应采用以下方式进行组织样本处理：a)使用研钵和杵将组织样本研磨成细粉末状，按照样本量与裂解液(1:5)加入RNA裂解液，充分混匀、裂解组织细胞；b)将裂解产物转移至离心管中，在低温离心机中1000g、离心10min,取上清液用于后续的RNA提取。4.1.2.1.5无法立即送检的组织样本，应根据检测需求进行保存，如转移至-80℃冰箱保存。4.1.2.2.1乳腺癌tsRNA筛查和诊断宜使用静脉血液样本。4.1.2.2.2应按照WS/T661的要求采集静脉血液样本，使用无菌真空采血管，采血量宜为3mL。4.1.2.2.3采集后的血液样本宜在1h内进行处理；如不能及时处理，应保存在4℃冰箱中，保存时4.1.2.2.4应采用以下方式进行血液样本处理：a)静脉血液样本700g、离心10min,将分离的血清转移至新的离心管中，继续采用11300g、离心10min,取上清液进行后续的核酸提取或保存；b)如果需要保存血清样本，加入等体积的RNA保护剂，颠倒混匀后保存在-80℃冰箱备用。4.2tsRNA提取与检测4.2.1.1宜采用商品化试剂盒，按照试剂盒说明书的操作步骤进行提取，包括裂解、结合、洗涤和洗脱等步骤。4.2.1.2试剂应在有效期内，仪器设备应经过校准和验证，并按照说明书进行操作。4.2.1.3应穿戴适当的防护装备处理样本，不应造成实验室污染和人员感染。4.2.1.5通过琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性，应观察到清晰的特征性条带。4.2.2tsRNA检测4.2.2.1应根据实验室条件和检测需求，选择合适的tsRNA检测方法；检测过程中应控制反应条件，4.2.2.2应详细记录检测过程中的数据，包括循环数阈值(cyclethreshold,Ct值)、反应时间、4.2.2.3乳腺癌组织中的tsRNA筛选、鉴定和验证图例见附录A;乳腺癌细胞系中的tsRNA验证图例见附录B;乳腺癌血液中的tsRNA验证图例见附录C。4.3结果判定与解释4.3.1结果判定4.3.1.1tsRNA检测的结果判定见表1。阳性阴性综合考虑患者临床信息及其他相关检测结果进行分析不确定3表1tsRNA检测的结果判定(续)综合考虑患者临床信息及其他相关检测结果进行分析表达情况检测结果条件阳性阴性4.3.1.2tsRNA的诊断效能评价图例见附录D。4.3.2.1应结合患者的临床信息(如年龄、病史、病理类型等)进行结果解读，并给出诊疗建议。4.3.2.2对于已确诊的乳腺癌患者，宜将tsRNA检测结果与之前检测结果进行对比，并结合其他乳腺癌相关标志物的检测结果，进行综合分析和解释。4.3.2.3结果解读应考虑个体差异和疾病复杂性，以及实验过程中的误差和不确定性因素，如样本处4.3.3.1报告应遵守患者隐私，由具有相应资质的专业人员进行审核和签字确认。4.3.3.2报告内容应包括患者信息、检测方法、检测结果、结果解读等信息。5质量控制5.1内部质量控制5.1.1检测前5.1.1.1应制定样本采集流程，包括采集时间、部位、工5.1.1.2样本处理过程应快速、低温进行。样本的储存、运输、分离纯化等步骤，应遵循相应的操作规程。5.1.1.3应建立样本质量评估体系，如RNA完整性5.1.1.4应按照设备说明书的要求，定期对实验设备进行校准。必要5.1.2.1实验方案应经过科学论证，明确实验目的、步骤、预期结果及可能的影响因素。5.1.2.2应选用高质量、经过验证的试剂和耗材。5.1.2.3应制定详细的实验操作手册，包括提取、扩增、检测等，并确认实验的一致性和可重复性。5.1.2.5应详细记录实验过程，包括试剂批次、仪器使用状态、实验条件变化等。5.1.2.6应建立设备维护日志，记录设备的使用情况、故障处理及保养记录。5.1.3.2应对原始数据进行质量检查，如去除低质量数据、异常值处理等。5.1.3.3应建立统一的结果解读标准，不应出现因主观判5.2外部质量控制应参与国家或国际上的乳腺癌tsRNA筛查外部质量评价项目，或与其他实验室进行室间比对。4(资料性)乳腺癌组织中的tsRNA筛选、鉴定和验证图例A.1乳腺癌组织中的tsRNA筛选图例A.1.1乳腺癌组织的tsRNA测序分析(tsRNA信号值的散点图)见图A.1。空空然图A.1tsRNA信号值的散点图A.1.2乳腺癌组织的tsRNA测序分析(基因表达数据的聚类热图)见图A.2。unun图A.2基因表达数据的聚类热图5A.2乳腺癌组织中的关键tsRNA基因的鉴定图例A.2.1不同的tsRNA基因在乳腺癌肿瘤组织的PCR检测见图A.3。12吃0p-regulatedA.2.2三个关键tsRNA基因在不同的乳腺癌组织中的表达见图A.4。(d)条形图显示，与癌旁组织相比，tRF-32-XSOMSL73VL4YK是乳腺癌组织中上调的基因，而tRF-17-79M9PP和tRF-32-Q99P9P9M157SJ是下调的基因；纵坐标表示为肿瘤样本与癌旁样本中表达的倍数变化。图A.4三个tsRNA在16对配对乳腺癌和癌旁组织中的表达水平分析A.3乳腺癌组织中的tsRNA验证图例通过qPCR鉴定乳腺癌患者组织和癌旁组织中tsRNA的表达水平，见图A.5。6扫TunouTumourNATso图A.5乳腺癌组织和癌旁组织中的tsRNA验证7(资料性)乳腺癌细胞系中的tsRNA验证图例B.1tRF-17-79MP9PP在正常乳腺上皮细胞系MCF-10A和乳腺癌细胞系中的表达见MDA-MB-231B.2tRF-32-Q99P9P9NH57SJ在正常乳腺上皮细胞系HBL-100和乳腺癌细胞系中的表达见图B.2。HBL-100MDA-MB-2318(资料性)制制事工件00(n=27)(n=20)(n=38)89(资料性)tsRNA的诊断效能评价图例D.1血清tRF-17-79MP9PP用于区分所有乳腺癌患者与健康对照的受试者工作特征曲线(receiveroperatingcharacteristic,ROC)及诊断效能评估见图D.1。 Youden'sJedes0.388000图D.1血清tRF-17-79MP9PP用于区分所有乳腺癌患者与健康对照的ROC曲线及诊断效能评估D.2血清tRF-17-79MP9PP鉴别诊断不同临床病理状态乳腺癌患者的效能评估见图D.2。RArm-0.5Cuteff1824CuafA址""i”“i”“e —断7mrere作clf””1图D.2血清tRF-17-79MP9PP鉴别诊断不同临床病理状态乳腺癌患者的效能评估注2:血清tRF-17-79MP9PP区分THMI-II期乳腺癌患者与健康对照的Cut-off值为7.826,约登指数为0.343,灵敏度和特异性分别为70.4%和63.9%,曲线下面积AUC为0.681;血清tRF-17-79MP9PP区分THMIII-IV期乳腺癌患者与健康对照的Cut-off值为4.481,约登指数为0.49,灵敏度和特异性分别为81.5%和67.5%,曲约登指数为0.351,灵敏度和特异性分别为66.7%和68.4%,曲线下面积AUC为0.694;血清tRF-17-79MP9PP区分淋巴结转移乳腺癌患者与健康对照的Cut-off值为4.734,约登指数为0.4图D.2血清tRF-17-79MP9PP鉴别诊断不同临床病理状态乳腺癌患者的效能评估(续)"M"6aCalf郴整.*郴整.*1Nuebdru注2:血清tRF-32-Q99P9P9MH57SJ区分乳腺癌与健康对照的Cut-off值为5.433,约登指数为0.527,灵敏度和特患者与健康对照的Cut-off值为5.433,约登指数为0.369,灵敏度和特异性分别为85.0%和51.9%,曲线下约登指数为0.659,灵敏度和特异性分别为90.0%和75.9%,曲线下面积AUC为0.817;血清灵敏度和特异性分别为89.0%和70.6%,曲线下面积AUC为0.785;血清tRF-32-Q99F