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文档简介
ICS67.120.30
CCSB5121
辽宁省地方标准
DB21/T3804—2023
骨片法海参种类鉴定规范
2023-08-30发布2023-09-30实施
辽宁省市场监督管理局发布
DB21/T3804—2023
前言
本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定
起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由辽宁省农业农村厅提出并归口。
本文件起草单位:大连海洋大学。
本文件主要起草人:丁君,常亚青,宋坚,王荦,张伟杰,赵冲,尹东红。
本文件发布实施后,任何单位和个人如有问题和意见建议,均可以通过来电和来函等方式进行反馈,
我们将及时答复并认真处理,根据实际情况依法进行评估及复审。
归口管理部门通讯地址:辽宁省农业农村厅(沈阳市和平区太原北街2号),联系电话
文件起草单位通讯地址:大连海洋大学(辽宁省大连市黑石礁街52号),联系电话
I
DB21/T3804—2023
骨片法海参种类鉴定规范
1范围
本文件规定了骨片法鉴定不同种类海参的术语和定义、判定原理、试剂、仪器和工具、样品准备、
样品固定、骨片制备、观察和拍照、观察判定。
本文件适用于活海参、盐渍海参、干海参、即食海参和食品海参种类的鉴定。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,
仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本
文件。
GB31602食品安全国家标准干海参
SC/T3215盐渍海参
SC/T3308即食海参
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
海参骨片seacucumberossicles
骨片是位于海参真皮表层的内骨骼,主要成分是碳酸钙,是随海参胚胎发育而逐渐完善稳定的重要
特征,形状、大小随种类不同而差别很大,是进行海参分类及快速鉴别的重要依据。
注:本部分内容主要参考廖玉麟《中国动物志.棘皮动物门.海参纲》,《世界重要经济海参种类》)。
桌形体table
海参骨片的一种。典型的桌形体具穿孔的底盘,底盘边缘平滑或带突起,中央有一塔部,多由4个
立柱和1个横梁构成,顶部具有齿。发育不全的桌形体只剩穿孔的底盘。
注:本部分内容主要参考廖玉麟《中国动物志.棘皮动物门.海参纲》,《世界重要经济海参种类》)。
4判定原理
同种海参具有不同类型的骨片,特别是桌形体结构,具有种的特异性,可用于鉴定海参种类。依据
不同种海参体壁内桌形体骨片形态的差异,能够准确、快速鉴定不同种类海参,且不受加工方式限制。
5试剂
1
DB21/T3804—2023
无水乙醇、次氯酸钠(NaClO)标准溶液(0.1mol/L)、戊二醛溶液、十二烷基苯磺酸钠(C18H29NaO3S)、
蒸馏水。
6仪器和工具
扫描电子显微镜、光学显微镜、医用手术刀、灭菌吸水纸、烧杯、吸管、镊子、滤纸、载玻片、盖
玻片、胶膜等。
7样品准备
活海参
对活海参进行清洗,清除表面泥沙等杂质。从近尾端剖开海参腹部,清除海参体腔内的肠、呼吸树、
生殖腺等内脏以及杂质,剩余部分为刺参体壁组织。
盐渍海参
盐渍海参的制备符合SC/T3215(所有部分)中的规定。沿着海参的腹部开口处将海参上下剪开,
清除泥沙等杂质。使用蒸馏水冲洗3次,用吸水纸将海参表面的水吸干。
干海参
干海参的制备符合GB31602(所有部分)中的规定。将海参表面清洗干净,放入烧杯中,倒入蒸馏
水,水量约为海参体积的50倍,浸泡24h。沿着海参的腹部开口处将海参上下剪开,清除泥沙等杂质。
将处理好的海参放入装有 蒸馏 水的烧杯 中 ,水量浸没参体,大火煮沸,调至小火保持沸腾30min,自
然冷却至室温。
即食海参
即食海参的制备符合SC/T3308(所有部分)中的规定。蒸馏水冲洗3次,用吸水纸将海参表面的
水吸干。
食品海参
用95%的十二烷基苯磺酸钠(C18H29NaO3S)(或洗涤剂)清洗食品海参表面的油渍,清水冲洗3次,
用吸水纸 将 海 参表面的水吸干。
8样品固定
将上述制备好的海参体壁组织,置于无水乙醇中固定24h,无水乙醇需没过海参样品,每种海参固
定三只。每个样品配有单独的烧杯和吸管。
9骨片制备
样品清洗
切取背部体壁组织样本约0.5cm3,用蒸馏水冲洗干净,吸水纸吸干水分。
2
DB21/T3804—2023
样品处理
将样品放置于5mL离心管中,向烧杯中滴加2mL~3mL次氯酸钠(NaClO)标准溶液,静置10min~
30min,根据体壁溶 解状况,样品析出肉眼可见 的白色 颗粒。
骨片悬液制备
用镊子取出剩余的体壁组织,加入蒸馏水,并用吸管反复冲洗。待白色颗粒沉淀后,用吸管吸去上
层溶液,再滴加蒸馏水,重复漂洗3次。
10观察和拍照
光学显微镜观察
吸管吸取骨片悬液1滴~2滴置于载玻片上,用盖玻片将其固定,显微镜下观察并拍照。
扫描电子显微镜观察
将9.3处理后的样品用无水乙醇漂洗3次~5次,吸取骨片悬液,均匀滴加在载玻片上,65℃
烘干2m in, 喷金后在扫描电子显微镜下观 察 并 拍照 。
11观察判定
判定规则
根据自制的光学显微镜照片和扫描电镜照片,并根据相关资料,总结出海参桌形体的形态特征。
海参骨片形态特征
11.2.1仿刺参桌形体骨片形态特征
仿刺参(Apostichopusjaponicus)桌形体骨片由底盘和立柱组成,底盘近似为圆形,具有穿孔,
底盘边缘具突起,中央有1个塔部。幼小刺参桌形体塔部高,有2个~4个立柱和1个~3个横梁,
底盘较大,边缘平滑,桌形 体 底盘内部含有42个±7个小孔,底 盘中央 存在4个 大 孔 , 塔 部长度为
86.67μm±12.47μm;成年刺参桌形体退化,塔部变低或消失,变成不规则的穿孔板,内部小孔数目
减少到7个±2个。仿刺参的骨片形态图见图1。
11.2.2梅花参骨片形态特征
梅花参(Thelenotaananas)的体壁只有杆状体,没有桌形体。梅花参有4种类型的杆状体。Ⅰ
型杆状体为繁简不同的分叉杆状体,骨长约120µm,枝干纤细较直,主、副枝干 上 具小尖刺,有的分枝
2次,有的3次~4次;Ⅱ型杆状体为繁简 不同 的分叉杆状体,骨长约85µm,枝干弯曲不规则,枝干
上 小尖刺较 多 , 有的 分枝2次,有3次~4次;Ⅲ型杆状体形状像英文 字母 “X”,骨长约45µm,枝
干上具多个尖刺,有的主干 较短,长 约 6µ m, 有的主干较长,长达26µm;Ⅳ型杆状体为棒状 ,长约110
µm,直径10µm左右,骨干上具多个小尖刺。
11.2.3花刺参桌形体骨片形态特征
花刺参(Stichopusherrmanni)桌形体底盘近圆形,面积有大有小,小的直径在40µm左右,大
的直径在65µm左右,周缘呈波状,中央有4个大孔,周缘有小孔12个~18个。顶部 有两种类型的
3
DB21/T3804—2023
结构:一种中央有1个大孔,周缘具小齿16个左右,成4簇排列;另一种中央有1个大孔,周缘具小
齿15个,成5簇排 列 。顶部与底盘之间有4个 立柱支撑,立柱之间无横梁相连。花 刺 参的骨片形态图见
图 2) 。
11.2.4糙刺参桌形体骨片形态特征
糙刺参(Stichopushorrens)桌形体有2种,疣足内有巨大的I型桌形体,底盘巨大,呈圆形,周
缘光滑,直径约80µm~120µm,中央有4个 大 孔,周缘有许多大小不一的穿孔,塔部高,有4根立柱,
1根~2根横梁, 末 端 愈 合呈 尖状。II型 桌 形体底盘呈圆形,周缘光滑,直径约30µm~50µm,中央
有1 个 大 孔,周缘有6个~12个小孔, 塔部适度高,有4根立柱,1根横梁,顶部 呈马耳 他 十 字形,中
央有 1个穿孔,具小 齿 24 个 。 糙海参的骨片形态图见图3。
11.2.5玉足海参桌形体骨片形态特征
玉足海参(Holothurialeucospilota)桌形体底盘近圆形,直径在55µm左右,周缘平滑或呈波
状,中央1个大孔,周缘12个左右的小孔。顶部有两种类型的结构:一种 中 央 有1个大孔,周缘无小
孔,具齿 1 2个左右;另一 种 中央有1个大孔,周缘6个左右小孔,具齿14个左右。 桌形体顶部与底盘
有4个立柱 支 撑,立柱之间有1个横梁相连。玉足海 参的骨片形态图见图 4 。
11.2.6虎纹海参桌形体骨片形态特征
虎纹海参(Holothuriapervicax)桌形体底面近圆形,直径约30µm~40µm,周缘光滑,中央有
3个或4个大孔,周缘有3个~6个小孔。桌形体塔部退化,仅有3 个 或 4个 极 低的立柱,其中3根立
柱 末端 有 横梁相连,一根 立 柱 独 立 无横梁。虎纹海参的骨片形态图 见 图5 。
图1仿刺参(Apostichopusjaponicus)桌形体骨片扫描电镜图和光学显微镜图
注:a仿刺参骨片扫描电镜图;b,c:仿刺参骨片光学显微镜图
4
DB21/T3804—2023
图2花刺参(Stichopusherrmanni)图3糙刺参(Stichopushorrens)
桌形体骨片扫描电镜图桌形体骨片扫描电镜图
图4玉足海参(Holothurialeucospilota)图5虎纹海参(Holothuriapervicax)
桌形体骨片扫描电镜图桌形体骨片扫描电镜图
注:图2~图4:a,b,c,d为不同角度骨片扫描电镜图
表1海参骨片形态特征
海参桌形体直径穿孔桌形体底盘立柱与横梁
2个~4个立柱
仿刺参具穿孔近似圆形,边缘突起
1个 ~ 3个横梁
梅花参只有杆状体,无桌形体
中央有4个大孔,周缘小近圆形,面积有大有4个立柱
花刺参40μm~65μm
孔12个~18个小无横梁
I型:中央有4个大孔,周I型:底盘巨大,圆
I型:4个立柱,1个 ~ 2
I型:80μm~120μm缘穿孔大小不一形
糙刺参个横梁
II型:30μm~50μmII型:中央1个大孔,周II型:底盘圆形,周
II型:4个立柱,1个横梁
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