免疫学教学内容方案制定

免疫学教学内容方案制定一、免疫学教学内容方案制定概述

免疫学作为现代生物学的重要分支，对于医学、生物学及相关交叉学科的人才培养具有关键作用。本方案旨在为免疫学教学提供系统化、科学化的内容框架，确保教学内容的准确性、前沿性和实用性。方案遵循循序渐进、理论与实践相结合的原则，注重培养学生的免疫学基本知识、实验技能和科研思维。

二、免疫学教学内容方案设计原则

（一）科学性与准确性

教学内容应基于免疫学领域的最新研究成果，确保知识的科学性和准确性。教师需定期更新教学内容，引入最新的研究进展和临床应用。

（二）系统性与逻辑性

教学内容应涵盖免疫学的基本概念、原理、机制及应用，形成完整的知识体系。各部分内容之间应具有逻辑关联，便于学生理解和掌握。

（三）实用性与前瞻性

教学内容应注重实际应用，结合临床案例和实验操作，提高学生的实践能力。同时，关注免疫学领域的前沿动态，培养学生的创新思维和科研能力。

（四）针对性与层次性

针对不同层次学生的学习需求，制定差异化的教学内容。初级阶段注重基础知识的传授，高级阶段则强调深入研究和技术应用。

三、免疫学教学内容方案具体内容

（一）免疫学基础理论教学

1.免疫学发展简史

(1)免疫学的起源与发展

(2)免疫学的重要里程碑

(3)免疫学与其他学科的交叉融合

2.免疫系统组成与功能

(1)免疫器官与组织

(2)免疫细胞及其分类

(3)免疫分子及其作用机制

3.抗原与免疫应答

(1)抗原的概念与分类

(2)抗原识别与处理

(3)免疫应答的基本过程

（二）免疫学实验技术教学

1.实验室基本操作

(1)实验室安全规范

(2)常用实验仪器使用

(3)实验样品制备与处理

2.免疫细胞功能检测

(1)免疫细胞分离与培养

(2)细胞功能检测方法

(3)细胞凋亡与坏死检测

3.免疫分子检测技术

(1)免疫印迹技术

(2)免疫荧光技术

(3)流式细胞术

（三）免疫学应用教学

1.临床免疫学

(1)免疫相关疾病概述

(2)免疫诊断技术

(3)免疫治疗策略

2.生物技术中的免疫学应用

(1)单克隆抗体技术

(2)免疫佐剂与疫苗开发

(3)免疫学在基因工程中的应用

3.免疫学前沿研究动态

(1)免疫调控机制研究

(2)免疫学与疾病发生发展关系

(3)免疫学与其他学科的交叉研究

四、免疫学教学内容方案实施建议

（一）教学资源准备

1.教材与参考书选择：选用权威、经典的免疫学教材，结合最新研究成果编写补充材料。

2.实验指导书编写：制定详细的实验操作步骤和注意事项，确保实验教学质量。

3.多媒体资源制作：开发免疫学教学视频、动画等多媒体资源，提高教学效果。

（二）教学方法改革

1.互动式教学：采用问题导向、案例教学等方法，提高学生的参与度和学习兴趣。

2.翻转课堂：鼓励学生课前预习，课堂上进行深入讨论和互动，培养学生的自主学习能力。

3.线上线下混合式教学：利用网络平台开展线上教学，结合线下实验和讨论，提高教学效率。

（三）教学评价体系完善

1.过程性评价：通过课堂表现、实验操作、作业完成情况等进行综合评价。

2.终结性评价：采用考试、论文等形式检验学生的学习成果。

3.反馈与改进：根据评价结果及时调整教学内容和方法，提高教学质量。

（四）师资队伍建设

1.教师培训与进修：定期组织免疫学教师参加专业培训和学术交流，提高教学水平。

2.教师团队建设：组建跨学科、跨专业的免疫学教学团队，发挥团队协作优势。

3.教师激励机制：建立教师激励机制，鼓励教师积极开展教学改革和科研工作。

**（接前文）**

三、免疫学教学内容方案具体内容

（一）免疫学基础理论教学

1.免疫学发展简史

(1)免疫学的起源与发展

免疫学并非独立产生的学科，其思想萌芽可追溯至古代。例如，中国古代医学文献中记载的“瘥（chài）后易感”现象，描述了感染疾病后获得的再次感染抵抗力。近代免疫学的发展始于18世纪末到19世纪初，以EdwardJenner的牛痘接种（1796年）为标志，开启了免疫预防的新纪元。19世纪末，LouisPasteur等人通过研究炭疽病、狂犬病等，进一步证实了疫苗的原理，并提出了“病原体”学说。20世纪是免疫学飞速发展的时期，特别是Burnet的克隆选择学说（1957年）和Medawar的免疫衰老理论（1963年），为现代免疫学奠定了理论基础。随后，对主要组织相容性复合体（MHC）、免疫球蛋白结构、T细胞和B细胞的分化和功能的深入研究，极大地推动了学科进步。进入21世纪，随着基因组学、蛋白质组学等技术的发展，免疫学在理解复杂疾病（如自身免疫病、肿瘤免疫）的发病机制、开发新型免疫治疗策略（如免疫检查点抑制剂、CAR-T细胞疗法）等方面取得了突破性进展。

(2)免疫学的重要里程碑

列举免疫学发展过程中的关键事件和概念，如：

***17世纪：**AntonievanLeeuwenhoek首次观察到血液中的“微动体”（即白细胞）。

***1796年：**EdwardJenner发明牛痘接种，开创了免疫预防的先河。

***1880-1885年：**LouisPasteur研制狂犬病疫苗，证实了疫苗原理。

***1890年：**RobertKoch发现结核分枝杆菌，并证明其为结核病的病原体。

***1900-1901年：**PaulEhrlich提出“侧翼链学说”，解释抗体与抗原结合的机制。

***1901年：**PaulEhrlich因血清疗法和“侧翼链学说”获诺贝尔生理学或医学奖。

***1910年：**PaulEhrlich提出“化学疗法”概念。

***1924年：**JulesBordet发现补体系统，并获诺贝尔生理学或医学奖。

***1957年：**FrankMacfarlaneBurnet提出克隆选择学说，解释体液免疫和细胞免疫的机制。

***1963年：**PeterMedawar提出免疫衰老理论，获诺贝尔生理学或医学奖。

***1960年代：**GeorgeSnell,JeanDausset,BillKnowles等人阐明MHC（HLA）的作用。

***1970年代：**GeorgeKohler和CésarMilstein发明杂交瘤技术，可制备单克隆抗体。

***1974年：**NielsKajJerne提出免疫网络理论。

***1976年：**RalphSteinman发现树突状细胞，获2011年诺贝尔生理学或医学奖。

***1977年：**Mary-ClaireKing发现HIV的逆转录酶。

***1980年代：**大规模开展T细胞亚群、B细胞亚群及其功能的深入研究，以及细胞因子学说的建立。

***1990年代：**免疫基因组学、蛋白质组学兴起，基因组免疫学（如DNA疫苗）发展。

***2000年代至今：**肿瘤免疫治疗（PD-1/PD-L1抑制剂、CAR-T细胞）、自身免疫病研究、过敏原研究、免疫衰老等成为热点。

(3)免疫学与其他学科的交叉融合

免疫学与众多学科存在紧密联系，相互促进发展：

***生物学：**与细胞生物学（细胞结构、功能）、遗传学（MHC遗传多态性、免疫遗传学）、分子生物学（基因表达调控、信号转导）、生物化学（免疫分子结构、功能）等深度交叉。

***医学：**是基础医学与临床医学的桥梁，广泛应用于传染病学（免疫预防、诊断）、肿瘤学（免疫监视、免疫治疗）、免疫学疾病学（自身免疫病、过敏病）、移植免疫学等。

***生物技术：**依托生物技术平台（基因工程、细胞工程、蛋白质工程）发展出单克隆抗体、疫苗、免疫诊断试剂、免疫治疗药物等。

***药学：**新型免疫抑制剂、免疫增强剂、靶向免疫治疗药物的开发是现代药理学的重要方向。

***环境科学：**研究环境因素（如微生物组、污染物）对免疫系统的影响。

2.免疫系统组成与功能

(1)免疫器官与组织

免疫系统由中枢免疫器官、外周免疫器官以及弥散分布的免疫组织构成。

***中枢免疫器官：**胸腺和骨髓。是免疫细胞（T细胞和B细胞）发生、分化和成熟的场所。

***胸腺：**位于胸腔内，是T细胞发育成熟的场所。结构分为皮质、髓质。T细胞前体细胞从骨髓迁移至胸腺，经历阳性选择（确认能识别MHC）和阴性选择（剔除可能攻击自身成分的细胞），最终成为成熟的T细胞并输出到外周。

***骨髓：**是B细胞发育成熟的场所，也是所有免疫细胞的发源地。结构包括红髓和黄髓。B细胞前体细胞在骨髓中经历重链和轻链基因重排，成功组装免疫球蛋白受体后，成为成熟的B细胞并输出到外周。

***外周免疫器官：**脾脏、淋巴结、黏膜相关淋巴组织（MALT，如扁桃体、派尔集合淋巴结、肠道相关淋巴组织GALT、支气管相关淋巴组织BALT）等。是成熟免疫细胞聚集、识别抗原、发生免疫应答的场所。

***脾脏：**是最大的外周免疫器官，主要清除血液中的抗原异物。结构包括红髓（滤血功能）、白髓（淋巴细胞聚集区，包括脾小结和髓索）。血液流经脾窦时，抗原被吞噬细胞捕获，提呈给淋巴细胞，引发免疫应答。

***淋巴结：**散布于全身，是过滤淋巴液和抗原的重要场所。结构包括皮质（B细胞区、T细胞区）、髓质（髓索、髓窦）。淋巴液流经淋巴结时，抗原被捕获，提呈给淋巴细胞，引发免疫应答。淋巴结内的高内皮微静脉（HEV）是淋巴细胞从血液迁移到淋巴组织的通道。

***黏膜相关淋巴组织（MALT）：**位于消化道、呼吸道、泌尿生殖道等黏膜下，是抵御病原体入侵的第一道防线。结构多样，如扁桃体是团块状的淋巴组织，派尔集合淋巴结位于回肠绒毛间，GALT和BALT则广泛分布于肠道和呼吸道黏膜下。

***免疫组织/弥散淋巴组织：**如黏膜下层淋巴组织（MLN）、皮下淋巴组织（SLN）等，参与局部免疫反应。

***派尔集合淋巴结（PP）：**位于小肠绒毛间，是GALT的重要组成部分，在诱导口服耐受中起关键作用。

***黏膜相关淋巴组织（MALT）：**包括扁桃体、派尔集合淋巴结、GALT（肠道）、BALT（呼吸道）等。

(2)免疫细胞及其分类

免疫细胞是执行免疫功能的基本单位，种类繁多，主要分为淋巴细胞、吞噬细胞、树突状细胞、自然杀伤细胞以及其他免疫细胞等。

***淋巴细胞（Lymphocytes）：**是免疫应答的核心细胞，主要包括：

***T淋巴细胞（Tcells）：**来源于骨髓，在胸腺成熟。根据表面标志和功能分为：

***辅助性T细胞（CD4+Tcells）：**发育于胸腺，表达CD4分子。识别由APC（如DC）提呈的、与MHCII类分子结合的抗原肽。在免疫应答中起协调、辅助作用，可分化为Th1、Th2、Th17、Tfh等亚型。

***细胞毒性T细胞（CD8+Tcells，也称杀伤性T细胞）：**发育于胸腺，表达CD8分子。识别由APC提呈的、与MHCI类分子结合的抗原肽。主要功能是杀伤被病毒感染或肿瘤细胞。

***调节性T细胞（Tregs）：**发育于胸腺（thymicTregs）或在外周被诱导产生（peripherallyinducedTregs）。表达CD4+CD25+FoxP3+等标志。主要功能是抑制免疫应答，维持免疫耐受，防止自身免疫病发生。

***记忆性T细胞（MemoryTcells）：**经历抗原刺激后分化而来，分为中央记忆T细胞（TCM）和外周记忆T细胞（TEM）。TCM迁移至次级淋巴器官，保持长期存活，快速反应；TEM主要分布于外周组织，参与快速效应功能。

***B淋巴细胞（Bcells）：**来源于骨髓，在骨髓成熟。根据表面标志和功能分为：

***未成熟B细胞：**正在发育和经历免疫球蛋白重链和轻链基因重排的B细胞。

***成熟B细胞：**表达完整的免疫球蛋白（表面IgM和IgD），具有识别抗原和迁移能力。在静息状态下，大部分存在于外周血和淋巴结等处。

***浆细胞（Plasmacells，也称效应B细胞）：**成熟B细胞接受抗原刺激并活化后分化而来。主要功能是大量合成和分泌特异性抗体（主要是IgM和IgG，也分泌IgA、IgE）。不具备细胞迁移能力，常聚集在骨髓等处。

***记忆性B细胞（MemoryBcells）：**成熟B细胞活化后分化而来。寿命长，能快速被再次抗原激活，分化为浆细胞，产生大量高亲和力抗体，是产生免疫记忆的关键。

***吞噬细胞（Phagocytes）：**具有强大的吞噬能力，是固有免疫的重要组成部分。主要包括：

***巨噬细胞（Macrophages）：**来源于骨髓的单核细胞进入组织后分化而来。广泛分布于全身组织（如结缔组织、淋巴结、脾脏、骨髓），具有吞噬、处理和呈递抗原、分泌细胞因子、参与炎症反应等多种功能。巨噬细胞具有表型可塑性，可在不同微环境中分化为经典激活（M1，促炎）、替代激活（M2，抗炎、组织修复）等不同状态。

***中性粒细胞（Neutrophils）：**来源于骨髓，是血液中最丰富的白细胞。寿命短（约几小时到几天）。是抵御细菌和真菌感染的第一线防线，通过吞噬作用清除病原体。也参与炎症反应，但吞噬能力相对较弱。

***树突状细胞（Dendriticcells,DCs）：**是目前已知最强的抗原提呈细胞（APC）。来源于骨髓的造血干细胞，在骨髓、淋巴器官和外周组织中存在不同类型的DC（如常规DCcDC1/cDC2，不常规DCpDC）。主要功能是捕获、处理和提呈抗原给初始T细胞，激活T细胞，启动适应性免疫应答。pDC主要负责产生I型干扰素，抗病毒感染。

***自然杀伤细胞（NaturalKillercells,NKcells）：**来源于骨髓，是一群无需预先致敏即可杀伤肿瘤细胞和被病毒感染细胞的淋巴细胞。表达多种特异性表面标志（如NKp46,NKG2D,KIR）。主要通过识别应激相关分子模式（如MICA/MICB）或直接杀伤缺乏MHCI类分子表达的靶细胞来发挥功能。NK细胞也参与免疫调节，如分泌细胞因子。

***其他免疫细胞：**包括嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、肥大细胞、红细胞（携带补体成分C3b）、血小板（含有TGF-β1等）等，它们也参与免疫反应或免疫调节。

(3)免疫分子及其作用机制

免疫分子是免疫细胞产生和分泌的，参与免疫应答的各种生物活性分子，主要包括抗体、补体系统、细胞因子、免疫受体等。

***抗体（Antibodies,Immunoglobulins,Ig）：**B细胞分化为浆细胞后产生的特异性蛋白质，是体液免疫的核心效应分子。

***结构：**由两条重链（H链）和两条轻链（L链）通过二硫键连接而成的“Y”字形分子。包括可变区（V区，决定抗原结合特异性）和恒定区（C区，决定抗体功能）。恒定区可进一步分为CH1,CH2,CH3等结构域。铰链区位于两个恒定区之间，较灵活，便于抗体构象变化。

***分类：**根据重链恒定区不同分为IgM,IgG,IgA,IgE,IgD五种。根据铰链区是否有J链和分泌片（SP）进一步分类（如分泌型IgA）。

***功能：**

***中和作用：**结合病毒、毒素等，阻止其与宿主细胞结合。

***调理作用：**通过Fc段与吞噬细胞、补体等结合，促进对病原体或凋亡细胞的吞噬（Opsonization）。

***激活补体：**IgM和IgG（特别是IgG1,IgG2,IgG3）可激活经典途径补体。

***抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用（ADCC）：**IgG结合到被病毒感染或肿瘤细胞的表面，NK细胞通过识别抗体的Fc段来杀伤靶细胞。

***介导过敏反应和免疫病理损伤：**IgE介导Ⅰ型过敏反应；某些自身抗体可引起免疫复合物病或直接损伤组织。

***抗体结构域：**Fab段（抗原结合位点，由VH和VL构成）和Fc段（执行功能，由CH和CL构成）。

***补体系统（Complementsystem）：**是一组存在于血液和组织液中的丝状蛋白，在激活后可发生级联放大反应，产生多种生物活性物质，参与免疫应答和炎症反应。

***组成：**包括30多种血清蛋白和蛋白水解酶，分为补体经典途径（Classicalpathway）、凝集素途径（Lectinpathway）、替代途径（Alternativepathway）三条激活途径的共同末端通路（末端通路）。

***激活途径：**

***经典途径：**由C1q识别并结合抗原抗体复合物（IgM或IgG的Fc段）而启动，依次激活C2,C4,C3，形成C3转化酶（C4b2a,C3bBb），最终激活C5,C6,C7,C8,C9，形成膜攻击复合物（MAC），破坏靶细胞膜。

***凝集素途径：**由Mannose-BindingLectin（MBL）或其他凝集素识别病原体表面的N-乙酰氨基葡萄糖（GlcNAc）等多糖结构而启动，依次激活MASP-1,MASP-2，进而激活C3，后续过程与经典途径相似。

***替代途径：**在缺乏调理素（如正常血清）的情况下，C3b可自发水解成C3bBb，形成替代途径C3转化酶，该途径可正反馈放大，无需抗体参与。

***功能：**

***裂解靶细胞：**MAC破坏细胞膜，导致细胞溶解。

***调理作用：**C3b、C4b等可结合到病原体表面，促进吞噬细胞吞噬。

***炎症介质：**C3a,C5a是强效的趋化因子，吸引中性粒细胞等炎症细胞到达感染部位；C5a还是血管通透性增加因子。

***激活B细胞：**C3d是B细胞活化所需的重要第二信号。

***细胞因子（Cytokines）：**是由免疫细胞（如巨噬细胞、T细胞、B细胞、DC等）以及其他细胞（如内皮细胞、成纤维细胞）产生的小分子蛋白质，在免疫应答中起信号传导、调节细胞功能、招募细胞等多种作用。

***分类：**根据结构和功能可分为多种类型，如白细胞介素（ILs）、干扰素（IFNs）、肿瘤坏死因子（TNFs）、集落刺激因子（CSFs）、趋化因子（Chemokines）等。

***功能：**

***免疫调节：**促进或抑制T细胞、B细胞、NK细胞等多种免疫细胞的分化和功能。

***炎症反应：**吸引炎症细胞，增加血管通透性，调节免疫细胞迁移。

***抗病毒/抗菌：**IFN-α,IFN-β具有抗病毒活性；TNF-α具有广谱抗菌、抗肿瘤作用。

***造血支持：**CSFs促进造血干/祖细胞的增殖和分化。

***免疫受体（Immunoreceptors）：**是表达于免疫细胞表面的、能与特定配体（抗原、细胞因子、其他分子等）结合的受体分子，是免疫细胞识别信号、执行功能的分子基础。

***T细胞受体（TCR）：**表达于T细胞表面，是T细胞识别MHC-抗原肽复合物的特异性受体。

***B细胞受体（BCR）：**即膜结合型IgM/IgD，是B细胞识别抗原的受体。

***主要组织相容性复合体（MHC）分子：**MHCI类和II类分子是提呈抗原给T细胞的核心分子，本身也是重要的免疫受体。

***可溶性免疫受体：**如抗体、补体成分、细胞因子受体等。

3.抗原与免疫应答

(1)抗原的概念与分类

***抗原（Antigen）：**指能够诱导免疫系统发生免疫应答（产生抗体或致敏淋巴细胞），并能与相应免疫应答产物（抗体或致敏淋巴细胞）在体内外结合发生反应的物质。

***基本特性：**具有免疫原性（Inductiveproperty，能诱导免疫应答）和反应性（Reactiveproperty，能与免疫应答产物结合）。

***分类：**

***按来源分类：**

***天然抗原：**机体在自然界中接触到的抗原，如病原微生物及其产物（细菌、病毒、真菌、寄生虫）、异种动物血清、植物蛋白、同种异体移植物（细胞、组织、器官）等。

***人工抗原：**人工制备的抗原，如疫苗、类毒素、免疫佐剂与抗原的复合物等。

***按免疫原性分类：**

***完全抗原（Completeantigen）：**具有免疫原性和反应性，通常是大分子蛋白质或多糖，如大多数蛋白质类病原体、类毒素、疫苗等。

***不完全抗原（Incompleteantigen）：**具有反应性，但通常缺乏免疫原性或免疫原性很弱，如某些小分子多肽、多糖、药物半抗原（必须与大分子载体结合才能诱导免疫应答），能与抗体结合形成沉淀或补体结合，但不一定能诱导B细胞产生抗体。

***按与机体关系分类：**

***异种抗原：**来自不同物种的抗原，如动物血清、植物蛋白、外源病原体抗原。

***同种异体抗原：**来自同种但遗传背景不同的个体，如供者与受者之间的MHC分子差异，同种异体细胞移植。

***自身抗原（Autoantigen）：**正常情况下机体不表达或表达水平很低，但在某些因素（如感染、衰老、免疫耐受破坏）作用下，可被免疫系统识别为异物而引发自身免疫病的抗原，如DNA、甲状腺球蛋白、关节滑膜成分等。

***按抗原性质分类：**

***胸腺依赖性抗原（Th-dependentantigen）：**通常是大分子蛋白质，需要T细胞的辅助才能诱导较强的B细胞应答，产生类别转换抗体和免疫记忆。大多数蛋白质抗原属于此类。

***胸腺非依赖性抗原（Th-independentantigen）：**通常是多糖（如细菌荚膜多糖）或脂质，无需T细胞辅助即可直接刺激B细胞产生以IgM为主的抗体，通常不能诱导免疫记忆或免疫记忆较弱。

(2)抗原识别与处理

***B细胞表位（Bcellepitope,Bepi）：**抗原上能够被B细胞受体（BCR）特异性结合的表位。通常是线性表位（连续氨基酸序列）或构象表位（氨基酸序列折叠后形成）。

***T细胞表位（Tcellepitope）：**抗原被抗原提呈细胞（APC）处理呈递后，能够被T细胞受体（TCR）特异性结合的表位。

***CD4+T细胞表位：**主要识别由MHCII类分子提呈的、来源于外源性抗原（如细菌、病毒、疫苗）的抗原肽。通常为8-15个氨基酸的线性表位，对锚定残基（P1,P4,P7等位置）和电荷有特定要求。

***CD8+T细胞表位：**主要识别由MHCI类分子提呈的、来源于内源性抗原（如病毒感染细胞、肿瘤细胞内的抗原）的抗原肽。通常为8-10个氨基酸的线性表位，对锚定残基有较严格的要求。

***抗原处理途径：**

***外源性抗原处理途径：**指由APC（主要是巨噬细胞、DC）摄取、处理外源性抗原（如通过吞噬、受体介导的内吞），并在细胞内降解为抗原肽，随后与MHCII类分子结合，提呈给CD4+T细胞的过程。主要在淋巴组织中的APC中进行。

***内源性抗原处理途径：**指细胞内合成的抗原（如病毒蛋白、肿瘤抗原）被降解为抗原肽，并与MHCI类分子结合，提呈给CD8+T细胞的过程。主要在所有有核细胞内进行。

(3)免疫应答的基本过程

免疫应答是机体免疫系统识别抗原、清除抗原、维持自身稳定的过程，主要包括抗原识别、活化、效应和记忆四个阶段。

***抗原识别阶段：**抗原被免疫细胞表面的特异性受体（BCR,TCR）或模式识别受体（PRR）识别。B细胞通过BCR识别游离抗原或与APC结合的抗原；T细胞通过TCR识别由MHC分子提呈的抗原肽。此阶段是免疫应答的起始和特异性基础。

***活化阶段：**抗原识别后，免疫细胞需要接受第二信号（Costimulation）才能被完全活化。

***B细胞活化：**通常需要两个信号。第一信号是BCR与抗原的结合；第二信号由辅助性T细胞（Th细胞）表面的CD40L与B细胞表面的CD40结合提供。此外，细胞因子（如IL-4,IL-5,IL-6）等也提供重要的调节信号。活化的B细胞增殖、分化为浆细胞（产生抗体）和记忆B细胞。

***T细胞活化：**通常需要三个信号。第一信号是TCR与MHC-抗原肽复合物的结合；第二信号是APC表面的共刺激分子（如B7家族成员CD80/CD86）与T细胞表面的共刺激分子（如CD28）结合；第三信号是细胞因子（如IL-1,IL-6,IL-12等）提供的信号。活化的CD4+T细胞分化为Th1,Th2,Treg等亚型，发挥不同的免疫调节功能；活化的CD8+T细胞分化为细胞毒性T细胞（CTL），增殖并发挥杀伤靶细胞功能。

***效应阶段：**活化的免疫细胞分化为效应细胞，执行免疫功能。

***体液免疫：**活化的B细胞分化为浆细胞，大量分泌特异性抗体，通过中和、调理、激活补体、ADCC等机制清除抗原。

***细胞免疫：**活化的CD8+CTL杀伤被感染的靶细胞或肿瘤细胞；活化的CD4+Th细胞（如Th1）辅助CTL和巨噬细胞功能，或直接参与炎症反应。

***记忆阶段：**免疫应答结束后，部分活化的免疫细胞分化为长期存活的记忆细胞（记忆B细胞和记忆T细胞）。当机体再次接触相同抗原时，记忆细胞能更快、更强地被激活，产生更快的免疫应答，并提供长期的免疫保护。这是免疫记忆的基础。

（二）免疫学实验技术教学

1.实验室基本操作

(1)实验室安全规范

***个人防护：**严格遵守穿戴规定，实验时必须佩戴实验服、防护眼镜/面罩、手套。根据实验风险选择合适的防护等级和材质的手套（如一次性丁腈手套、乳胶手套、一次性医用手套）。

***生物安全：**严格遵守生物安全等级要求。处理潜在传染性样本时，应在生物安全柜（BSC）内操作。规范处理和废弃含病原体的样本和废弃物，遵循实验室的废弃物处理流程（如高压蒸汽灭菌、化学消毒）。

***化学安全：**了解所用试剂的化学性质和安全数据表（SDS）。避免接触有毒、易燃、腐蚀性试剂。使用通风橱处理挥发性有机溶剂。配制和稀释强酸强碱时，应小心缓慢，并佩戴护目镜。

***消防安全：**熟悉消防器材（灭火器、消防栓）的位置和使用方法。实验室内严禁明火，使用电加热设备时注意安全距离和防干烧。保持消防通道畅通。

***仪器安全：**正确使用和操作仪器设备，如离心机、冰箱、超净工作台、高压灭菌锅等。使用前检查设备状态，使用后及时清洁和记录。

***应急处理：**了解实验室应急预案，如发生意外（如割伤、烫伤、化学品洒落、样本泄漏）时的处理流程和报告程序。熟悉急救箱的位置和使用方法。

***实验室清洁与消毒：**保持实验台面、设备和工作区域的清洁。实验结束后按要求清洁消毒操作区域。定期对实验室进行彻底的清洁和消毒。

(2)常用实验仪器使用

***移液器：**

*选择合适的移液器型号（如单道、多道）和量程。

*拉动活塞至最大刻度，吸入无热原的空气。

*将吸头紧密安装在移液器上，轻弹吸头或轻按活塞消除气泡。

*将吸头插入液体中，缓慢匀速按至第一停止点（吸入液体），稍等片刻（如10-30秒，取决于液体性质和温度），再按至第二停止点（排出液体）。

*快速拔出吸头，在吸头尖端轻弹几下或水平轻拍几次，使液体均匀附着。

*松开活塞，将吸头弃置于指定容器。

***离心机：**

*根据样品性质和转速要求，选择合适的离心机（如台式高速离心机、冷冻离心机）和转子。

*正确平衡样品管，确保对称放置，重量和重心一致。

*将平衡好的样品和转子放入离心机腔内，关紧门。

*选择合适的转速或相对离心力（RCF），设置离心时间和时间延迟。

*启动离心机，运行结束后，待转速降至0或启动“门锁打开”功能后再取出转子。

*小心打开转子，取下样品管，避免碰撞。

***显微镜：**

*转动转换器，选择合适的物镜（低倍、高倍、油镜）。

*打开光源或调整灯光亮度。

*转动粗准焦螺旋，使视野变清晰。

*转动细准焦螺旋，微调焦距，使图像最清晰。

*调节光圈或聚光器，优化视野亮度和对比度。

*使用油镜时，需在载玻片上滴加专用镜油，将物镜浸没在镜油中才能获得最佳分辨率。

*使用完毕后，先转动转换器，使物镜离开通光孔，然后关闭光源，清洁物镜（特别是油镜），盖上盖玻片。

***培养箱：**

***恒温培养箱：**预热至设定温度（如37°C），放入无菌培养皿或容器，定期检查温度是否稳定，并清洁消毒。

***CO2培养箱：**预热并通入CO2至设定浓度（如5%），调节湿度，放入无菌细胞培养皿或容器，定期检查CO2浓度和pH值，并清洁消毒。

***高压灭菌锅（Autoclave）：**

*将待灭菌物品放入灭菌锅内，排列整齐，留有空气流通空间。

*关紧锅门，设定合适的温度（如121°C）和压力（如15psi或1.05kg/cm²），设定灭菌时间（如15-20分钟，取决于物品类型和装载量）。

*启动灭菌程序，待程序结束后，等待压力自动降至0或手动排气后才能打开锅门。

*小心取出灭菌物品，注意避免烫伤。

***水浴锅/恒温金属浴：**预热至设定温度，放入需要加热的容器，确保容器浸没在水中或与金属浴接触良好，使用时注意温度控制和防止干烧。

(3)实验样品制备与处理

***组织样品制备：**

***新鲜组织：**迅速置于4°C生理盐水或RNAlater溶液中固定（如4小时或过夜），固定液选择需根据后续实验要求（如石蜡包埋、冰冻切片）。

***石蜡包埋：**固定后的组织按标准流程脱水（梯度乙醇）、透明（二甲苯）、浸蜡（石蜡）、包埋。用于制作组织切片。

***冰冻切片：**固定后的组织迅速置于-20°C或-80°C冷冻，然后使用冷冻切片机进行切片。用于制作冰冻切片进行染色或免疫组化。

***细胞样品制备：**

***原代细胞培养：**严格执行无菌操作，消化（如用胰蛋白酶、胶原酶）组织获取细胞，洗涤后接种于培养皿或培养瓶中，置于适宜的培养箱中培养。

***细胞传代：**当细胞生长至接近汇合时，用胰蛋白酶消化，用培养基吹打悬浮，按一定比例接种到新的培养容器中。

***细胞裂解：**用于提取总蛋白、总RNA或基因组DNA时，使用相应的裂解缓冲液裂解细胞，可能需冰浴、超声波破碎或高压匀浆等处理。

***液体样品处理：**血清、血浆、组织液、细胞培养上清等。常需离心（如3000rpm,4°C,10分钟）去除细胞碎片。根据实验需要可能需进行过滤（如0.22μm滤膜）去除大分子物质或微生物。用于蛋白检测时可能需进行蛋白质浓度测定（如BCA法）。

2.免疫细胞功能检测

(1)免疫细胞分离与培养

***外周血单个核细胞（PBMC）分离：**常用密度梯度离心法（如Ficoll-Hypaque密度梯度液）。操作步骤：采集外周血，与等量密度梯度液混合，缓慢分层后离心，收集PBMC层。洗涤PBMC，调整细胞浓度，进行培养或染色。

***T淋巴细胞、B淋巴细胞分离：**

***磁珠分离法：**使用针对CD3、CD19等表面标志的磁珠，磁选分离特定细胞群。

***流式细胞术分选（FACS）：**根据细胞表面标志的荧光染色，通过流式细胞术直接分选出特定细胞群体。

***体外培养法（如使用细胞因子）：**如在体外培养PBMC时，IL-2可促进T细胞增殖，而特定抗体（如抗CD19）结合细胞后，可利用磁珠或ADCC效应去除B细胞。

***巨噬细胞分离：**可从骨髓、脾脏、淋巴结或体外培养的RAW264.7等细胞系中分离。骨髓来源巨噬细胞可通过贴壁培养或密度梯度离心法获得。组织来源巨噬细胞可通过酶消化（胶原酶）结合贴壁培养获得。

***树突状细胞（DC）分离：**可从骨髓、外周血、淋巴结等来源分离。常用磁珠分离（如CD11c+DC）或流式细胞术分选。外周血来源的DC可通过培养PBMC并在特定细胞因子（如GM-CSF,IL-4）诱导下分化获得。

***细胞培养：**无菌条件下，使用含血清的完全培养液（含基础培养基、双抗、生长因子等）在适宜的细胞培养箱中培养。

(2)细胞功能检测方法

***细胞增殖检测：**

***MTT法：**细胞在含MTT（3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide）的培养基中孵育，活细胞线粒体中的脱氢酶可将MTT还原为蓝紫色甲臜结晶，通过酶标仪测定吸光度值，反映细胞增殖情况。

***MTT类似物法：**如3H-TdR掺入法，细胞增殖时DNA合成增加，放射性标记的胸腺嘧啶核苷酸（3H-TdR）会掺入DNA中，通过液闪计数器测定放射性强度反映细胞增殖。

***细胞计数法：**使用血球计数板或细胞计数仪直接计数细胞数量。

***细胞毒性检测（如T细胞杀伤活性）：**

***LDH释放法：**活细胞膜完整性受损时，细胞内乳酸脱氢酶（LDH）会释放到培养基中。通过酶联免疫吸附试验（ELISA）检测培养基中LDH水平，反映细胞损伤程度。

***MTT法：**杀伤性T细胞（CTL）可杀伤靶细胞，导致靶细胞增殖受阻，从而影响整个共培养体系的MTT代谢。

***膜联蛋白V-FITC/PI双染流式细胞术：**靶细胞被杀伤后出现膜脂质过氧化，膜电位改变，导致细胞凋亡或坏死。膜联蛋白V（AnnexinV）能与磷脂酰丝氨酸结合，FITC标记的AnnexinV可染活化的凋亡细胞；碘化丙啶（PI）能渗入坏死细胞核，使其染红。通过流式细胞术检测不同染色状态的细胞比例，区分凋亡和坏死。

***细胞因子检测：**

***ELISA法：**常用的酶联免疫吸附试验，通过双抗体夹心法、间接法等检测样品中特定细胞因子的浓度。

***流式细胞术（流式细胞因子检测）：**使用荧光标记的抗体直接检测细胞表面或细胞内特定细胞因子。

***细胞因子芯片：**在同一微孔板上同时检测多种细胞因子，适用于高通量筛选和综合分析。

***细胞凋亡检测：**

***TUNEL法（末端脱氧核苷酸转移酶介导的荧光标记法）：**利用TUNEL反应检测细胞DNA末端缺口，间接反映细胞凋亡。

***膜联蛋白V-FITC/PI双染流式细胞术：**如前所述，区分凋亡和坏死。

***凋亡相关蛋白检测（WesternBlot）：**检测凋亡相关蛋白（如Bcl-2,Bax,Caspase-3）的表达变化。

***DNAladder电泳：**提取细胞基因组DNA，进行琼脂

一、免疫学教学内容方案制定概述

免疫学作为现代生物学的重要分支，对于医学、生物学及相关交叉学科的人才培养具有关键作用。本方案旨在为免疫学教学提供系统化、科学化的内容框架，确保教学内容的准确性、前沿性和实用性。方案遵循循序渐进、理论与实践相结合的原则，注重培养学生的免疫学基本知识、实验技能和科研思维。

二、免疫学教学内容方案设计原则

（一）科学性与准确性

教学内容应基于免疫学领域的最新研究成果，确保知识的科学性和准确性。教师需定期更新教学内容，引入最新的研究进展和临床应用。

（二）系统性与逻辑性

教学内容应涵盖免疫学的基本概念、原理、机制及应用，形成完整的知识体系。各部分内容之间应具有逻辑关联，便于学生理解和掌握。

（三）实用性与前瞻性

教学内容应注重实际应用，结合临床案例和实验操作，提高学生的实践能力。同时，关注免疫学领域的前沿动态，培养学生的创新思维和科研能力。

（四）针对性与层次性

针对不同层次学生的学习需求，制定差异化的教学内容。初级阶段注重基础知识的传授，高级阶段则强调深入研究和技术应用。

三、免疫学教学内容方案具体内容

（一）免疫学基础理论教学

1.免疫学发展简史

(1)免疫学的起源与发展

(2)免疫学的重要里程碑

(3)免疫学与其他学科的交叉融合

2.免疫系统组成与功能

(1)免疫器官与组织

(2)免疫细胞及其分类

(3)免疫分子及其作用机制

3.抗原与免疫应答

(1)抗原的概念与分类

(2)抗原识别与处理

(3)免疫应答的基本过程

（二）免疫学实验技术教学

1.实验室基本操作

(1)实验室安全规范

(2)常用实验仪器使用

(3)实验样品制备与处理

2.免疫细胞功能检测

(1)免疫细胞分离与培养

(2)细胞功能检测方法

(3)细胞凋亡与坏死检测

3.免疫分子检测技术

(1)免疫印迹技术

(2)免疫荧光技术

(3)流式细胞术

（三）免疫学应用教学

1.临床免疫学

(1)免疫相关疾病概述

(2)免疫诊断技术

(3)免疫治疗策略

2.生物技术中的免疫学应用

(1)单克隆抗体技术

(2)免疫佐剂与疫苗开发

(3)免疫学在基因工程中的应用

3.免疫学前沿研究动态

(1)免疫调控机制研究

(2)免疫学与疾病发生发展关系

(3)免疫学与其他学科的交叉研究

四、免疫学教学内容方案实施建议

（一）教学资源准备

1.教材与参考书选择：选用权威、经典的免疫学教材，结合最新研究成果编写补充材料。

2.实验指导书编写：制定详细的实验操作步骤和注意事项，确保实验教学质量。

3.多媒体资源制作：开发免疫学教学视频、动画等多媒体资源，提高教学效果。

（二）教学方法改革

1.互动式教学：采用问题导向、案例教学等方法，提高学生的参与度和学习兴趣。

2.翻转课堂：鼓励学生课前预习，课堂上进行深入讨论和互动，培养学生的自主学习能力。

3.线上线下混合式教学：利用网络平台开展线上教学，结合线下实验和讨论，提高教学效率。

（三）教学评价体系完善

1.过程性评价：通过课堂表现、实验操作、作业完成情况等进行综合评价。

2.终结性评价：采用考试、论文等形式检验学生的学习成果。

3.反馈与改进：根据评价结果及时调整教学内容和方法，提高教学质量。

（四）师资队伍建设

1.教师培训与进修：定期组织免疫学教师参加专业培训和学术交流，提高教学水平。

2.教师团队建设：组建跨学科、跨专业的免疫学教学团队，发挥团队协作优势。

3.教师激励机制：建立教师激励机制，鼓励教师积极开展教学改革和科研工作。

**（接前文）**

三、免疫学教学内容方案具体内容

（一）免疫学基础理论教学

1.免疫学发展简史

(1)免疫学的起源与发展

免疫学并非独立产生的学科，其思想萌芽可追溯至古代。例如，中国古代医学文献中记载的“瘥（chài）后易感”现象，描述了感染疾病后获得的再次感染抵抗力。近代免疫学的发展始于18世纪末到19世纪初，以EdwardJenner的牛痘接种（1796年）为标志，开启了免疫预防的新纪元。19世纪末，LouisPasteur等人通过研究炭疽病、狂犬病等，进一步证实了疫苗的原理，并提出了“病原体”学说。20世纪是免疫学飞速发展的时期，特别是Burnet的克隆选择学说（1957年）和Medawar的免疫衰老理论（1963年），为现代免疫学奠定了理论基础。随后，对主要组织相容性复合体（MHC）、免疫球蛋白结构、T细胞和B细胞的分化和功能的深入研究，极大地推动了学科进步。进入21世纪，随着基因组学、蛋白质组学等技术的发展，免疫学在理解复杂疾病（如自身免疫病、肿瘤免疫）的发病机制、开发新型免疫治疗策略（如免疫检查点抑制剂、CAR-T细胞疗法）等方面取得了突破性进展。

(2)免疫学的重要里程碑

列举免疫学发展过程中的关键事件和概念，如：

***17世纪：**AntonievanLeeuwenhoek首次观察到血液中的“微动体”（即白细胞）。

***1796年：**EdwardJenner发明牛痘接种，开创了免疫预防的先河。

***1880-1885年：**LouisPasteur研制狂犬病疫苗，证实了疫苗原理。

***1890年：**RobertKoch发现结核分枝杆菌，并证明其为结核病的病原体。

***1900-1901年：**PaulEhrlich提出“侧翼链学说”，解释抗体与抗原结合的机制。

***1901年：**PaulEhrlich因血清疗法和“侧翼链学说”获诺贝尔生理学或医学奖。

***1910年：**PaulEhrlich提出“化学疗法”概念。

***1924年：**JulesBordet发现补体系统，并获诺贝尔生理学或医学奖。

***1957年：**FrankMacfarlaneBurnet提出克隆选择学说，解释体液免疫和细胞免疫的机制。

***1963年：**PeterMedawar提出免疫衰老理论，获诺贝尔生理学或医学奖。

***1960年代：**GeorgeSnell,JeanDausset,BillKnowles等人阐明MHC（HLA）的作用。

***1970年代：**GeorgeKohler和CésarMilstein发明杂交瘤技术，可制备单克隆抗体。

***1974年：**NielsKajJerne提出免疫网络理论。

***1976年：**RalphSteinman发现树突状细胞，获2011年诺贝尔生理学或医学奖。

***1977年：**Mary-ClaireKing发现HIV的逆转录酶。

***1980年代：**大规模开展T细胞亚群、B细胞亚群及其功能的深入研究，以及细胞因子学说的建立。

***1990年代：**免疫基因组学、蛋白质组学兴起，基因组免疫学（如DNA疫苗）发展。

***2000年代至今：**肿瘤免疫治疗（PD-1/PD-L1抑制剂、CAR-T细胞）、自身免疫病研究、过敏原研究、免疫衰老等成为热点。

(3)免疫学与其他学科的交叉融合

免疫学与众多学科存在紧密联系，相互促进发展：

***生物学：**与细胞生物学（细胞结构、功能）、遗传学（MHC遗传多态性、免疫遗传学）、分子生物学（基因表达调控、信号转导）、生物化学（免疫分子结构、功能）等深度交叉。

***医学：**是基础医学与临床医学的桥梁，广泛应用于传染病学（免疫预防、诊断）、肿瘤学（免疫监视、免疫治疗）、免疫学疾病学（自身免疫病、过敏病）、移植免疫学等。

***生物技术：**依托生物技术平台（基因工程、细胞工程、蛋白质工程）发展出单克隆抗体、疫苗、免疫诊断试剂、免疫治疗药物等。

***药学：**新型免疫抑制剂、免疫增强剂、靶向免疫治疗药物的开发是现代药理学的重要方向。

***环境科学：**研究环境因素（如微生物组、污染物）对免疫系统的影响。

2.免疫系统组成与功能

(1)免疫器官与组织

免疫系统由中枢免疫器官、外周免疫器官以及弥散分布的免疫组织构成。

***中枢免疫器官：**胸腺和骨髓。是免疫细胞（T细胞和B细胞）发生、分化和成熟的场所。

***胸腺：**位于胸腔内，是T细胞发育成熟的场所。结构分为皮质、髓质。T细胞前体细胞从骨髓迁移至胸腺，经历阳性选择（确认能识别MHC）和阴性选择（剔除可能攻击自身成分的细胞），最终成为成熟的T细胞并输出到外周。

***骨髓：**是B细胞发育成熟的场所，也是所有免疫细胞的发源地。结构包括红髓和黄髓。B细胞前体细胞在骨髓中经历重链和轻链基因重排，成功组装免疫球蛋白受体后，成为成熟的B细胞并输出到外周。

***外周免疫器官：**脾脏、淋巴结、黏膜相关淋巴组织（MALT，如扁桃体、派尔集合淋巴结、肠道相关淋巴组织GALT、支气管相关淋巴组织BALT）等。是成熟免疫细胞聚集、识别抗原、发生免疫应答的场所。

***脾脏：**是最大的外周免疫器官，主要清除血液中的抗原异物。结构包括红髓（滤血功能）、白髓（淋巴细胞聚集区，包括脾小结和髓索）。血液流经脾窦时，抗原被吞噬细胞捕获，提呈给淋巴细胞，引发免疫应答。

***淋巴结：**散布于全身，是过滤淋巴液和抗原的重要场所。结构包括皮质（B细胞区、T细胞区）、髓质（髓索、髓窦）。淋巴液流经淋巴结时，抗原被捕获，提呈给淋巴细胞，引发免疫应答。淋巴结内的高内皮微静脉（HEV）是淋巴细胞从血液迁移到淋巴组织的通道。

***黏膜相关淋巴组织（MALT）：**位于消化道、呼吸道、泌尿生殖道等黏膜下，是抵御病原体入侵的第一道防线。结构多样，如扁桃体是团块状的淋巴组织，派尔集合淋巴结位于回肠绒毛间，GALT和BALT则广泛分布于肠道和呼吸道黏膜下。

***免疫组织/弥散淋巴组织：**如黏膜下层淋巴组织（MLN）、皮下淋巴组织（SLN）等，参与局部免疫反应。

***派尔集合淋巴结（PP）：**位于小肠绒毛间，是GALT的重要组成部分，在诱导口服耐受中起关键作用。

***黏膜相关淋巴组织（MALT）：**包括扁桃体、派尔集合淋巴结、GALT（肠道）、BALT（呼吸道）等。

(2)免疫细胞及其分类

免疫细胞是执行免疫功能的基本单位，种类繁多，主要分为淋巴细胞、吞噬细胞、树突状细胞、自然杀伤细胞以及其他免疫细胞等。

***淋巴细胞（Lymphocytes）：**是免疫应答的核心细胞，主要包括：

***T淋巴细胞（Tcells）：**来源于骨髓，在胸腺成熟。根据表面标志和功能分为：

***辅助性T细胞（CD4+Tcells）：**发育于胸腺，表达CD4分子。识别由APC（如DC）提呈的、与MHCII类分子结合的抗原肽。在免疫应答中起协调、辅助作用，可分化为Th1、Th2、Th17、Tfh等亚型。

***细胞毒性T细胞（CD8+Tcells，也称杀伤性T细胞）：**发育于胸腺，表达CD8分子。识别由APC提呈的、与MHCI类分子结合的抗原肽。主要功能是杀伤被病毒感染或肿瘤细胞。

***调节性T细胞（Tregs）：**发育于胸腺（thymicTregs）或在外周被诱导产生（peripherallyinducedTregs）。表达CD4+CD25+FoxP3+等标志。主要功能是抑制免疫应答，维持免疫耐受，防止自身免疫病发生。

***记忆性T细胞（MemoryTcells）：**经历抗原刺激后分化而来，分为中央记忆T细胞（TCM）和外周记忆T细胞（TEM）。TCM迁移至次级淋巴器官，保持长期存活，快速反应；TEM主要分布于外周组织，参与快速效应功能。

***B淋巴细胞（Bcells）：**来源于骨髓，在骨髓成熟。根据表面标志和功能分为：

***未成熟B细胞：**正在发育和经历免疫球蛋白重链和轻链基因重排的B细胞。

***成熟B细胞：**表达完整的免疫球蛋白（表面IgM和IgD），具有识别抗原和迁移能力。在静息状态下，大部分存在于外周血和淋巴结等处。

***浆细胞（Plasmacells，也称效应B细胞）：**成熟B细胞接受抗原刺激并活化后分化而来。主要功能是大量合成和分泌特异性抗体（主要是IgM和IgG，也分泌IgA、IgE）。不具备细胞迁移能力，常聚集在骨髓等处。

***记忆性B细胞（MemoryBcells）：**成熟B细胞活化后分化而来。寿命长，能快速被再次抗原激活，分化为浆细胞，产生大量高亲和力抗体，是产生免疫记忆的关键。

***吞噬细胞（Phagocytes）：**具有强大的吞噬能力，是固有免疫的重要组成部分。主要包括：

***巨噬细胞（Macrophages）：**来源于骨髓的单核细胞进入组织后分化而来。广泛分布于全身组织（如结缔组织、淋巴结、脾脏、骨髓），具有吞噬、处理和呈递抗原、分泌细胞因子、参与炎症反应等多种功能。巨噬细胞具有表型可塑性，可在不同微环境中分化为经典激活（M1，促炎）、替代激活（M2，抗炎、组织修复）等不同状态。

***中性粒细胞（Neutrophils）：**来源于骨髓，是血液中最丰富的白细胞。寿命短（约几小时到几天）。是抵御细菌和真菌感染的第一线防线，通过吞噬作用清除病原体。也参与炎症反应，但吞噬能力相对较弱。

***树突状细胞（Dendriticcells,DCs）：**是目前已知最强的抗原提呈细胞（APC）。来源于骨髓的造血干细胞，在骨髓、淋巴器官和外周组织中存在不同类型的DC（如常规DCcDC1/cDC2，不常规DCpDC）。主要功能是捕获、处理和提呈抗原给初始T细胞，激活T细胞，启动适应性免疫应答。pDC主要负责产生I型干扰素，抗病毒感染。

***自然杀伤细胞（NaturalKillercells,NKcells）：**来源于骨髓，是一群无需预先致敏即可杀伤肿瘤细胞和被病毒感染细胞的淋巴细胞。表达多种特异性表面标志（如NKp46,NKG2D,KIR）。主要通过识别应激相关分子模式（如MICA/MICB）或直接杀伤缺乏MHCI类分子表达的靶细胞来发挥功能。NK细胞也参与免疫调节，如分泌细胞因子。

***其他免疫细胞：**包括嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、肥大细胞、红细胞（携带补体成分C3b）、血小板（含有TGF-β1等）等，它们也参与免疫反应或免疫调节。

(3)免疫分子及其作用机制

免疫分子是免疫细胞产生和分泌的，参与免疫应答的各种生物活性分子，主要包括抗体、补体系统、细胞因子、免疫受体等。

***抗体（Antibodies,Immunoglobulins,Ig）：**B细胞分化为浆细胞后产生的特异性蛋白质，是体液免疫的核心效应分子。

***结构：**由两条重链（H链）和两条轻链（L链）通过二硫键连接而成的“Y”字形分子。包括可变区（V区，决定抗原结合特异性）和恒定区（C区，决定抗体功能）。恒定区可进一步分为CH1,CH2,CH3等结构域。铰链区位于两个恒定区之间，较灵活，便于抗体构象变化。

***分类：**根据重链恒定区不同分为IgM,IgG,IgA,IgE,IgD五种。根据铰链区是否有J链和分泌片（SP）进一步分类（如分泌型IgA）。

***功能：**

***中和作用：**结合病毒、毒素等，阻止其与宿主细胞结合。

***调理作用：**通过Fc段与吞噬细胞、补体等结合，促进对病原体或凋亡细胞的吞噬（Opsonization）。

***激活补体：**IgM和IgG（特别是IgG1,IgG2,IgG3）可激活经典途径补体。

***抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用（ADCC）：**IgG结合到被病毒感染或肿瘤细胞的表面，NK细胞通过识别抗体的Fc段来杀伤靶细胞。

***介导过敏反应和免疫病理损伤：**IgE介导Ⅰ型过敏反应；某些自身抗体可引起免疫复合物病或直接损伤组织。

***抗体结构域：**Fab段（抗原结合位点，由VH和VL构成）和Fc段（执行功能，由CH和CL构成）。

***补体系统（Complementsystem）：**是一组存在于血液和组织液中的丝状蛋白，在激活后可发生级联放大反应，产生多种生物活性物质，参与免疫应答和炎症反应。

***组成：**包括30多种血清蛋白和蛋白水解酶，分为补体经典途径（Classicalpathway）、凝集素途径（Lectinpathway）、替代途径（Alternativepathway）三条激活途径的共同末端通路（末端通路）。

***激活途径：**

***经典途径：**由C1q识别并结合抗原抗体复合物（IgM或IgG的Fc段）而启动，依次激活C2,C4,C3，形成C3转化酶（C4b2a,C3bBb），最终激活C5,C6,C7,C8,C9，形成膜攻击复合物（MAC），破坏靶细胞膜。

***凝集素途径：**由Mannose-BindingLectin（MBL）或其他凝集素识别病原体表面的N-乙酰氨基葡萄糖（GlcNAc）等多糖结构而启动，依次激活MASP-1,MASP-2，进而激活C3，后续过程与经典途径相似。

***替代途径：**在缺乏调理素（如正常血清）的情况下，C3b可自发水解成C3bBb，形成替代途径C3转化酶，该途径可正反馈放大，无需抗体参与。

***功能：**

***裂解靶细胞：**MAC破坏细胞膜，导致细胞溶解。

***调理作用：**C3b、C4b等可结合到病原体表面，促进吞噬细胞吞噬。

***炎症介质：**C3a,C5a是强效的趋化因子，吸引中性粒细胞等炎症细胞到达感染部位；C5a还是血管通透性增加因子。

***激活B细胞：**C3d是B细胞活化所需的重要第二信号。

***细胞因子（Cytokines）：**是由免疫细胞（如巨噬细胞、T细胞、B细胞、DC等）以及其他细胞（如内皮细胞、成纤维细胞）产生的小分子蛋白质，在免疫应答中起信号传导、调节细胞功能、招募细胞等多种作用。

***分类：**根据结构和功能可分为多种类型，如白细胞介素（ILs）、干扰素（IFNs）、肿瘤坏死因子（TNFs）、集落刺激因子（CSFs）、趋化因子（Chemokines）等。

***功能：**

***免疫调节：**促进或抑制T细胞、B细胞、NK细胞等多种免疫细胞的分化和功能。

***炎症反应：**吸引炎症细胞，增加血管通透性，调节免疫细胞迁移。

***抗病毒/抗菌：**IFN-α,IFN-β具有抗病毒活性；TNF-α具有广谱抗菌、抗肿瘤作用。

***造血支持：**CSFs促进造血干/祖细胞的增殖和分化。

***免疫受体（Immunoreceptors）：**是表达于免疫细胞表面的、能与特定配体（抗原、细胞因子、其他分子等）结合的受体分子，是免疫细胞识别信号、执行功能的分子基础。

***T细胞受体（TCR）：**表达于T细胞表面，是T细胞识别MHC-抗原肽复合物的特异性受体。

***B细胞受体（BCR）：**即膜结合型IgM/IgD，是B细胞识别抗原的受体。

***主要组织相容性复合体（MHC）分子：**MHCI类和II类分子是提呈抗原给T细胞的核心分子，本身也是重要的免疫受体。

***可溶性免疫受体：**如抗体、补体成分、细胞因子受体等。

3.抗原与免疫应答

(1)抗原的概念与分类

***抗原（Antigen）：**指能够诱导免疫系统发生免疫应答（产生抗体或致敏淋巴细胞），并能与相应免疫应答产物（抗体或致敏淋巴细胞）在体内外结合发生反应的物质。

***基本特性：**具有免疫原性（Inductiveproperty，能诱导免疫应答）和反应性（Reactiveproperty，能与免疫应答产物结合）。

***分类：**

***按来源分类：**

***天然抗原：**机体在自然界中接触到的抗原，如病原微生物及其产物（细菌、病毒、真菌、寄生虫）、异种动物血清、植物蛋白、同种异体移植物（细胞、组织、器官）等。

***人工抗原：**人工制备的抗原，如疫苗、类毒素、免疫佐剂与抗原的复合物等。

***按免疫原性分类：**

***完全抗原（Completeantigen）：**具有免疫原性和反应性，通常是大分子蛋白质或多糖，如大多数蛋白质类病原体、类毒素、疫苗等。

***不完全抗原（Incompleteantigen）：**具有反应性，但通常缺乏免疫原性或免疫原性很弱，如某些小分子多肽、多糖、药物半抗原（必须与大分子载体结合才能诱导免疫应答），能与抗体结合形成沉淀或补体结合，但不一定能诱导B细胞产生抗体。

***按与机体关系分类：**

***异种抗原：**来自不同物种的抗原，如动物血清、植物蛋白、外源病原体抗原。

***同种异体抗原：**来自同种但遗传背景不同的个体，如供者与受者之间的MHC分子差异，同种异体细胞移植。

***自身抗原（Autoantigen）：**正常情况下机体不表达或表达水平很低，但在某些因素（如感染、衰老、免疫耐受破坏）作用下，可被免疫系统识别为异物而引发自身免疫病的抗原，如DNA、甲状腺球蛋白、关节滑膜成分等。

***按抗原性质分类：**

***胸腺依赖性抗原（Th-dependentantigen）：**通常是大分子蛋白质，需要T细胞的辅助才能诱导较强的B细胞应答，产生类别转换抗体和免疫记忆。大多数蛋白质抗原属于此类。

***胸腺非依赖性抗原（Th-independentantigen）：**通常是多糖（如细菌荚膜多糖）或脂质，无需T细胞辅助即可直接刺激B细胞产生以IgM为主的抗体，通常不能诱导免疫记忆或免疫记忆较弱。

(2)抗原识别与处理

***B细胞表位（Bcellepitope,Bepi）：**抗原上能够被B细胞受体（BCR）特异性结合的表位。通常是线性表位（连续氨基酸序列）或构象表位（氨基酸序列折叠后形成）。

***T细胞表位（Tcellepitope）：**抗原被抗原提呈细胞（APC）处理呈递后，能够被T细胞受体（TCR）特异性结合的表位。

***CD4+T细胞表位：**主要识别由MHCII类分子提呈的、来源于外源性抗原（如细菌、病毒、疫苗）的抗原肽。通常为8-15个氨基酸的线性表位，对锚定残基（P1,P4,P7等位置）和电荷有特定要求。

***CD8+T细胞表位：**主要识别由MHCI类分子提呈的、来源于内源性抗原（如病毒感染细胞、肿瘤细胞内的抗原）的抗原肽。通常为8-10个氨基酸的线性表位，对锚定残基有较严格的要求。

***抗原处理途径：**

***外源性抗原处理途径：**指由APC（主要是巨噬细胞、DC）摄取、处理外源性抗原（如通过吞噬、受体介导的内吞），并在细胞内降解为抗原肽，随后与MHCII类分子结合，提呈给CD4+T细胞的过程。主要在淋巴组织中的APC中进行。

***内源性抗原处理途径：**指细胞内合成的抗原（如病毒蛋白、肿瘤抗原）被降解为抗原肽，并与MHCI类分子结合，提呈给CD8+T细胞的过程。主要在所有有核细胞内进行。

(3)免疫应答的基本过程

免疫应答是机体免疫系统识别抗原、清除抗原、维持自身稳定的过程，主要包括抗原识别、活化、效应和记忆四个阶段。

***抗原识别阶段：**抗原被免疫细胞表面的特异性受体（BCR,TCR）或模式识别受体（PRR）识别。B细胞通过BCR识别游离抗原或与APC结合的抗原；T细胞通过TCR识别由MHC分子提呈的抗原肽。此阶段是免疫应答的起始和特异性基础。

***活化阶段：**抗原识别后，免疫细胞需要接受第二信号（Costimulation）才能被完全活化。

***B细胞活化：**通常需要两个信号。第一信号是BCR与抗原的结合；第二信号由辅助性T细胞（Th细胞）表面的CD40L与B细胞表面的CD40结合提供。此外，细胞因子（如IL-4,IL-5,IL-6）等也提供重要的调节信号。活化的B细胞增殖、分化为浆细胞（产生抗体）和记忆B细胞。

***T细胞活化：**通常需要三个信号。第一信号是TCR与MHC-抗原肽复合物的结合；第二信号是APC表面的共刺激分子（如B7家族成员CD80/CD86）与T细胞表面的共刺激分子（如CD28）结合；第三信号是细胞因子（如IL-1,IL-6,IL-12等）提供的信号。活化的CD4+T细胞分化为Th1,Th2,Treg等亚型，发挥不同的免疫调节功能；活化的CD8+T细胞分化为细胞毒性T细胞（CTL），增殖并发挥杀伤靶细胞功能。

***效应阶段：**活化的免疫细胞分化为效应细胞，执行免疫功能。

***体液免疫：**活化的B细胞分化为浆细胞，大量分泌特异性抗体，通过中和、调理、激活补体、ADCC等机制清除抗原。

***细胞免疫：**活化的CD8+CTL杀伤被感染的靶细胞或肿瘤细胞；活化的CD4+Th细胞（如Th1）辅助CTL和巨噬细胞功能，或直接参与炎症反应。

***记忆阶段：**免疫应答结束后，部分活化的免疫细胞分化为长期存活的记忆细胞（记忆B细胞和记忆T细胞）。当机体再次接触相同抗原时，记忆细胞能更快、更强地被激活，产生更快的免疫应答，并提供长期的免疫保护。这是免疫记忆的基础。

（二）免疫学实验技术教学

1.实验室基本操作

(1)实验室安全规范

***个人防护：**严格遵守穿戴规定，实验时必须佩戴实验服、防护眼镜/面罩、手套。根据实验风险选择合适的防护等级和材质的手套（如一次性丁腈手套、乳胶手套、一次性医用手套）。

***生物安全：**严格遵守生物安全等级要求。处理潜在传染性样本时，应在生物安全柜（BSC）内操作。规范处理和废弃含病原体的样本和废弃物，遵循实验室的废弃物处理流程（如高压蒸汽灭菌、化学消毒）。

***化学安全：**了解所用试剂的化学性质和安全数据表（SDS）。避免接触有毒、易燃、腐蚀性试剂。使用通风橱处理挥发性有机溶剂。配制和稀释强酸强碱时，应小心缓慢，并佩戴护目镜。

***消防安全：**熟悉消防器材（灭火器、消防栓）的位置和使用方法。实验室内严禁明火，使用电加热设备时注意安全距离和防干烧。保持消防通道畅通。

***仪器安全：**正确使用和操作仪器设备，如离心机、冰箱、超净工作台、高压灭菌锅等。使用前检查设备状态，使用后及时清洁和记录。

***应急处理：**了解实验室应急预案，如发生意外（如割伤、烫伤、化学品洒落、样本泄漏）时的处理流程和报告程序。熟悉急救箱的位置和使用方法。

***实验室清洁与消毒：**保持实验台面、设备和工作区域的清洁。实验结束后按要求清洁消毒操作区域。定期对实验室进行彻底的清洁和消毒。

(2)常用实验仪器使用

***移液器：**

*选择合适的移液器型号（如单道、多道）和量程。

*拉动活塞至最大刻度，吸入无热原的空气。

*将吸头紧密安装在移液器上，轻弹吸头或轻按活塞消除气泡。

*将吸头插入液体中，缓慢匀速按至第一停止点（吸入液体），稍等片刻（如10-30秒，取决于液体性质和温度），再按至第二停止点（排出液体）。

*快速拔出吸头，在吸头尖端轻弹几下或水平轻拍几次，使液体均匀附着。

*松开活塞，将吸头弃置于指定容器。

***离心机：**

*根据样品性质和转速要求，选择合适的离心机（如台式高速离心机、冷冻离心机）和转子。

*正确平衡样品管，确保对称放置，重量和重心一致。

*将平衡好的样品和转子放入离心机腔内，关紧门。

*选择合适的转速或相对离心力（RCF），设置离心时间和时间延迟。

*启动离心机，运行结束后，待转速降至0或启动“门锁打开”