2026届高考生物二轮精准复习：影印法小专题

影印平板培养法是一种通过盖印章的方式，达到在一系列培养皿平板的相同位置上出现相同遗传型菌落的接种和培养方法。1952年，莱德伯格夫妇的论文《平板影印培养法和细菌突变株的间接选择》，以确切的事实证明了微生物的抗药性是在未接触药物前自发地产生的，这一突变与相应药物环境毫不相干。影印平板培养法1、将待测的浓缩菌悬液涂在合适的平板上，等其长好后作为母平板(每平板上的菌落控制在30~300个);2、用一小块灭菌的丝绒固定在直径较平板略小的圆柱形木块上，构成印章(即接种工具);3、然后把长有菌落的母平板倒置在丝绒的印章上，轻轻印一下;4、再把此印章在另一含有选择培养基的平板上轻轻印一下，经培养后，选择培养基平板上长出的菌落与母平板上的菌落位置对应，比较影印平板与母平板上菌落生长情况，即可从相应位置的母平板上选出待测的突变型菌落。影印平板培养法的实验过程：莱德伯格夫妇影印平板培养法操作过程简图：影印平板培养法的实验过程：【经典例题1】营养缺陷型菌株是指缺乏合成某些营养物质（如氨基酸）的能力，必须在基本培养基中补充这些营养物质才能正常生长的一类菌株，可自然或人工诱导产生。图为实验人员利用影印法初检氨基酸缺陷型菌株的过程。下列有关说法错误的是（）A．过程①的接种方法为稀释涂布平板法B．进行过程②培养时，应先将丝绒布转印至完全培养基上C．鉴定菌落种类的重要依据是菌落的大小、形状、颜色等特征D．微生物生长所需要的营养物质一般有水、碳源、氮源、无机盐等B【答案分析】A、根据过程①所得培养基中菌落的分布结果较均匀可以判断，该过程所采用的接种方法为稀释涂布平板法，A正确；B、进行②过程培养时，转印的操作相当于接种，应先将丝绒布转印至基本培养基上，再从完全培养基上获得相应的营养缺陷型菌株，B错误；C、不同的菌种其菌落大小、形状、颜色等不同，可作为鉴定菌种的依据之一，C正确；D、实验室培养微生物需要配制适宜的培养基，需要含有其生长所需的水、碳源、氮源、无机盐等营养物质，D正确。故选B。【经典例题2】营养缺陷型菌株是指缺乏合成某些营养物质（如氨基酸、维生素）的能力，必须在基本培养基中补充特殊营养物质才能正常生长的一类菌株，可自然产生或人工诱导获得。用一定方法诱变大肠杆菌并将其接种到甲培养皿上，一段时间后将菌落影印接种（不改变菌落位置）到乙、丙两培养皿中，进一步培养一段时间可筛选出营养缺陷型菌株，结果如图所示。下列说法正确的是（）A.将大肠杆菌接种到甲培养皿的方法为平板划线法B.甲、丙两种培养基中均添加了特殊营养物质C.乙培养皿中能生长的为所需的营养缺陷型菌株D.甲中的部分大肠杆菌发生了基因突变或染色体变异B【答案分析】A、由菌落的分布情况可知，将大肠杆菌接种到甲培养皿的方法为稀释涂布平板法，A错误；B、根据甲、丙两种培养基中菌落位置可知，甲中的菌种在丙培养基中均能生长，再结合乙培养基中菌落的生长情况，可推测甲培养基和丙培养基都添加了某种特殊物质，B正确；C、乙培养皿中不能生长的为所需的营养缺陷型菌株，C错误；D、甲中的部分大肠杆菌发生了基因突变，不可能发生染色体变异，因为大肠杆菌不含染色体，D错误。故选B。【经典例题3】将野生型菌株进行人工诱变等方式处理，可得到营养缺陷型菌株，该缺陷型菌株不能合成某种生长因子，只能在补充了相应生长因子的培养基中生长。某研究小组为得到赖氨酸营养缺陷型菌株，采用了影印接种法（影印后菌落位置一致），实验过程如图所示，请回答下列问题：(1)实验所用的培养基通常在装入锥形瓶后，采用

的方法进行灭菌。(2)如图所示，紫外线处理大肠杆菌通常引起的变异类型是

，将该大肠杆菌接种到甲平板的方法是

法。在操作时，该方法和影印接种法都需要在

附近进行。【经典例题】将野生型菌株进行人工诱变等方式处理，可得到营养缺陷型菌株，该缺陷型菌株不能合成某种生长因子，只能在补充了相应生长因子的培养基中生长。某研究小组为得到赖氨酸营养缺陷型菌株，采用了影印接种法（影印后菌落位置一致），实验过程如图所示，请回答下列问题：(3)从培养基的用途来看，丙平板的培养基属于选择培养基。在微生物学中，选择培养基是指

。实验中的赖氨酸是特殊的生长因子，而作为主要营养物质，它还能为大肠杆菌提供

。(4)据图所示，能够挑选出赖氨酸营养缺陷型菌落的是

（选填“乙平板”、“丙平板”）。【答案】(1)高压蒸汽灭菌(2)基因突变

稀释涂布平板

酒精灯火焰(3)允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基

碳源和氮源(4)乙平板【经典例题4】营养缺陷型菌株就是在人工诱变或自发突变后，微生物细胞代谢调节机制中的某些酶被破坏，使代谢过程中的某些合成反应不能进行的菌株。这种菌株在基本培养基中不能生长，但能积累正常菌株不能积累的某些代谢中间产物，为工业生产提供大量原料。以下是实验人员利用影印法初检氨基酸缺陷型菌株的过程。(1)过程①的接种方法为

。图中基本培养基与完全培养基存在差异的成分是

。根据用途分类，图中基本培养基属于

（填“选择”或“鉴别”）培养基。(2)进行过程②培养时，应先将丝绒布转印至

（填“基本”或“完全”）培养基上，原因是

。(3)利用影印法培养的优点是不同培养基中同种菌株的接种位置相同，所以，挑取

（填“菌落A”或“菌落B”）即为所需的氨基酸缺陷型菌株。(4)分离计数土壤中自然突变的氨基酸缺陷型菌株的过程：步骤①取5g土壤加入45mL无菌水中充分震荡得到土壤悬液。步骤②中，将1mL土壤悬液进行梯度稀释，每种稀释度经过步骤③各在3个平板上接种（每个平板的接种量为0.2mL），经适当培养后，在稀释倍数为103和104两组平板上的菌落数分别为49、47、48和2、7、6．据此可得出每升土壤悬液中的活菌数为

个。接种后的平板应

，以防止冷凝水滴落造成污染。【答案】(1)稀释涂布平板法

氨基酸

选择(2)基本

防止将特定营养成分从完全培养基带入基本培养基(3)菌落A(4)2.4×108

倒置计算公式：每克样品中的菌株数=（C÷V）×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。下面以培养某转胰岛素基因大肠杆菌，选择具有标记基因青霉素抗性基因和四环素抗性基因，同时限制酶切点在青霉素抗性基因内部的质粒作运载体，与目的基因构建表达载体（不考虑多个DNA片段的连接、目的基因的自我连接和目的基因的反向连接）。哪个编号菌落中可以筛选出想要的转胰岛素基因大肠杆菌？进阶例题不考虑多个DNA片段的连接、目的基因的自我连接和目的基因的反向连接，将得到两种质粒：原有质粒重新连接而成的空质粒和重组质粒。

将所得质粒与没有青霉素、四环素抗性的大肠杆菌混合、转化，将得到三种大肠杆菌，即未转化的大肠杆菌、导入空质粒的大肠杆菌和导入重组质粒的大肠杆菌。将所得大肠杆菌培养，增加数量。然后接种到完全培养基上，得如图所示的6个菌落。然后，用影印接种法将菌落分别接种到含有四环素和青霉素的培养基上，培养结果如上图。其中2号、5号菌落无法在两种培养基上生存，说明所含大肠杆菌没有抗性基因，即所含大肠杆菌为未转化的大肠杆菌；1号、