DB13∕T 5189.8-2020 天然植物提取物中危害成分检测 第8部分：辣椒提取物中苏丹红的测定

ICS67

X04

DB13

河北省地方标准

DB13/T5189.8—2020

天然植物提取物中危害成分检测

第8部分：辣椒提取物中苏丹红的测定

2020-06-28发布2020-07-28实施

河北省市场监督管理局发布

DB13/T5189.8—2020

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

DB13/T5189《天然植物提取物中危害成分的测定》共分12个部分：

——第1部分：亚硝酸盐的测定；

——第2部分：二氧化硫的测定；

——第3部分：正己烷、丙酮、乙酸乙酯、甲醇和乙醇5种有机溶剂残留的测定；

——第4部分：辣椒提取物中砷、铅、镉、铬、汞的测定；

——第5部分：万寿菊提取物中对氧基苯胺的测定；

——第6部分：万寿菊提取物中乙氧基喹啉的测定；

——第7部分：天然番茄红中苯并[α]芘的测定；

——第8部分：辣椒提取物中苏丹红的测定；

——第9部分：辣椒提取物中叔丁基对苯二酚的测定；

——第10部分：辣椒红中赭曲霉毒素A的测定；

——第11部分：叶黄素中苯的测定；

——第12部分：甜菊糖苷中邻苯二甲酸酯的测定。

本部分为DB13/T5189的第8部分。

本标准由河北省市场监督管理局提出并归口。

本部分起草单位：晨光生物科技集团股份有限公司、河北省食品检验研究院、石家庄海关技术中心、

清河食品药品检验所。

本部分主要起草人：连运河、张玉芬、史国华、杨清山、钱建瑞、艾连峰、郭焕君。

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DB13/T5189.8—2020

天然植物提取物中危害成分检测

第8部分：辣椒提取物中苏丹红的测定

1范围

本部分规定了辣椒提取物中苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ的超高效液相色谱-串联质谱测定方法。

本部分适用于辣椒提取物中苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ的测定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。

3原理

辣椒提取物中的苏丹红经环己烷—乙酸乙酯溶解，凝胶色谱净化，再浓缩至干，用乙腈复溶，采用

C18（2.1mm×50mm，1.7μm）色谱柱，以乙腈（0.1%）+甲酸水（0.1%）为流动相体系，梯度洗脱，

三重四级杆质谱仪检测，外标法定量。

4试剂或材料

除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1试剂

4.1.1甲酸（C2H2O2）：优级纯。

4.1.2乙腈（C2H3N）：色谱纯。

4.1.3环己烷（C6H12）。

4.1.4乙酸乙酯（C4H8O2）。

4.1.5三氯甲烷（CHCl3）。

4.2试剂配制

环己烷—乙酸乙酯：1+1（体积比）：量取500mL环己烷与500mL乙酸乙酯混合均匀。

4.3标准品

4.3.1苏丹红Ⅰ标准品（C16H12N2O，CAS号：842-07-9）：纯度大于99.0%，或具有标准物质证书，20℃

常温储藏。

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4.3.2苏丹红Ⅱ标准品（C18H18N2O，CAS号：3118-97-6）：纯度大于99.0%，或具有标准物质证书，20℃

常温储藏。

4.3.3苏丹红Ⅲ标准品（C22H16N4O，CAS号：85-86-9）：纯度大于99.0%，或具有标准物质证书，20℃

常温储藏。

4.3.4苏丹红Ⅳ标准品（C24H20N4O，CAS号：85-83-6）：纯度大于99.0%，或具有标准物质证书，20℃

常温储藏。

4.4标准溶液配制

4.4.1混合标准储备液（100mg/L）：称取苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ和苏丹红Ⅳ标准品各10mg

（精确至0.01mg），加入5mL三氯甲烷促溶，用乙腈定容至100mL，配制成100mg/L的储备液，于

4℃冰箱中冷藏保存。

4.4.2混合标准中间溶液（1mg/L）：准确量取100mg/L标准储备液1mL至100mL容量瓶中，用乙

腈定容至刻度，充分摇匀，得到浓度为1mg/L的标准中间溶液。

4.4.3混合标准使用溶液：准确量取1mg/L标准中间溶液0.1mL、0.5mL、1mL、2mL、5mL、10mL

至100mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，充分摇匀，得到浓度为1μg/L、5μg/L、10μg/L、20μg/L、

50μg/L、100μg/L的系列标准使用液。

5仪器和设备

5.1超高效液相质谱仪：配电喷雾离子源（ESI）。

5.2电子天平：感量为0.1mg和0.01mg。

5.3漩涡混匀器。

5.4凝胶净化色谱仪（GPC）。

6试验步骤

6.1试样提取

称取样品0.1g（精确至0.1mg）于25mL容量瓶中，加入环己烷—乙酸乙酯：1+1（体积比）定容，

超声溶解，摇匀。上清液过0.45μm有机滤膜后作待净化液。

6.2试样净化

取待净化液于GPC样品管中，进行GPC净化，进样量5mL，收集洗脱液，于40℃下旋转蒸发至干。

残渣用2mL乙腈超声溶解，过0.22μm有机滤膜，待测。

凝胶渗透色谱净化参考条件如下：

a)凝胶渗透色谱净化系统；

b)凝胶柱规格400mm×25mm（内径）；

c)色谱柱填料Bio-BeadsS-X3（38～75μm），50g；

d)流动相：环己烷—乙酸乙酯：1+1（体积比）；

e)流速：5mL/min；

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f)收集时间：25～37min（具体时间以实际标样为准）。

6.3色谱质谱参考条件

6.3.1色谱参考条件

色谱参考条件如下：

a)色谱柱：C18色谱柱（2.1mm×50mm，1.7μm），或性能相当者；

b)流动相：A0.1%甲酸乙腈，B0.1%甲酸水溶液，线性梯度洗脱条件见表1；

c)流速：0.35mL/min；

d)柱温：35℃；

e)进样量：10μL。

表1梯度洗脱条件

时间（min）A(%)B（%）

0.07030

0.57030

18020

5.58020

5.61000

71000

7.17030

87030

6.3.2质谱参考条件

质谱参考条件如下：

a)电离方式：ESI+；

b)离子源温度120℃；

c)脱溶剂温度420℃；

d)毛细管电压1.0kv，；

e)脱溶剂气体流速700L/h；

f)碰撞气体流速0.27mL/min；

定性定量离子、碰撞电压、驻留时间见表2。

表2定性定量离子、碰撞电压、驻留时间

化合物母离子子离子锥孔电压V碰撞电压V驻留时间（s）

93.135250.350

苏丹红Ⅰ249.2

156.135250.350

121.125200.450

苏丹红Ⅱ277.2

156.125200.450

7735250.450

苏丹红Ⅲ353.2

197.135250.450

91.127200.350

苏丹红Ⅳ381.2

224.227200.350

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6.4测定

6.4.1定性

按照液相色谱质谱/质谱条件测定样液和标准工作溶液，外标标准曲线法测定样液中苏丹红的含量。

样品中待测物含量应在标准曲线范围之内，如果含量超出标准曲线范围，应用空白溶剂进行适当稀释。

在上述色谱条件下，苏丹红的质量色谱峰保留时间分别约为1.4min、2.1min、2.7min、4.6min。在

相同试验条件下，样品与标准工作液中待测物质的质量色谱峰相对保留时间在2.5%以内，并且在扣除背

景后的样品质量色谱图中，所选择的离子对均出现，同时与标准品的相对丰度允许偏差不超过表3规定

的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。四种苏丹红的液相色谱-质谱总离子流图见附录A。

表3使用液相色谱质谱/质谱定性时相对离子丰度最大允许误差

相对丰度（基峰）/%相对离子丰度最大允许误差/%

＞50±20

大于20至小于等于50±25

大于10至小于等于20±30

小于等于10±50

6.4.2定量

以标准样品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，制作标准曲线，从标准曲线图中查出试样溶液中苏丹

红的相应含量。

7试验结果

辣椒提取物中苏丹红（苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ和苏丹红Ⅳ）含量X按式（1）计算。

cV

X………………（1）

M

式中：

X——辣椒提取物中苏丹红的含量，单位为微克每千克（μg/kg）；

c——从标准工作曲线查出的试样溶液中苏丹红的浓度，单位为微克每升（μg/L）；

V——样品的最终稀释体积，单位为毫升（mL）；

M——试样质量，单位为克（g）。

计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留至