血脂含量测定实验标准操作流程

血脂含量测定实验标准操作流程引言血脂水平是评估心血管疾病风险、代谢性疾病诊断的核心指标，准确的血脂测定依赖标准化操作流程（SOP）。本SOP整合临床检验规范与实验室实践经验，明确从样本采集到结果报告的全流程操作要求，确保实验结果的准确性、重复性与可比性。一、实验原理血脂主要包含总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）等成分，临床常用酶法进行定量测定：总胆固醇（TC）测定：胆固醇酯在胆固醇酯酶作用下分解为游离胆固醇，后者经胆固醇氧化酶氧化生成胆甾烯酮和过氧化氢（H₂O₂）；H₂O₂在过氧化物酶催化下，与显色底物（如4-氨基安替比林、酚类）反应生成有色醌亚胺化合物，吸光度与胆固醇浓度正相关。甘油三酯（TG）测定：甘油三酯经脂蛋白酯酶水解为甘油和游离脂肪酸，甘油在甘油激酶、甘油-3-磷酸氧化酶作用下生成H₂O₂，后续显色反应同胆固醇测定，吸光度反映甘油三酯浓度。高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）测定：通过化学沉淀法（如磷钨酸-镁离子）沉淀非HDL脂蛋白，上清液中HDL-C经酶法测定；或采用选择性抑制法，特异性抑制非HDL脂蛋白的酶促反应，直接测定HDL-C。低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）测定：多采用“Friedewald公式”（LDL-C=TC-HDL-C-TG/5）估算（TG＜4.52mmol/L时适用），或通过选择性清除法、直接酶法测定。二、试剂与仪器准备（一）试剂1.校准品：采用与临床实验室标准一致的溯源性校准品（如可溯源至参考方法的冻干/液态校准品），2-8℃避光保存，复溶后24小时内使用。2.质控品：包含低、中、高三个浓度水平的质控血清，2-8℃保存，复溶后按说明书规定时间内使用，每次实验需同步测定质控品。3.酶试剂：总胆固醇酶试剂、甘油三酯酶试剂、HDL-C/LDL-C测定试剂，2-8℃避光保存，避免反复冻融，使用前平衡至室温。4.辅助试剂：磷钨酸-镁溶液（HDL-C沉淀法用）、生理盐水（仪器清洗用）等。（二）仪器1.全自动生化分析仪：提前1小时开机预热，每日进行波长校准、加样精度验证（通过校准品或质控品吸光度重复性判断）。2.离心机：转速≥3000r/min，温度可控（4℃优先），用于血清分离。3.移液器：量程覆盖10μL-1mL，定期校准（每月一次），使用无酶吸头避免污染。4.冰箱：2-8℃及-20℃冰箱，分别用于试剂/样本短期、长期保存。三、样本采集与处理（一）患者准备受检者需空腹（禁食8-12小时，可饮水），采血前24小时避免高脂饮食、剧烈运动、饮酒，停用影响血脂的药物（如他汀类需遵医嘱）。（二）采血操作1.静脉采血：采用一次性真空采血管（普通管或促凝管，避免使用肝素抗凝管，因肝素可能干扰酶活性），采集5mL静脉血。2.血清分离：采血后室温静置30分钟（促凝管）或60分钟（普通管）待血液凝固，4℃、3000r/min离心10分钟，分离血清（避免溶血、脂血，若血清浑浊需4℃静置过夜后再次离心）。（三）样本保存新鲜血清应在4小时内完成测定；若需延迟测定，可将血清转移至无酶冻存管，-20℃保存（≤1周）或-80℃保存（≤3个月），复融后充分混匀，避免反复冻融。四、实验操作流程（一）测定前准备1.试剂装载：将校准品、质控品、酶试剂按仪器说明书装载至相应位置，确认试剂体积、有效期及批号。2.仪器参数设置：根据试剂说明书设置反应温度（37℃）、反应时间（通常10-15分钟）、波长（如胆固醇测定用500nm，甘油三酯用546nm）、加样量（样本/试剂体积比通常为1:10-1:20）。（二）校准与质控1.校准：使用溯源性校准品进行两点或多点校准，确保校准曲线相关系数（r）≥0.999，校准后仪器自动生成校准因子。2.质控：每批次实验（或每20个样本）测定低、中、高浓度质控品，质控结果需在±2SD范围内（室内质控允许范围）；若失控，需重新校准仪器、更换试剂或检查样本，重新测定质控品至合格。（三）样本测定1.加样顺序：按“校准品→质控品→样本”顺序测定，避免交叉污染；若采用全自动分析仪，可设置样本架自动进样。2.反应与读数：样本与试剂混合后，仪器自动监测吸光度变化，根据校准曲线计算血脂浓度。3.特殊样本处理：脂血样本（TG＞4.52mmol/L）需稀释（生理盐水1:1稀释）后重新测定，结果乘以稀释倍数；溶血样本（血红蛋白＞5g/L）需重新采集。五、质量控制要点（一）室内质控1.质控品选择：使用与临床样本基质相似的质控血清，覆盖参考范围低、中、高值。2.质控频率：每批次实验（或每8小时）测定一次质控品，绘制Levey-Jennings质控图，观察趋势变化（如连续3个点偏向一侧，提示系统误差）。（二）室间质评1.定期参加国家级/省级室间质评计划，将测定结果与靶值比较，偏倚需≤10%（TC、HDL-C）或≤15%（TG、LDL-C）。2.若室间质评不合格，需分析原因（如试剂批号更换、仪器故障），优化操作流程后重新测试。六、注意事项1.试剂管理：酶试剂避免阳光直射，开封后2-8℃保存不超过4周，定期检查试剂是否浑浊、变色。2.操作规范：移液器吸液时避免气泡，样本与试剂混合均匀；实验结束后及时清洗仪器管路，防止试剂残留结晶。3.安全防护：佩戴手套、护目镜，避免血清接触皮肤/黏膜；医疗废物（如采血管、吸头）按生物安全规范处理。七、结果分析与报告（一）参考范围（酶法）总胆固醇（TC）：＜5.20mmol/L（合适水平），5.20-6.20mmol/L（边缘升高），≥6.20mmol/L（升高）；甘油三酯（TG）：＜1.70mmol/L（合适水平），1.70-2.30mmol/L（边缘升高），≥2.30mmol/L（升高）；高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）：≥1.04mmol/L（合适水平），＜1.04mmol/L（降低）；低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）：＜3.40mmol/L（合适水平），3.40-4.10mmol/L（边缘升高），≥4.10mmol/L（升高）。（二）结果报告明确标注