继代增殖培养方式详解

继代增殖培养主讲：姜放军一、什么是继代培养？（一）概念

将诱导产生的芽、苗、愈伤组织、原球茎或胚状体等培养物重新分割，接种到新鲜培养基上进一步扩大培养的过程称为继代培养，也称为增殖培养。继代过程是植物组织培养中决定繁殖速度快慢、繁殖系数高低的关键阶段。继代培养基几乎完全相同。二、继代增殖方式（一）无菌短枝型

1.概念：将顶芽或腋芽萌发伸长形成的多节茎段嫩枝，剪成带1~2枚叶片的单芽或多芽茎段，接种到继代培养基进行培养的方法。2.特点：培养过程简单，适用范围广，移栽容易成活，遗传性状稳定，如马铃薯、葡萄、刺槐、山芋等即可此种方式增殖。1.5cm二、继代增殖方式（二）丛生芽增殖型

1.概念：将顶芽或腋芽萌发形成的丛生芽分割成单芽，接种到继代培养基进行培养的方法。2.特点：不经过愈伤组织的再生，是最能使无性系后代保持原品种特性的一种增殖方式，而且成苗速度快，繁殖量大，适合于大规模的商业化生产。二、继代增殖方式（三）不定芽增殖型

1.概念：将能再生不定芽的器官或愈伤组织块分割，接种到继代培养基进行培养的方法。不定芽形成的数量与腋芽无关，其增殖率高于丛生芽方式。2.特点：再生的植株在遗传上的稳定性较差，而且随着继代次数的增加，愈伤组织再生植株的能力会下降，甚至完全消失。二、继代增殖方式（四）原球茎增殖型

1.概念：将原球茎切割成小块，也可以给予针刺等损伤，或在液体培养基中振荡培养，来加快其增殖进程。2.特点：如蝴蝶兰组培苗的培养。二、继代增殖方式总结：

一种植物的增殖方式不是固定不变的，有的植物可以通过多种方式进行无性扩繁。如葡萄可以通过多节茎段和丛生芽方式进行繁殖；蝴蝶兰可以通过原球茎和丛生芽方式进行繁殖。生产中，具体应用哪一种方式进行，主要看他们的增殖系数、增殖周期、增殖后芽的稳定性及适宜生产操作等因素而定。三、继代增殖方式影响因素及提高继代增殖措施

（一）继代增殖影响因素1、植物材料

不同种类的植物，同种植物不同品种，同一植物不同器官和不同部位，继代组织能力各不相同。

一般是草本>木本；被子植物>裸子植物；年幼材料>老年材料；刚分离组织>已继代的组织；胚>营养组织；芽>胚状体>愈伤组织。

在以腋芽或不定芽增殖继代的植物中，在培养许多代之后仍然保持着旺盛的增殖能力，一般较少出现再生能力丧失。三、继代增殖方式影响因素及提高继代增殖措施

（一）继代增殖影响因素2、培养基

在培养基的配制和使用上，一定要多样化，否则会造成一些品种因为生长调节剂过高或过低而严重影响繁殖和生长。另外，在同一品种上，适当调整培养基中生长调节剂的浓度也是非常重要的，其目的的主要是为了保证种苗的质量，同时又可以维持一定的繁殖基数。

一些植物经长期继代培养，在开始继代培养中需要加入生长调节剂，经过几次继代后，加入少量或不加生长调节剂也可以生长。如在胡萝卜薄壁组织初代培养中加入10-6mol/LIAA才能达到最大生长量，但在继代培养10代以后，不加IAA的培养基上也可达到同样生长量。在兰科植物原球茎继代培养中情况也相同。三、继代增殖方式影响因素及提高继代增殖措施

（一）继代增殖影响因素3、培养条件

喜欢冷凉的植物，以20℃左右较好，热带作物需在30℃左右的条件下才能获得较好的生长。如香石竹在18-25℃随温度降低生长速度减慢，但苗的质量显著提高，玻璃化现象减少，高于25℃时，引起苗徒长细弱，玻璃化或半玻璃化苗明显增加。桉树继代培养苗，总在23-25℃条件下培养，芽就会逐渐死亡，但如果每次继代培养时，先在15℃下培养3d，再转至25℃下培养，生长良好。三、继代增殖方式影响因素及提高继代增殖措施

（一）继代增殖影响因素4、继代周期

如满天星、非洲紫罗兰等，继代时间比较短，一般不超过15d。生长速度比较慢的种类如非洲菊、红掌等，继代时间就要长一些，30-40d继代1次。

继代时间也不是一成不变的，要根据培养目的、环境条件及所使用的培养基配方进行考虑。在前期扩繁阶段，为了加快繁殖速度，当苗刚分化时就切割继代，而无需待苗长到很大时才进行继代。后期在保持一定繁殖基数的前提下，进行定量生产时，为了有更多的大苗可以用来生根，可以间隔较长的时间继代，达到既可以维持一定的繁殖量，又可以提高组培苗质量的目的。三、继代增殖方式影响因素及提高继代增殖措施

（一）继代增殖影响因素5、继代次数

继代次数对繁殖率的影响因培养材料而异。有些植物如葡萄、月季和倒挂金钟等，长期继代可保持原来的再生能力和增殖率。有些植物则随继代次数而增加变异频率，如继代5次的香蕉不定芽变异频率为2.14%，继代10次后为4.2%，因此香蕉组培苗继代培养不能超过1年。还有一些植物长期继代培养，会逐渐衰退，丧失形态发生能力。具体表现为生长不良，再生能力和增殖率下降等。三、继代增殖方式影响因素及提高继代增殖措施

（二）提高继代增殖措施1、选用最佳的培养基（1）促进腋芽形成与生长调节物质。（2）诱导不定芽的形成与生长调节物质：一般使用细胞分裂素的浓度高于生长素浓度的配比，但也经常采用细胞分裂素和生长素浓度的比值接近于1的配比。（3）促进胚状体的形成和增殖与生长调节物质：在含有丰富还原氮的培养基上，加有生长素，特别是2，4-D以诱导胚状体的发生，然后转移到降低浓度或没有生长素的培养基上使其成熟、萌发和生长。三、继代增殖方式影响因素及提高继代增殖措施

（二）提高继代增殖措施2、改善培养环境条件（1）温度：大多数植物最适的培养温度在23～32℃之间，常用25℃±2℃的温度。一般低于15℃培养的组织生长出现停顿，而高于35℃对生长也不利（2）光照：一般认为1000～5000Lx即可满足其需要。（3）湿度：一般要求70%∽80%的相对湿度，过低应洒水，过高应通风除湿。三、继代增殖方式影响因素及提高继代增殖措施

（三）继代增殖注意问题1、分化再生能力衰退现象（1）经多次继代后，会逐渐减少或丧失愈伤组织中含有从外植体启动分裂时就包括分生组织，导致维管束难以形成，只能保持无组织的细胞团。衰退可能也与内源生长调节物质的减少或丧失有关。（2）可能是细胞不正常染色体聚集导致形态发生能力的丧失。（3）植物材料（4）培养基及培养条件（5）继代培养次数（6）季节

三、继代增殖方式影响因