DB35-T 884-2009 鳗鲡肌肉中阿苯达唑、阿苯达唑亚砜和阿苯达唑砜残留量的测定 高效液相色谱法

DB35T8842009鳗鲡肌肉中阿苯达唑、阿苯达唑亚砜和阿苯达唑砜残留量的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了鳗鲡肌肉中阿苯达唑、阿苯达唑亚砜和阿苯达唑砜残留量测定的高效液相色谱法。本标准适用于鳗鲡肌肉中阿苯达唑、阿苯达唑亚砜和阿苯达唑砜残留量的测定。本方法的检出限：阿苯达唑为0.01mg/kg，阿苯达唑亚砜为0.01mg/kg，阿苯达唑砜为0.01mg/kg。2原理试样中的阿苯达唑、阿苯达唑亚砜和阿苯达唑砜用乙腈提取，经正己烷除脂，HLB固相萃取柱净化，高效液相色谱紫外检测器测定，外标法定量。3试剂和材料除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。3.1乙腈：色谱纯3.2甲醇：色谱纯3.3正己烷：分析纯3.4甲酸：分析纯3.50.1%甲酸水溶液：取1mL甲酸，用水定容至1000mL，混匀。3.6乙腈水溶液（3+7，V/V）：取30mL乙腈，加入70mL水，混匀。3.7阿苯达唑标准品：纯度≥98%3.8阿苯达唑亚砜标准品：纯度≥98%3.9阿苯达唑砜标准品：纯度≥98%3.10标准储备液：分别准确称取阿苯达唑、阿苯达唑亚砜和阿苯达唑砜标准品各10.0mg，用乙腈溶解并定容至100mL，配制成100μg/mL的标准储备液，18℃避光保存，有效期3个月。3.11混合标准工作液：分别吸取适量阿苯达唑、阿苯达唑亚砜和阿苯达唑砜标准储备液，用乙腈水溶液（3+7，V/V）稀释成系列浓度的混合标准工作液，现用现配。3.12HLB固相萃取柱：200mg/6mL，或相当者。3.13微孔滤膜：0.22μm，有机相。4仪器和设备4.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。4.2分析天平：感量0.0001g和0.01g。4.3均质器：转速不低于10000r/min。4.4离心机：转速不低于4000r/min。4.5氮吹仪。4.6涡旋混合器。4.7固相萃取装置。4.8超声波清洗器。4.9pH计：精度±0.02。4.10有机相滤膜：0.22μm。4.11容量瓶：10mL、25mL、50mL、100mL。4.12移液器：100μL、200μL、500μL、1000μL。4.13离心管：50mL聚丙烯离心管。5试样制备与保存5.1试样制备5.2试样保存6分析步骤6.1提取称取5.0g（精确至0.01g）均质后的试样于50mL离心管中，加入10mL乙腈，涡旋混合2min，超声提取10min，以4000r/min离心5min。将上清液转移至另一50mL离心管中。残渣再加入10mL乙腈，重复提取一次，合并上清液。6.2净化6.2.1液液萃取向合并的上清液中加入10mL正己烷，涡旋混合2min，以4000r/min离心5min，弃去上层正己烷层。重复操作一次，弃去上层正己烷层。将下层乙腈相转移至50mL烧杯中，在40℃水浴中用氮吹仪浓缩至近干。6.2.2固相萃取净化HLB固相萃取柱依次用5mL甲醇、5mL水活化。将上述浓缩残渣用5mL水溶解，转移至已活化的HLB固相萃取柱中，控制流速不超过1mL/min。依次用5mL水和5mL5%甲醇水溶液淋洗，抽干。用5mL甲醇洗脱，收集洗脱液于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀。经0.22μm有机相滤膜过滤，供高效液相色谱测定。6.3测定a)色谱柱：C18柱，250mm×4.6mm，5μm，或相当者；b)流动相：乙腈0.1%甲酸水溶液，梯度洗脱程序见表1；c)流速：1.0mL/min；d)柱温：30℃；e)检测波长：292nm；f)进样量：20μL。表1梯度洗脱程序|时间/min|乙腈/%|0.1%甲酸水溶液/%||||||0|20|80||10|50|50||15|80|20||20|20|80||25|20|80|6.3.2标准曲线的绘制分别吸取适量混合标准工作液，按6.3.1的色谱条件进行测定，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。6.3.3样品测定取6.2.2处理后的样品溶液，按6.3.1的色谱条件进行测定，记录峰面积，根据标准曲线计算样品中阿苯达唑、阿苯达唑亚砜和阿苯达唑砜的含量。6.4空白试验除不称取试样外，按上述步骤进行空白试验。7结果计算试样中阿苯达唑、阿苯达唑亚砜和阿苯达唑砜的残留量按式（1）计算：X=(c×V)/m式中：X——试样中待测组分的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；c——从标准曲线上查得的待测组分浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；V——试样最终定容体积，单位为毫升（mL）；m——试样质量，单位为克（g）。计算结果保留两位有效数字。8精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。9回收率本方法在添加浓度为0.01mg/kg~0.50mg/kg时，阿苯达唑、阿苯达唑亚砜和阿苯达唑砜的回收率范围为70%~120%。10色谱图阿苯达唑、