SZDB-Z 323-2018 水产品养殖水中21种磺胺类、氯霉素类、四环素类、硝基呋喃类、喹诺酮类和孔雀石绿的测定高效液相色谱-串联质谱法

SZDBZ3232018水产品养殖水中21种磺胺类、氯霉素类、四环素类、硝基呋喃类、喹诺酮类和孔雀石绿的测定高效液相色谱串联质谱法本标准规定了水产品养殖水中21种磺胺类、氯霉素类、四环素类、硝基呋喃类、喹诺酮类和孔雀石绿残留量的高效液相色谱串联质谱测定方法。本标准适用于养殖水体中上述多类抗生素及禁用药物的同时定性定量分析。本标准所涉及的21种目标化合物包括：磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺甲氧嘧啶、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基异噁唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺苯吡唑、氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素、四环素、金霉素、土霉素、强力霉素、呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林、恩诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星、二氟沙星、达氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、培氟沙星、洛美沙星、孔雀石绿及其隐色代谢物。本标准的方法原理为：水样经固相萃取柱富集净化后，采用高效液相色谱串联质谱法进行分离检测，以保留时间和特征离子对进行定性，以外标法或内标法进行定量。方法具有灵敏度高、选择性好、分析速度快等特点，能够满足养殖水体中痕量药物残留的监测需求。本标准所用的试剂和材料除另有规定外，均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。2.1试剂2.1.1甲醇：色谱纯。2.1.2乙腈：色谱纯。2.1.3甲酸：色谱纯，纯度≥98%。2.1.4乙酸铵：色谱纯，纯度≥99%。2.1.5氨水：分析纯，含量25%~28%。2.1.6乙二胺四乙酸二钠（EDTA2Na）：分析纯。2.1.7柠檬酸：分析纯。2.1.8氢氧化钠：分析纯。2.1.9盐酸：分析纯。2.2标准品2.2.1磺胺类标准品：磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺甲氧嘧啶、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基异噁唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺苯吡唑，纯度≥95%。2.2.2氯霉素类标准品：氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素，纯度≥98%。2.2.3四环素类标准品：四环素、金霉素、土霉素、强力霉素，纯度≥95%。2.2.4硝基呋喃类标准品：呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林，纯度≥95%。2.2.5喹诺酮类标准品：恩诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星、二氟沙星、达氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、培氟沙星、洛美沙星，纯度≥98%。2.2.6孔雀石绿标准品：孔雀石绿及隐色孔雀石绿，纯度≥95%。2.3标准溶液配制2.3.1单一标准储备液：分别准确称取各标准品10.0mg（精确至0.1mg），用甲醇溶解并定容至10mL，配制成1000mg/L的单一标准储备液，于18℃避光保存，有效期6个月。2.3.2混合标准中间液：分别吸取适量各单一标准储备液，用甲醇稀释成10mg/L的混合标准中间液，于4℃避光保存，有效期1个月。3仪器和设备3.1高效液相色谱串联质谱仪：配电喷雾离子源（ESI）。3.2分析天平：感量0.1mg和0.01mg。3.3固相萃取装置。3.4氮吹仪。3.5涡旋混合器。3.6离心机：转速≥4000r/min。3.7超声波清洗器。3.8pH计：精度±0.02。3.9固相萃取柱：HLB柱，200mg/6mL或相当者。3.10微孔滤膜：0.22μm，有机相型。4样品采集与保存4.1样品采集用洁净的棕色玻璃瓶采集养殖水样品，采样量不少于500mL。采样时避免阳光直射，采样后立即密封，贴上标签，注明采样地点、日期和时间。4.2样品保存5分析步骤5.1样品前处理5.1.2柱子净化：依次用5mL水和5mL甲醇水（5:95，v/v）淋洗固相萃取柱，抽干5min。5.1.3洗脱：用6mL甲醇洗脱，收集洗脱液于10mL离心管中。5.1.4浓缩：将洗脱液在40℃水浴中氮吹至近干，用1.0mL甲醇水（1:9，v/v）溶解残渣，涡旋混匀，经0.22μm微孔滤膜过滤后供仪器分析。5.2仪器条件5.2.1色谱条件色谱柱：C18柱，2.1mm×100mm，1.7μm或相当者；柱温：40℃；流动相：A为0.1%甲酸水溶液，B为乙腈；流速：0.3mL/min；进样量：5μL；梯度洗脱程序：0min5%B，02min5%30%B，28min30%60%B，812min60%95%B，1215min95%B，1516min95%5%B，1620min5%B。5.2.2质谱条件离子源：电喷雾离子源（ESI）；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测（MRM）；毛细管电压：3.5kV；源温度：150℃；脱溶剂气温度：500℃；脱溶剂气流速：1000L/h；锥孔气流速：50L/h；碰撞气流速：0.15mL/min；各化合物的监测离子对、锥孔电压和碰撞能量见附录A。5.3定性定量分析5.3.1定性分析：在相同条件下，样品中目标化合物的保留时间与标准品的保留时间偏差在±2.5%以内，且监测离子对的相对丰度与标准品的相对丰度偏差在±30%以内，可判定为阳性。5.3.2定量分析：采用外标法或内标法定量，以目标化合物的峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算样品中目标化合物的含量。6结果计算样品中目标化合物的含量按式（1）计算：X=(C×V)/V₀式中：X——样品中目标化合物的含量，单位为微克每升（μg/L）；C——从标准曲线上查得的目标化合物浓度，单位为微克每升（μg/L）；V——样品最终定容体积，单位为毫升（mL）；V₀——取样体积，单位为毫升（mL）。计算结果保留三位有效数字。7精密度和准确度7.1精密度：在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。7.2准确度：本方法在添加浓度为0.1μg/L、0.5μg/L、2.0μg/L时，回收率范围为70%~120%。8检出限和定量限8.1检出限：本方法对21种磺胺类、氯霉素类、四环素类、硝基呋喃类、喹诺酮类和孔雀石绿的检出限均为0.03μg/L。8.2定量限：本方法对21种磺胺类、氯霉素类、四环素类、硝基呋喃类、喹诺酮类和孔雀石绿的定量限均为0.1μg/L。9质量控制9.1空白试验：每批样品分析时应同时进行空白试验，空白试验结果应低于方法检出限。9.2平行样：每批样品应至少测定10%的平行样，平行样测定结果的相对偏差应小于20%。9.3加标回收：每批样品应至少测定10%的加标回收样品，加标回收率应在70%~120%范围内。附录A（规范性附录）21种目标化合物的监测离子对、锥孔电压和碰撞能量表A.121种目标化合物的监测离子对、锥孔电压和碰撞能量|化合物名称|母离子(m/z)|子离子(m/z)|锥孔电压(V)|碰撞能量(eV)||||||||磺胺嘧啶|251.0|156.0/108.0|25|20/25||磺胺噻唑|256.0|156.0/108.0|25|20/25||||