DB22-T 2268-2015 饲料中金刚烷胺的测定 液相色谱-质谱-质谱法

DB22T22682015饲料中金刚烷胺的测定液相色谱质谱质谱法本标准规定了饲料中金刚烷胺残留量的液相色谱质谱质谱测定方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和添加剂预混合饲料中金刚烷胺含量的测定。本方法的检出限为0.01mg/kg，定量限为0.03mg/kg。试样中的金刚烷胺经乙腈提取，固相萃取柱净化后，采用液相色谱质谱质谱法测定，外标法定量。本标准所使用的试剂除特殊注明外，均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。乙腈、甲醇为色谱纯，甲酸为优级纯。金刚烷胺标准品纯度≥98.0%。固相萃取柱为C18或HLB柱，规格为200mg/6mL。2原理试样中的金刚烷胺用乙腈提取，经固相萃取柱净化，去除杂质干扰。净化后的提取液用液相色谱质谱质谱仪进行测定，采用电喷雾离子源（ESI），在正离子模式下进行多反应监测（MRM），通过保留时间和特征离子对进行定性分析，外标法定量。3试剂与材料3.1乙腈（CH₃CN）：色谱纯。3.2甲醇（CH₃OH）：色谱纯。3.3甲酸（HCOOH）：优级纯。3.4水：GB/T6682规定的一级水。3.50.1%甲酸水溶液：取1mL甲酸，用水定容至1000mL，混匀。3.60.1%甲酸乙腈溶液：取1mL甲酸，用乙腈定容至1000mL，混匀。3.7金刚烷胺标准品（C₁₀H₁₇N）：纯度≥98.0%。3.8金刚烷胺标准储备液（100μg/mL）：准确称取10.0mg金刚烷胺标准品于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀。该溶液在4℃条件下可保存3个月。3.9金刚烷胺标准工作液：用甲醇将金刚烷胺标准储备液逐级稀释成1.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、50.0μg/mL、100.0μg/mL的标准工作液。该溶液在4℃条件下可保存1个月。3.10固相萃取柱：C18或HLB柱，200mg/6mL，或相当者。3.11微孔滤膜：0.22μm，有机相。4仪器与设备4.1液相色谱质谱质谱联用仪：配电喷雾离子源（ESI）。4.2分析天平：感量0.0001g和0.01g。4.3涡旋混合器。4.4离心机：转速≥4000r/min。4.5氮吹仪。4.6固相萃取装置。4.7超声波清洗器。4.8pH计：精度±0.02。5试样制备取代表性样品约500g，用粉碎机粉碎，全部通过0.45mm筛网，混匀，装入洁净容器中，密封并标记，于室温下避光保存。6分析步骤6.1提取称取5.0g（精确至0.01g）试样于50mL离心管中，加入20mL乙腈，涡旋混合2min，超声提取15min，以4000r/min离心5min。将上清液转移至另一离心管中。残渣重复提取一次，合并上清液，于40℃水浴中氮吹浓缩至近干，用5mL0.1%甲酸水溶液溶解残渣，待净化。6.2净化将固相萃取柱依次用5mL甲醇、5mL水活化，将上述提取液过柱，用5mL水淋洗，抽干。用5mL甲醇洗脱，收集洗脱液，于40℃水浴中氮吹浓缩至近干，用1.0mL0.1%甲酸乙腈溶液溶解残渣，过0.22μm微孔滤膜，供液相色谱质谱质谱测定。6.3.1液相色谱条件a)色谱柱：C18柱，2.1mm×100mm，1.7μm，或相当者；b)流动相：A为0.1%甲酸水溶液，B为0.1%甲酸乙腈溶液；c)梯度洗脱程序：0min时5%B，0~5min线性变化至95%B，5~7min保持95%B，7.1min回到5%B，平衡3min；d)流速：0.3mL/min；e)柱温：30℃；f)进样量：5μL。6.3.2质谱条件a)离子源：电喷雾离子源（ESI）；b)扫描方式：正离子扫描；c)检测方式：多反应监测（MRM）；d)电喷雾电压：5500V；e)雾化气压力：50psi；f)干燥气温度：550℃；g)干燥气流速：10L/min；h)金刚烷胺定性离子对：m/z152.1>135.1（碰撞能量20eV）、152.1>107.1（碰撞能量35eV）；i)定量离子对：m/z152.1>135.1。6.4标准曲线的制备分别吸取适量金刚烷胺标准工作液，用0.1%甲酸乙腈溶液稀释成浓度为1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL的标准系列溶液，按6.3条件进行测定，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。6.5测定在相同条件下，对试样溶液和标准溶液分别进行测定，根据保留时间和特征离子对定性，标准曲线法定量。7结果计算试样中金刚烷胺的含量按式（1）计算：X=(C×V×1000)/(m×1000)（1）式中：X——试样中金刚烷胺的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；C——从标准曲线上查得的试样溶液中金刚烷胺的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；V——试样溶液最终定容体积，单位为毫升（mL）；m——试样