DB34∕T 821-2024 动物组织中氯霉素的残留测定－酶联免疫吸附法

ICS67.120

CCSX00

34

安徽省地方标准

DB34/T821—2024

代替DB34/T821-2008

动物组织中氯霉素的残留测定－酶联免疫

吸附法

DeterminationofchloramphenicolresiduesinanimalanimaltissuesEnzyme-linked

immunosorbentassay

2024-04-15发布2024-05-15实施

安徽省市场监督管理局发布

.

DB34/T821—2024

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

本文件代替DB34/T821-2008《动物组织中氯霉素的残留测定－酶联免疫吸附法》，与DB34/T

821-2008相比，除结构调整和编辑性修改外，主要技术变化如下：

a)适用范围扩大至畜禽肌肉、肝脏、肾脏、尿液及禽蛋、鱼肉、虾肉中氯霉素残留的测定（见

第1章，2008版的第1章）；

b)更改了样品处理方法（见7.1，2008版的7.1）；

c)更改了测定步骤（见第8章，2008版的7.2）；

d)提高了灵敏度，方法检出限降低为：畜禽肌肉、肝脏、肾脏及禽蛋、鱼肉、虾肉中为0.02μg/kg，

动物尿液中为0.1μg/L（见10.1，2008版的9.1）。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由安徽省兽药饲料监察所提出。

本文件由安徽省农业农村厅归口。

本文件起草单位：安徽省兽药饲料监察所、安徽华澳生物技术有限公司、安徽中青检验检测有限公

司、安徽省水产技术推广总站、凤台县畜牧兽医局、宣城市农产品检测中心、霍邱县动物卫生监督所、

怀远县畜牧兽医技术推广中心、合肥市农业经济技术服务管理总站。

本文件主要起草人：许世富、吴昊、汪秀娟、王伟、颜秀梅、朱玉宜、桂德旺、陈斌、张成立、孙

德祥、易文。

本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为：

——2008年首次发布为DB34/T821-2008，2024年第一次修订。

I

DB34/T821—2024

动物组织中氯霉素的残留测定－酶联免疫吸附法

1范围

本文件规定了畜禽肌肉、肝脏、肾脏、尿液及禽蛋、鱼肉、虾肉中氯霉素残留量的酶联免疫吸附测

定方法。

本文件适用于畜禽肌肉、肝脏、肾脏、尿液及禽蛋、鱼肉、虾肉中氯霉素残留量的快速筛选测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

残留在动物组织、禽蛋或尿液中的氯霉素经乙酸乙酯提取，正己烷脱脂后用于酶联免疫测定。试样

中的氯霉素与包被于微孔板中的抗原同特异性抗体进行竞争性免疫反应，加入一定量的显色底物和终止

液，在450nm处测定吸光度值，在一定浓度范围内，试样中氯霉素的含量与吸光度大小成反比。换算

后可以获得样本中氯霉素的残留量。

5试剂和溶液

5.1除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682的二级水。

5.2氯霉素酶联免疫试剂盒，2℃～8℃冰箱中保存。

5.2.1微孔板：包被有氯霉素抗体。

5.2.2氯霉素标准工作液：浓度分别为：0μg/L、0.02μg/L、0.06μg/L、0.18μg/L、0.54μg/L、

1.62μg/L。

5.2.3抗体工作液。

5.2.4酶标记物工作液。

5.2.5浓缩样品稀释液。

5.2.6浓缩洗涤液。

5.2.7底物A液。

5.2.8底物B液。

5.2.9终止液。

5.3乙酸乙酯。

5.4正己烷。

5.5样品稀释液：取浓缩样品稀释液（5.2.5），用水按1：9（V/V）稀释，混匀。

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5.6洗涤工作液：取浓缩洗涤液（5.2.6），用水按1：19（V/V）稀释，混匀。

5.7底物A、B混合液：分别取底物A液（5.2.7）、底物B液（5.2.8），按1：1（V/V）充分混匀，在

5min内使用，避免搅拌，避免使用金属容器盛装。

6仪器设备

6.1酶标仪：450nm。

6.2分析天平：感量0.01g。

6.3匀浆机：≥10000rpm。

6.4离心机：≥5000g。

6.5振荡器。

6.6冰箱。

6.7氮吹仪。

6.8微量加样器及配套吸头：（单道20μL，50μL，100μL，多道50μL～300μL）。

7试样制备

7.1样品处理

7.1.1畜禽肌肉、肝脏、肾脏及鱼肉、虾肉

7.1.1.1畜禽肌肉、肝脏、肾脏，去筋膜；鱼去鳞去骨去内脏，取皮和肌肉部分；虾去头去壳去肠腺。

上述样品切成小块，制成糜状，10000rpm均质2min。

7.1.1.2取3g±0.05g均质样品，加入6mL乙酸乙酯（5.3），充分涡动2min，室温4000g

离心10min，取4mL上层乙酸乙酯层于新的离心管中，50℃～60℃水浴中，氮气吹干；残留物用2

mL正己烷（5.4）溶解，充分涡动10s，再加入1mL样品稀释液（5.5），低速涡动1min，4000g

以上离心5min，完全弃去上层正己烷及中间层杂质，下层水相备用。

7.1.2禽蛋

7.1.2.1禽蛋，去壳，将蛋清和蛋黄搅拌均匀。

7.1.2.2取3g±0.05g均质样品，加入6mL乙酸乙酯（5.3），充分涡动2min，室温4000g

离心10min，取4mL上层乙酸乙酯层于新的离心管中，50℃～60℃水浴中，氮气吹干；残留物用2

mL正己烷（5.4）溶解，充分涡动10s，再加入1mL样品稀释液（5.5），低速涡动1min，4000g

以上离心5min，完全弃去上层正己烷及中间层杂质，下层水相备用。

7.1.3尿液

取0.1mL新鲜样品（冷冻或冷藏样品恢复至室温），加入到0.3mL去离子水中，涡动10s混

匀，备用。

7.2样品贮存

将试样按照测试样和备用样分别于-20℃～-16℃条件下保存。

8测定步骤

8.1测定在室温（20℃～25℃）条件下操作，测定之前将试剂盒以及所有试剂恢复至室温（约1h～2

h）。

8.2按标准工作液和供试样品数量取孔条插入微孔架（5.2），标准工作液和供试样品做两孔平行，记

录下好对应的位置。

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8.3分别在各孔中加入50μL标准工作液（5.2.2）或7.1项下待测试样溶液，每孔加入50μL抗

体工作液（5.2.3），用盖板膜封板，轻轻振荡酶标板10s，充分混匀，室温下避光反应30min。

8.4揭开盖板膜，倾出板孔中的液体，在所有微孔中加260μL洗涤工作液（5.6），轻轻振荡酶标

板15s～30s，充分混匀，倾出微孔中的洗涤液，在吸水纸上拍干，彻底清除微孔中的残留液和气泡，

重复洗板4遍。

8.5每孔加100μL酶标记物工作液（5.2.4），用盖板膜封板，轻轻振荡酶标板10s，充分混匀，

室温下避光反应30min。

8.6重复步骤8.4，每孔加100μL底物A、B混合液（5.7），用盖板膜封板，轻轻振荡酶标板10

s，充分混匀，室温下避光反应15min～20min。

8.7揭开盖板膜，每孔加50μL终止液（5.2.9），轻轻振荡酶标板10s，充分混匀，5min内在

450nm下测定吸光度值。

9结果判定和表述

9.1用获得的标准工作液和供试样品溶液吸光度值的比值进行计算，见式（1）：

B

相对吸光度值（%）=100%………………（1）

B0

式中：

B——标准工作液或供试样品溶液的平均吸光度值；

B0——0浓度的标准工作液的平均吸光度值。

9.2将计算的相对吸光度值（%）对应氯霉素标准溶液浓度（µg/L）的自然对数作半对数坐标系统曲

线图，对应的试样浓度（A）可从校正曲线算出。尿液中的氯霉素残留量为A乘以稀释倍数4即得；动

物组织和禽蛋中氯霉素残留量结果计算见式（2）：

AVV1000

X13…………（2）

mV21000

式中：

X——供试样中氯霉素的含量，单位为微克/千克（µg/kg）；

A——供试样的相对吸光度值（%）对应的氯霉素的含量，单位为微克/升（µg/L）；

V1——提取用乙酸乙酯的总体积，单位为毫升(mL)；

V2——取出吹干的乙酸乙酯体积，单位为毫升(mL)；

V3——样品稀释液的体积，单位为毫升(mL)；

m——试样的取样量，单位为克（g）。

计算结果表示到小数点后三位。

9.3检测结果小于检出限时判为未检出，大于或等于检出限时，应使用色谱质谱联用法进行确认。

10检测方法灵敏度、准确度、精密度

10.1灵敏度

本方法在畜禽肌肉、肝脏、肾脏及禽蛋、鱼肉、虾肉中的检出限为0.02μg/