DB41T 1103-2015 太行菊组织培养技术规程

DB41河南省质量技术监督局发布IDB41/T1103—2015本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由河南省林业标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位：郑州大学、河南省绿洲园林有限公司。本标准主要起草人：史屹峰、黄进勇、张建波、刘彬、赵志营、王景玉、李娇。本标准参加起草人：崔青艳、韩玉霞、乔林、张献计、王俊、复鹏、田小娟、李幸红、岳彩鹏、朱世新。DB41/T1103—20151太行菊组织培养技术规程本标准规定了太行菊组织培养的术语和定义、培养基的配制、组织培养、炼苗移栽。本标准适用于太行菊组织培养。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2.1太行菊太行菊(Opisthopapustaihangensis)，菊科菊蒿亚族太行菊属多年生宿根草本植物，中国太行山区特有珍稀物种。3培养基的配制3.1培养基选择选择MS培养基为基本培养基（MS培养基参见附录A）。3.2母液与激素的配制3.2.1大量元素母液的配制大量元素母液按50倍配制。使用时再稀释50倍，配好的母液放置于棕色瓶保存于4℃冰箱中备用。3.2.2微量元素母液的配制微量元素母液按100倍配制。使用时再稀释100倍，配好的母液放置于棕色瓶保存于4℃冰箱中备3.2.3有机母液的配制有机母液按100倍配制。使用时再稀释100倍，配好的母液放置于棕色瓶保存于4℃冰箱中备用。3.2.4铁盐母液的配制分别溶解FeSO4·7H2O和Na2-EDTA，加热并不断搅拌，使完全溶解，冷却后，将2种溶液混合，再用蒸溜水加至所需容积，按100倍配制。使用时再稀释100倍，配好的母液放置于棕色瓶保存于4℃冰箱中备用。3.2.56-苄氨基腺嘌呤配制称取100mg6-苄氨基腺嘌呤（6-BA），用少量0.1mol/LHCL加热溶解，再用蒸馏水定容至100mL,DB41/T1103—20152浓度为1.0mg/L。3.2.6萘乙酸配制称取10mg萘乙酸（NAA），用1mL无水乙醇溶解，再用蒸馏水定容至100mL，浓度为0.1mg/L。3.3培养基配方3.3.11/2MS基本培养基：1/2MS+30g/L白砂糖+10g/L琼脂条；3.3.2丛生芽诱导培养基：MS+0.1mg/LNAA+1.0mg/L6-BA+30g/L白砂糖+10g/L琼脂条；3.3.3生根培养基：1/2MS+0.2mg/LNAA+30g/L白砂糖+10g/L琼脂条；3.3.4无激素基本培养基：MS+30g/L白砂糖+10g/L琼脂条。3.4配制以配制10L培养基为例，按顺序进行如下操作：a)MS为基本培养基，取少量蒸馏水倒入容器内，除了大量元素母液取200mL外，其余母液均取100mL倒入容器内；1/2MS为基本培养基时；取少量蒸馏水倒入容器内，除了大量元素母液取100mL外，其余母液均取50mL倒入容器内；b)称取300g蔗糖倒入容器，搅拌溶解；c)加蒸馏水定容至10L；d)按照培养基配方，加入NAA和6-BA。丛生芽诱导培养基加10mLNAA和100mL6-BA；生根培养基加20mLNAA；e)称取100g琼脂条，倒入上面配好的溶液中，放在电炉上加热至沸腾，直到琼脂条熔化；f)稍微冷却后，用精密试纸或酸度计调整pH至5.7～5.8，分装；g)对分装好的培养基用高温高压蒸汽消毒，压力1.1kg/cm2、温度121℃条件下保持25min，待灭菌完成好，压力为0的时候取出培养基，平放在地面上冷却凝固。4组织培养4.1培养材料及消毒4.1.1培养材料的选择和确定10月底至11月初，采集当年饱满太行菊的种子作为培养材料，存放于4℃冰箱。4.1.2消毒灭菌将种子用自来水冲洗2h后，在超净工作台内用75%酒精漂洗15s，后用2%的次氯酸钠浸泡8min（加2滴聚山梨酯），蒸馏水冲洗2～3次。4.2无菌播种用无菌滤纸把种子表面附着的水分吸干净，然后在在超净工作台内用镊子将种子接种到1/2MS培养基上，置入温度为20℃~25℃光照培养室内诱导种子萌发，待种子发芽长出2片真叶，进行光照处理，光照强度2500lx，光照时间14h/d，培养30d～35d。4.3诱导及分化DB41/T1103—20153切除长出来的无菌幼苗根部部分，把得到的无菌苗茎接种到丛生芽诱导培养基上，放到光照培养室培养30d。4.4增殖继代培养将诱导出来的丛生芽分割成含2～3个小芽的芽丛，切去死叶和基部黄褐色疏松组织，继续接种到丛生芽诱导培养基上，放置于光照培养室进行增殖继代培养，30d为一个周期，如此循环。4.5培养环境温度为25℃±1℃,光照时间14h/d，光照强度2500lx,相对湿度70%～80%。4.6生根培养4.6.1生根苗的选择从组培苗中切取生长健壮、叶色正常、叶片舒展的无根苗。4.6.2诱导生根在超净工作台内，将无根苗上长至4cm以上的再生芽从基部切下，接种到生根培养基上，诱导根原基的形成，黑暗培养3d～5d。后将其接种到无激素MS培养基诱导根的伸长，光照培养20d～25d。5炼苗移栽5.1炼苗待根长至3cm时开始炼苗，将培养瓶放置温室自然散射光下，温度控制在25℃±1℃,闭口炼苗2d~3d，再打开瓶盖，加入3mL800倍多菌灵溶液，炼苗3d～5d。5.2移栽用镊子将生根苗从培养瓶中取出，洗去基部培养基，在800倍多菌灵溶液中浸泡30min后移栽到基质中。基质采用草炭土、蛭石、珍珠岩比例为3:1:1。温度25℃±1℃,前3d～4d相对湿度保持在80%～90%，后逐渐降低湿度，每天叶面喷水2～3次，当