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文档简介

原理鼠伤寒沙门氏菌野生型（原养型）人工方法正向诱变鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型（异养型）诱变物作用回复突变

Ames是检测遗传毒理学的体外试验，检测终点是基因突变通过统计回复突变的菌落数判断受试物质的致突变性高低S-9混合液的制备过程（使需要代谢激活的物质得以活化）25341暴露肝脏，KCL灌注断头处死大鼠、放血、去皮取出肝脏，加入KCL剪碎制成匀浆，9000g离心取上清、分装、冻存1实验用菌液制备

平板菌落计数法，是种统计物品含菌数的有效方法。方法如下：将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液涂布到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞；统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。2菌株性状鉴定（1）组氨酸营养缺陷型（2）深粗糙突变测定（3）R因子的鉴定（4）切除修复缺失鉴定（5）自发回变量测定（6）回变特性鉴定实验步骤与方法深粗糙（rfa）特性2紫外线敏感（UvrB）特性3抗氨苄青霉素（R因子）特性4回变特性鉴定6组氨酸需求特性1菌株特性鉴定自发回变特性51、组氨酸需求特性有细菌生长空白空白组氨酸-生物素赖氨酸空白37℃24h0.1ml菌液顶层底层菌株特性鉴定2、深粗糙（rfa）特性0.1ml菌液顶层普通培养基抑菌环滤纸片（有结晶紫）37℃24h菌株特性鉴定3、紫外线敏感特性普通培养基15W紫外灯33cm，8s37℃，24h菌株特性鉴定4、抗氨卞青霉素（R因子）特性37℃，24h青霉素普通培养基菌株特性鉴定5、自然回变特性0.1ml菌液顶层底层37℃，24h菌株特性鉴定菌株基因型组氨酸缺陷脂多糖屏蔽缺失抗氨卞西林抗四环素uvrB修复缺陷自发回变（-S9）TA97+++-+90-180TA98+++-+30-50TA100+++-+120-200TA102+++-+240-320Ames试验菌株特性6、回变特性鉴定0.1ml菌液0.1ml致突变物0.2-0.5mlS-9顶层底层37℃，24h菌株特性鉴定实验设计原则受试物最低剂量为每皿0.1μg一般选用4~5个剂量

每个剂量应做2或3个平行平皿

设立阳性对照和阴性（溶剂）对照

受试物最高剂量为每皿5mgAmes试验设计点试法将顶层培养基倒入底层培养基中，凝固后放入滤纸片，将受试物点在纸片上放入底层，37℃培养48h观察结果掺入法将受试物0.1ml、菌液0.1ml分别加入顶层培养基中，倒入底层培养基中，凝固后37℃培养48h观察结果Ames试验方法及结果评价点样纸片周围长出一圈密集的His+回变菌落者，受试物即为阳性致突变物质。背景菌

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