DB34∕T 3891-2021 蔬菜中腐霉利快速检测 胶体金免疫层析法

ICS67.080.20

CCSB31

34

安徽省地方标准

DB34/T3891—2021

蔬菜中腐霉利快速检测胶体金免疫层析法

RapiddetectionofprocymidoneinvegetablesColloidalgold

immunochromatographyassay

2021-06-08发布2021-07-08实施

安徽省市场监督管理局发布

DB34/T3891—2021

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由安徽省产品质量监督检验研究院提出。

本文件由安徽省市场监督管理局归口。

本文件起草单位：安徽省产品质量监督检验研究院、合肥工业大学、食品营养与安全研究中心、安

徽省食品药品检验研究院、杭州傲敏生物科技有限公司、江苏美正生物科技有限公司、安徽华测检测技

术有限公司。

本文件主要起草人：姚帮本、陈伟、姚丽、陈赵然、李云、闫超、童宁、郭佳佳、张居舟、祝红蕾、

陆乐、徐建国、乔东晴、吴基杰、庄琼、陶云峰、王相召、王平、王海翔、陆华进、高君、陈欣。

I

DB34/T3891—2021

蔬菜中腐霉利快速检测胶体金免疫层析法

1范围

本文件规定了蔬菜中腐霉利的胶体金免疫层析快速检测方法。

本文件适用于韭菜、番茄、茄子、辣椒、黄瓜、蘑菇类（鲜）中腐霉利的快速检测。

检测限：韭菜为0.2mg/kg；番茄、黄瓜为2mg/kg；茄子、辣椒、蘑菇类（鲜）为5mg/kg。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB2763食品安全国家标准食品中农药最大残留限量

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中残留的腐霉利与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了

抗体和检测线（T线）上包被原的结合，从而导致检测线（T线）颜色变浅或消失，通过检测线（T线）

与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中残留的腐霉利进行定性判定。

5试剂或材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯。

5.1水：应符合GB/T6682，二级水。

5.2腐霉利：纯度≥99％，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

5.3甲醇（CH3OH）

5.4氯化钠（NaCl）

5.5氯化钾（KCl）

5.6磷酸氢二钠（Na2HPO4）

5.7磷酸二氢钾（KH2PO4）

5.810％甲醇溶液：吸取10mL甲醇（5.3），用水（5.1）定容至100mL，混匀。

5.9稀释液：分别称取氯化钠（5.4）8g、氯化钾（5.5）0.2g磷酸氢二钠（5.6）1.44g、磷酸二

氢钾（5.7）0.24g于1000mL烧杯中，加水（5.1）充分搅拌溶解后定容至1000mL。

5.1010g/L的腐霉利标准储备液：准确称取腐霉利（5.2）0.1g（精确至0.0001g），用甲醇（5.3）

溶解，定容至10mL。-20℃冷冻避光保存，有效期12个月。

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DB34/T3891—2021

5.11200mg/L的腐霉利标准中间液：准确移取10g/L的腐霉利标准储备液（5.10）200μL至10mL

容量瓶中，甲醇（5.3）定容。4℃冷藏避光保存，有效期3个月。

5.122mg/L的腐霉利标准工作溶液：准确移取200mg/L的腐霉利标准中间液（5.11）100μL至10mL

容量瓶中，10％甲醇溶液（5.8）定容。4℃冷藏避光保存，有效期1个月。

6仪器和设备

6.1电子天平：感量分别为0.01g和0.01mg。

6.2移液器：20～200µL，100～1000µL，1～10mL。

6.3旋涡混合器。

6.4匀浆机。

6.5离心机：转速≥4000r/min。

6.6胶体金免疫层析检测试纸条。

6.7离心管：1.5mL、50mL。

7样品制备

7.1试样制备

蔬菜样品取样部位按GB2763的规定执行，将适量（约500g）待测样品切碎混匀均一化制成匀

浆备用。

7.2试样前处理

7.2.1韭菜

准确称取制备后试样2g(精确至0.01g)于50mL离心管中，加入稀释液（5.9）6.0mL，振荡

混匀2min，4000r/min室温离心2min，取上清液即为待测液。

7.2.2番茄、黄瓜

准确称取制备后试样2g(精确至0.01g)于50mL离心管中，加入稀释液（5.9）6.0mL，振荡

混匀2min，4000r/min室温离心2min，上清液备用。取1.5mL离心管，吸取900μL稀释液（5.9），

加入100μL上清液，混匀即为待测液。

7.2.3茄子、辣椒、蘑菇类（鲜）

准确称取制备后试样2g(精确至0.01g)于50mL离心管中，加入稀释液（5.9）6.0mL，振荡

混匀2min，4000r/min室温离心2min，上清液备用。取1.5mL离心管，吸取960μL稀释液（5.9），

加入40μL上清液，混匀即为待测液。

8测定

8.1所有操作需在室温下（20℃±5℃）进行。

8.2吸取100µL待测液于金标微孔中，上下抽吸5～10次，室温条件下进行孵育5min。将试纸条吸

水海绵端垂直向下插入金标微孔中，室温条件下反应6min。从微孔中取出试纸条，弃去试纸条下端的

样品垫，观察显色情况，进行结果判定。

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DB34/T3891—2021

8.3空白试验：称取空白试样，按照7和8.2的步骤同法操作。

8.4加标质控试验：准确称取空白试样2g（精确至0.01g）置于50mL离心管中，加入适量腐霉利

标准工作液（5.12），使待测液中腐霉利的终浓度为0.2mg/kg，按照7和8.2的步骤同法操作。

9结果分析

9.1结果判定

9.1.1无效

控制线（C线）不显色，表明操作不正确或试剂条无效。判定示意图见图1。

图1目视判定示意图

9.1.2阴性

检测线（T线）颜色比控制线（C线）颜色深或者检测线（T线）颜色与控制线（C线）颜色相当，表

明样品中腐霉利残留低于方法检测限，判定为阴性。判定示意图见图1。

9.1.3阳性

检测线（T线）不显色或检测线（T线）颜色比控制线（C线）颜色浅，表明样品中腐霉利残留的含

量高于方法检测限，判定为阳性。判定示意图见图1。

9.2质控试验要求

空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验测定结果应为阳性。否则表示不满足质控试验要求，此

批样品结果无效。

10性能指标

10.1灵敏度

灵敏度应≥95％。

10.2特异性

3

DB34/T3891—2021

特异性应≥95％。

10.3假阴性率

假阴性率应≤5％。

10.4假阳性率

假阳性率应≤5％。

注：性能指标计算方法见附录A。

4

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附录A

（资料性）

定性方法性能指标计算方法

表A.1性能指标计算表

检测结果b

样品情况a总数

阳性阴性

阳性N11N12N1.=N11+N12

阴性N21N22N2.=N21+N22

总数N.1=N11+N12N.2=N21+N22N=N1.+N2.或N.1+N.2

2

2=（|N12-N21|-1）/（N12+N21），

显著性差异（х2）

自由度（df）=1

灵敏度（p+，％）p+=N11/N1.

特异性（p-，％）