DB15∕T 3684-2024 蓖麻组织培养技术规程

ICS65.020.20

CCSB21

15

内蒙古自治区地方标准

DB15/T3684—2024

蓖麻组织培养技术规程

CodeofpracticefortissuecultureofRicinuscommunis

2024-09-27发布2024-10-27实施

内蒙古自治区市场监督管理局发布

DB15/T3684—2024

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。

本文件由内蒙古自治区农业标准化技术委员会（SAM/TC20）归口。

本文件起草单位：通辽市农牧科学研究所、内蒙古民族大学、淄博市农业科学研究院。

本文件主要起草人：韩雯毓、黄凤兰、何智彪、贾娟霞、李国瑞、刘鹏、乔文杰、曹文强、刘鸽、

莫徳乐吐、狄建军、罗蕊、杨云峰、曲毅鹏、周祎、王丹、张洪雨、崔凤娟、吕静波、黄前晶、邓志兰、

刘涵淼、李雅剑、贾兴田、齐金全、张超、柳妍娣。

I

DB15/T3684—2024

蓖麻组织培养技术规程

1范围

本文件规定了蓖麻组织培养过程中环境、器具及培养基消毒灭菌、培养基配制、组织培养、炼苗移

栽等技术要求。

本文件适用于蓖麻组织培养苗制备。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

母液motherliquor

按照培养基配方配制的高倍浓缩液。

外植体explant

用于植物组织培养中作为离体培养材料的器官或组织的片段。

子叶节cotyledonnode

胚轴与子叶间的连接点，位于胚轴的顶端。

4环境、器具及培养基消毒灭菌

准备室与接种室消毒

工作前或结束后，使用臭氧紫外灯照射1h。

培养室消毒

1

DB15/T3684—2024

每10d使用臭氧紫外灯照射消毒2h。如组培苗感染，应采用甲醛10mL/m3和高锰酸钾5g/m3（2：

1）混合薰蒸消毒，在密闭条件下熏蒸消毒20min～30min，消毒后要打开门窗通风换气。

超净工作台消毒灭菌

接种前臭氧紫外灯照射消毒20min，并用75%酒精喷洒消毒台面；定期清洗超净工作台的过滤膜。

器具灭菌

玻璃器具（三角瓶、培养皿）、金属器具（镊子、手术刀）采用高温高压蒸汽灭菌锅进行灭菌处理，

蒸气压力102.9kPa(1.05kg/cm2)，温度121℃，时间20min。

污染瓶消毒灭菌

有污染的培养容器用高温高压蒸汽灭菌锅进行灭菌，蒸气压力102.9kPa(1.05kg/cm2)，温度

121℃，时间60min。灭菌后去除培养基，用流水洗净后存放。

培养基消毒灭菌

使用高温高压蒸汽灭菌锅灭菌，蒸气压力102.9kPa(1.05kg/cm2)，温度121℃，时间20min。

植物激素ZT采用滤膜网孔直径0.45μm以下的微孔过滤灭菌器进行过滤灭菌。

5培养基配制

基本培养基

预培养、不定芽诱导、生根培养采用1/8MS基本培养基。

母液、激素配制与保存

5.2.1配制

将常用试剂配制成50～100倍的母液，按照GB/T603规定方法配制。所用激素均配制浓度为1mg/mL

的溶液，配制方法按照附录A的规定。

5.2.2保存

母液贴上标签，注明溶液名称、配制倍数、配制日期、配制者等信息，并于4℃条件下保存。贮藏

时间在3个月之内，如有霉菌和沉淀产生，则不应使用。

无菌苗培养基配制

在700mL蒸馏水中加入30g蔗糖与5.7g琼脂，蒸馏水定容至1L。搅拌均匀后分装到100mL的三角

瓶中，每瓶分装50mL。

预培养培养基配制

1/8MS+30g/L蔗糖+7.5g/L琼脂粉。搅拌均匀后分装到50mL的三角瓶中，每瓶分装20mL。

不定芽诱导培养基配制

1/8MS+8.0mg/LZT+30g/L蔗糖+7.5g/L琼脂粉。搅拌均匀后分装到50mL的三角瓶中，每瓶分装

20mL。

2

DB15/T3684—2024

生根培养基配制

1/8MS+1.0mg/LNAA+30g/L蔗糖+7.5g/L琼脂粉。

pH值调节

除无菌苗培养基外，上述基本培养基均需使用0.1mol/L的HCl或0.1mol/L的NaOH调节pH至5.8。

贮存

标明培养基编号、种类、配制日期，在4℃条件下贮藏备用，贮存时间不应超过1个月。

6组织培养

接种

6.1.1材料选择及灭菌处理

选择饱满的种子去壳后放入无菌的大烧杯中，在超净工作台中先用75%的酒精浸泡10s～20s，再

用2%的次氯酸钠消毒20min～30min，消毒期间充分搅拌，最后用无菌水洗4～6次，用滤纸吸干种子表

面的水分。

6.1.2培养方法

将处理后的蓖麻籽仁接种到无菌苗培养基上，每瓶接种18～22颗，培养6d～8d开始萌发。培养条

件为温度25℃、光照强度2000Lx、光照时间16h/d。

外植体制备

在子叶未形成前，胚根和胚轴总长约为3cm～5cm时，切取子叶节并将其一分为二作为外植体，垂

直插入预培养培养基上进行预培养。培养条件为温度25℃、光照强度2000Lx、光照时间16h/d。

不定芽诱导

将预培养7d的子叶节转入（切面插入）不定芽诱导培养基上进行芽诱导培养，每瓶接种6～8个，

培养25d～30d。培养条件为温度25℃、光照强度2000Lx、光照时间16h/d。

生根培养

将不定芽数大于2个的植株转入生根培养基上诱导根的再生，每瓶接种6～8个，培养条件为温度

25℃、光照强度2000Lx、光照时间16h/d。生根过程为25d～30d，根数1～5条即可炼苗移栽。

7炼苗移栽

炼苗

选择根芽发育良好的组培苗，打开三角瓶封口膜，室内炼苗2d～3d。

基质

蛭石、草炭土和田园土1:1:1混合，高压灭菌后装入花盆备用。

3

DB15/T3684—2024

移栽

取出组培苗，洗净根部培养基，栽入花盆中，浇水，室温、常规管理。待幼苗长至20cm时，移栽

至大田。

4

DB15/T3684—2024

A

A

附录A

（规范性）

激素的配制

激素的配制按照表A.1。

表A.1激素的配制

常用浓度

类别种类配制方法

mg/L

先用少量0.1mol/L的盐酸(HCl)溶

细胞分裂素玉米素（ZT）0.05～-2.0

解，然后加蒸馏水定容。

先用少量0.1mol/L的KOH或NaOH溶

生长素萘乙酸（NAA）