生物制片技术试题及答案

生物制片技术试题及答案一、单项选择题（每题2分，共30分）1.以下哪种固定剂穿透能力最强？A.甲醛B.乙醇C.苦味酸D.铬酸答案：A。甲醛是最常用的固定剂之一，其穿透能力较强，能较好地渗透组织并使蛋白质凝固，保存组织的形态结构。乙醇穿透能力相对较弱，且高浓度乙醇会使组织收缩；苦味酸穿透慢且易使组织变脆；铬酸穿透也较慢。2.石蜡切片中，透明剂的作用是？A.使组织脱水B.使组织透明，利于石蜡浸入C.使组织硬化D.使组织染色答案：B。透明剂的主要作用是置换组织中的脱水剂，使组织变得透明，这样石蜡才能更好地浸入组织中，为后续的包埋做准备。使组织脱水是脱水剂的作用；使组织硬化不是透明剂的主要功能；使组织染色是染色剂的作用。3.苏木精伊红染色（HE染色）中，苏木精主要染的成分是？A.细胞质B.细胞核C.细胞膜D.线粒体答案：B。苏木精是一种碱性染料，它能与细胞核内的酸性物质（如DNA）结合，将细胞核染成蓝色。伊红是酸性染料，主要染细胞质等成分，使其呈粉红色。细胞膜和线粒体在HE染色中一般没有特异性的明显染色表现。4.冰冻切片的优点不包括？A.制片速度快B.能较好地保存组织的抗原性C.切片薄，染色效果好D.可用于快速病理诊断答案：C。冰冻切片的优点是制片速度快，能在短时间内得到切片用于观察，适合快速病理诊断；同时能较好地保存组织的抗原性，有利于免疫组织化学等实验。但冰冻切片相对石蜡切片来说，切片较厚，染色效果一般不如石蜡切片精细。5.以下哪种脱水剂脱水后组织收缩最小？A.乙醇B.丙酮C.正丁醇D.叔丁醇答案：D。叔丁醇脱水后组织收缩相对较小，对组织的形态影响不大。乙醇脱水时会使组织有一定程度的收缩；丙酮脱水速度快，但收缩也较明显；正丁醇脱水效果较好，但也会引起一定的组织收缩。6.包埋石蜡的熔点一般为？A.3040℃B.4050℃C.5060℃D.6070℃答案：C。包埋石蜡的熔点一般在5060℃，这个温度范围能保证石蜡在包埋操作时具有合适的流动性，便于将组织包埋在其中，同时在切片时也能保持一定的硬度，利于切片的制作。7.免疫组织化学染色中，封闭内源性过氧化物酶常用的试剂是？A.过氧化氢B.甲醇C.过氧化氢甲醇溶液D.乙醇答案：C。在免疫组织化学染色中，常用过氧化氢甲醇溶液来封闭内源性过氧化物酶。内源性过氧化物酶会与显色底物反应，产生非特异性染色，影响结果观察。过氧化氢能灭活过氧化物酶，甲醇起到溶剂和辅助作用。单纯的过氧化氢或甲醇效果不如两者混合溶液，乙醇一般不用于封闭内源性过氧化物酶。8.涂片制作时，推片与载玻片的夹角一般为？A.15°B.3045°C.60°D.90°答案：B。涂片制作时，推片与载玻片的夹角一般为3045°，这样可以使标本均匀地涂布在载玻片上，形成合适厚度的涂片。夹角过小，涂片可能过厚；夹角过大，涂片可能过薄或不均匀。9.以下哪种染色方法可用于显示脂肪？A.苏丹Ⅲ染色B.瑞氏染色C.革兰染色D.抗酸染色答案：A。苏丹Ⅲ是一种脂溶性染料，能与脂肪结合，将脂肪染成橘红色，可用于显示组织或细胞中的脂肪。瑞氏染色主要用于血液和骨髓涂片的染色，观察血细胞形态；革兰染色用于细菌的分类鉴定；抗酸染色用于检测抗酸杆菌，如结核杆菌等。10.半薄切片的厚度一般为？A.0.11μmB.15μmC.510μmD.1020μm答案：A。半薄切片的厚度一般在0.11μm，介于光镜切片（较厚）和电镜切片（更薄）之间，可用于光镜下更精细的观察，能看到一些普通光镜切片难以分辨的细微结构。11.组织固定的目的不包括？A.防止组织自溶和腐败B.使组织硬化，便于切片C.保持组织的生前结构和成分D.使组织染色更鲜艳答案：D。组织固定的主要目的是防止组织自溶和腐败，保持组织的生前结构和成分，同时使组织硬化，便于后续的切片等操作。使组织染色更鲜艳不是固定的主要目的，染色效果主要与染色方法和试剂有关。12.超薄切片制作中，常用的包埋剂是？A.石蜡B.环氧树脂C.明胶D.火棉胶答案：B。超薄切片用于电子显微镜观察，常用的包埋剂是环氧树脂。环氧树脂具有良好的硬度和韧性，能在电子束照射下保持稳定的结构，适合制作超薄切片。石蜡主要用于光镜切片的包埋；明胶和火棉胶在一些特殊的制片方法中有应用，但不是超薄切片的常用包埋剂。13.相差显微镜主要用于观察？A.染色标本B.活细胞C.荧光标记标本D.金属颗粒标记标本答案：B。相差显微镜利用光的干涉和衍射原理，将细胞内不同结构间的折射率差异转化为光强度的差异，从而使活细胞等无色透明的标本在不染色的情况下也能清晰可见，主要用于观察活细胞的形态和动态变化。染色标本用普通光学显微镜即可观察；荧光标记标本用荧光显微镜观察；金属颗粒标记标本一般用于电镜观察。14.银染法可用于显示？A.神经纤维B.胶原纤维C.弹性纤维D.网状纤维答案：D。银染法可以使网状纤维染成黑色，从而清晰地显示网状纤维的分布和形态。神经纤维一般用特殊的神经染色方法；胶原纤维常用苏木精伊红染色或特殊的胶原染色法；弹性纤维常用醛复红等染色方法。15.以下哪种方法可用于检测细胞内的核酸？A.原位杂交B.免疫荧光C.免疫组化D.流式细胞术答案：A。原位杂交是一种在组织或细胞原位检测特定核酸序列的技术，通过核酸分子杂交的原理，能准确地定位细胞内的核酸。免疫荧光和免疫组化主要用于检测蛋白质等抗原；流式细胞术主要用于对细胞的数量、大小、荧光强度等进行定量分析和分选。二、多项选择题（每题3分，共15分）1.常用的固定剂有？A.甲醛B.乙醇C.戊二醛D.苦味酸答案：ABCD。甲醛是最常用的固定剂之一，能较好地保存组织形态；乙醇可用于固定一些小标本，且有脱水作用；戊二醛常用于电镜标本的固定，能很好地保存细胞的超微结构；苦味酸也是一种常用的固定剂，能使蛋白质凝固。2.石蜡切片的制作步骤包括？A.固定B.脱水C.透明D.包埋E.切片答案：ABCDE。石蜡切片制作首先要对组织进行固定，防止组织自溶和腐败；然后进行脱水，去除组织中的水分；接着用透明剂使组织透明，便于石蜡浸入；再将组织包埋在石蜡中；最后进行切片操作。3.以下哪些染色方法属于特殊染色？A.苏丹Ⅲ染色B.银染法C.甲苯胺蓝染色D.革兰染色答案：ABCD。苏丹Ⅲ染色用于显示脂肪，银染法用于显示网状纤维等，甲苯胺蓝染色可用于显示肥大细胞等特殊结构，革兰染色用于细菌分类，这些都属于特殊染色方法，与常规的苏木精伊红染色不同，各自有特定的染色对象和用途。4.冰冻切片的缺点有？A.切片厚度较大B.容易出现冰晶C.组织抗原性易破坏D.染色效果不如石蜡切片答案：ABD。冰冻切片相对石蜡切片切片较厚，在冰冻过程中容易形成冰晶，影响切片的质量和观察效果，且染色效果一般不如石蜡切片精细。但冰冻切片能较好地保存组织的抗原性，这是其优点之一。5.免疫组织化学染色的基本步骤包括？A.标本制备B.抗原修复C.封闭D.加一抗和二抗E.显色答案：ABCDE。免疫组织化学染色首先要制备合适的标本，如石蜡切片或冰冻切片等；对于一些标本需要进行抗原修复，以暴露被掩盖的抗原；然后进行封闭，减少非特异性染色；接着依次加入一抗和二抗，使抗体与抗原特异性结合；最后进行显色反应，以观察抗原的分布。三、判断题（每题2分，共10分）1.固定时间越长，固定效果越好。（×）固定时间过长可能会导致组织过度固定，使组织变脆、抗原性降低等，影响后续的制片和观察效果，所以固定时间应根据组织的大小、种类等因素合理确定。2.乙醇脱水时，应从低浓度到高浓度依次进行。（√）从低浓度到高浓度依次进行乙醇脱水，可以使组织逐渐脱水，避免组织因脱水过快而收缩过度，保证组织的形态结构。3.免疫组织化学染色中，一抗和二抗的特异性都针对抗原。（×）一抗特异性针对抗原，二抗特异性针对一抗，通过二抗的标记来显示一抗与抗原的结合情况。4.超薄切片制作时，切片厚度越薄越好。（×）超薄切片厚度需要根据实际观察需求和技术条件来确定，过薄的切片可能会导致切片破碎、难以操作等问题，而且不一定能提供更有价值的信息。5.涂片制作时，标本应均匀涂布在载玻片中央。（√）均匀涂布在载玻片中央可以保证涂片的质量，便于后续的染色和观察。四、简答题（每题10分，共30分）1.简述石蜡切片的制作流程。答：石蜡切片的制作流程主要包括以下步骤：（1）固定：将新鲜组织放入合适的固定剂中，如甲醛等，防止组织自溶和腐败，保持组织的生前结构和成分。固定时间根据组织大小和种类而定，一般小组织固定数小时，大组织可能需要数天。（2）脱水：用梯度乙醇（如70%、80%、90%、95%、100%乙醇）依次对组织进行脱水，从低浓度到高浓度，使组织中的水分逐渐被乙醇取代。脱水时间也因组织大小而异，一般每个浓度处理数小时。（3）透明：用透明剂（如二甲苯）置换组织中的乙醇，使组织变得透明，便于石蜡浸入。透明时间不宜过长，以免组织变脆。（4）浸蜡：将透明后的组织放入熔化的石蜡中，让石蜡逐渐浸入组织。一般先在较低熔点的石蜡中浸蜡，再在较高熔点的石蜡中浸蜡，重复23次，确保组织完全被石蜡浸透。（5）包埋：将浸透石蜡的组织放入包埋模具中，加入熔化的石蜡，迅速将组织摆放好，待石蜡凝固后，组织就被包埋在石蜡块中。（6）切片：用切片机将包埋好的石蜡块切成薄片，一般厚度为46μm。切片时要注意切片的连续性和完整性。（7）贴片：将切好的切片放在载玻片上，用温水或蛋白甘油等贴片剂使切片平整地贴在载玻片上，然后烘干。（8）染色：常用苏木精伊红染色（HE染色），先将切片脱蜡至水，然后用苏木精染细胞核，再用盐酸酒精分化，水洗后用伊红染细胞质，最后脱水、透明、封片。2.比较冰冻切片和石蜡切片的优缺点。答：（1）冰冻切片优点：制片速度快，能在短时间内得到切片，适合快速病理诊断，如手术中快速判断病变的性质。能较好地保存组织的抗原性，有利于免疫组织化学等需要检测抗原的实验。不需要经过脱水、透明、浸蜡等复杂的处理过程，对组织的损伤相对较小。缺点：切片较厚，一般在810μm左右，不如石蜡切片薄（46μm），观察的精细度相对较差。容易出现冰晶，影响切片的质量和观察效果。染色效果一般不如石蜡切片，切片的稳定性和保存时间也较短。（2）石蜡切片优点：切片薄，能清晰地显示组织的细微结构，染色效果好，切片质量稳定，可长期保存。可以进行多种染色和特殊处理，适用于各种组织学和病理学观察。缺点：制片过程复杂，耗时较长，从固定到切片完成可能需要数天时间。组织经过脱水、透明、浸蜡等处理，可能会使组织抗原性有所降低，对免疫组织化学等实验有一定影响。操作不当容易导致组织收缩、变脆等问题。3.简述免疫组织化学染色的原理和基本步骤。答：原理：免疫组织化学染色是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量的研究。抗体分为一抗和二抗，一抗能特异性地识别并结合抗原，二抗能特异性地结合一抗，二抗上通常标记有显色剂（如酶、荧光素等），通过显色剂的显色反应来显示抗原的存在和分布。基本步骤：（1）标本制备：可以是石蜡切片或冰冻切片等，要保证标本的质量，尽量减少组织损伤和抗原丢失。（2）抗原修复：对于石蜡切片，由于固定和包埋过程可能会使抗原被掩盖，需要进行抗原修复，常用的方法有高温高压修复、酶消化修复等。（3）封闭：用封闭剂（如正常血清等）封闭组织中的非特异性结合位点，减少非特异性染色。（4）加一抗：将稀释好的一抗滴加在标本上，在适当的温度和时间条件下孵育，使一抗与抗原特异性结合。（5）洗片：用缓冲液冲洗标本，去除未结合的一抗。（6）加二抗：滴加与一抗对应的二抗，孵育，使二抗与一抗结合。（7）洗片：再次用缓冲液冲洗标本，去除未结合的二抗。（8）显色：根据二抗标记的显色剂不同，选择合适的显色底物进行显色反应。如二抗标记的是辣根过氧化物酶，可用DAB等底物显色。（9）复染：用苏木精等对细胞核进行复染，便于观察细胞的整体结构。（10）脱水、透明、封片：将显色后的标本依次经过脱水、透明处理，最后用封片剂封片，以便在显微镜下观察。五、论述题（15分）论述生物制片技术在生物学研究中的重要性。答：生物制片技术在生物学研究中具有极其重要的地位，它是生物学研究的基础和关键环节，为生物学各个领域的研究提供了重要的手段和支持，主要体现在以下几个方面：1.形态结构观察通过生物制片技术，如石蜡切片、冰冻切片等，可以将生物组织或细胞制成薄片，在显微镜下清晰地观察其形态结构。例如，在组织学研究中，利用苏木精伊红染色的石蜡切片，可以观察到不同组织和器官的细胞组成、排列方式以及组织结构特点，了解组织的正常形态和功能。在病理学研究中，通过对病变组织的切片观察，能够发现细胞和组织的病理变化，为疾病的诊断和研究提供依据。对于微小的生物或细胞，如细菌、原生动物等，涂片制作和染色技术可以使它们的形态特征更加明显，便于分类鉴定和研究其生活史。2.细胞和分子水平研究免疫组织化学染色技术结合了免疫学和组织化学的原理，能够在组织或细胞原位检测特定的蛋白质、抗原等分子。通过标记抗体与抗原的特异性结合，可以准确地定位细胞内分子的分布和表达情况，研究细胞的功能和信号传导机制。例如，在肿瘤研究中，检测肿瘤细胞中某些肿瘤标志物的表达，有助于了解肿瘤的发生发展机制、判断预后和指导治疗。原位杂交技术可以在组织或细胞原位检测特定的核酸序