临床免疫学检验基础知识手册

临床免疫学检验基础知识手册临床免疫学检验是现代医学诊断中不可或缺的一环，它通过分析人体免疫系统的反应状态，为疾病的发生机制、诊断、治疗及预后评估提供重要依据。免疫系统由免疫器官、免疫细胞和免疫分子构成，其核心功能包括识别“自我”与“非我”、清除病原体、监控肿瘤以及维持免疫耐受。临床免疫学检验主要借助体外实验技术，检测血液、体液或组织中特定免疫活性成分的含量或功能状态，从而反映机体的免疫状态。一、免疫学检验的基本原理免疫学检验的核心是基于抗原抗体反应的特异性结合原理。抗原是指能够诱导机体免疫系统产生免疫应答并与之结合的物质，包括病原微生物、多肽、蛋白质、多糖等。抗体是机体在抗原刺激下由B淋巴细胞分化成的浆细胞产生的特异性免疫球蛋白，能够与相应抗原结合。检验方法通常通过抗原抗体反应的可见信号（如颜色变化、荧光、电泳迁移率改变等）来定量或定性分析样本中的免疫成分。免疫学检验的常用技术包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、流式细胞术、免疫印迹、免疫荧光和沉淀反应等。ELISA因其操作简便、灵敏度高、特异性强而被广泛应用，可用于检测抗体、抗原、细胞因子等。流式细胞术则通过单克隆抗体标记免疫细胞表面或胞内分子，结合荧光检测，分析细胞数量、比例及功能状态。二、免疫球蛋白的检验免疫球蛋白（Ig）是血清中主要的抗体成分，包括IgG、IgM、IgA、IgD和IgE五种类型，分别承担不同的免疫功能。IgG是血清中含量最高的免疫球蛋白，具有穿透组织的能力，在清除细菌和病毒中起关键作用；IgM是五聚体，是机体最早产生的抗体，常用于感染早期诊断；IgA主要存在于黏膜表面，防止病原体入侵；IgD和IgE的生理功能相对特殊，IgD参与B细胞活化，IgE与过敏反应和寄生虫感染相关。免疫球蛋白的检测方法包括单向扩散法、免疫比浊法和ELISA定量。异常的免疫球蛋白水平可能提示疾病状态，如多发性骨髓瘤表现为单克隆IgG显著升高，系统性红斑狼疮可见IgM和IgA增高，而IgA缺乏症患者易发生反复感染。三、细胞因子的检验细胞因子是由免疫细胞和某些非免疫细胞分泌的蛋白质，参与免疫应答的调节。常见的细胞因子包括白细胞介素（IL）、肿瘤坏死因子（TNF）、干扰素（IFN）等。IL-2、IL-4、IL-6和TNF-α是临床常用的检测指标。IL-2与T细胞增殖相关，IL-4促进B细胞分化和过敏反应，IL-6是急性期反应蛋白，TNF-α则参与炎症和细胞凋亡。细胞因子检测多采用ELISA、ELISPOT或流式细胞术。例如，类风湿关节炎患者血清中TNF-α和IL-6常显著升高，而IL-4/IL-5比例失衡与哮喘发病有关。通过检测细胞因子网络，可评估炎症反应的强度和类型，为靶向治疗提供依据。四、T细胞和B细胞的检验T细胞和B细胞是免疫应答的核心细胞。T细胞分为CD4+辅助T细胞和CD8+细胞毒性T细胞，CD4+细胞通过分泌细胞因子辅助B细胞产生抗体或调节免疫应答，CD8+细胞直接杀伤被病毒感染的细胞。B细胞分化为浆细胞后产生抗体，记忆B细胞则维持长期免疫记忆。流式细胞术是检测T细胞和B细胞亚群的主要手段，通过抗体标记CD3、CD4、CD8、CD19等表面分子，分析细胞数量和比例。例如，HIV感染会导致CD4+细胞减少，而慢性感染或自身免疫病中CD8+细胞可能异常增高。B细胞减少（如Bruton综合征）或异常增殖（如慢性淋巴细胞白血病）也需要细胞形态学结合免疫表型分析。五、自身抗体的检验自身抗体是针对机体自身成分产生的抗体，与自身免疫病密切相关。常见的自身抗体包括抗核抗体（ANA）、类风湿因子（RF）、抗双链DNA抗体等。ANA是系统性红斑狼疮的筛查指标，RF多见于类风湿关节炎，而抗双链DNA抗体特异性较高，是SLE活动期的标志物。自身抗体检测常用间接免疫荧光法、ELISA和免疫印迹。例如，干燥综合征患者可见抗SSA抗体，抗心磷脂抗体与血栓形成和胎儿丢失相关。通过检测自身抗体谱，可辅助诊断自身免疫病并预测疾病进展。六、过敏原的检验过敏原检测用于识别引起过敏反应的物质，包括吸入性（如尘螨、花粉）、食物性（如牛奶、鸡蛋）和药物性过敏原。检测方法主要有皮肤点刺试验和血清特异性IgE检测。皮肤点刺试验通过少量过敏原溶液滴于皮内，观察风团形成程度；血清特异性IgE则通过ELISA定量，适用于无法进行皮肤试验的患者。过敏原阳性者需避免接触致敏物质，必要时可使用抗组胺药或脱敏治疗。例如，哮喘和过敏性鼻炎患者常对尘螨或花粉IgE升高，食物过敏则需结合临床症状和双盲激发试验确诊。七、肿瘤免疫检验肿瘤免疫检验通过检测肿瘤相关抗原（如癌胚抗原CEA、甲胎蛋白AFP）、肿瘤标志物和免疫细胞状态评估肿瘤发生和免疫逃逸机制。PD-L1表达检测是免疫治疗的重要指标，高表达者对PD-1/PD-L1抑制剂反应较好。此外，肿瘤微环境中的免疫细胞浸润（如CD8+T细胞、巨噬细胞）也可预测预后。流式细胞术和免疫组化是常用技术，例如，黑色素瘤患者PD-L1阳性率较高，而胃癌患者CD8+T细胞浸润减少提示免疫抑制状态。肿瘤免疫检验为精准治疗提供重要参考。八、检验结果的临床意义免疫学检验结果的解读需结合临床情况，避免过度诊断。例如，轻度IgG升高可能仅反映近期感染，而显著升高需警惕多发性骨髓瘤；IL-6升高可见于多种炎症性疾病，需鉴别感染源。此外，检验前标本处理（如抗凝剂选择、及时分离血清）和实验室质量控制对结果准确性至关重要。九、发展趋势随着单克隆抗体技术、基因编辑和人工智能的发展，免疫学检验正向精准化、自动化和智能化方向演进。例如，液态活检可检测肿瘤相关循环肿瘤细胞和游离DNA，数字PCR可提高细胞因子定量精度，而AI辅助诊断可减少假阳性