T∕SNLT 0045-2025 农用芽孢杆菌发酵培养技术规程

ICS65.080CCSB13T/SNLT团 体 标 准T/SNLT0045-2025农用芽孢杆菌发酵培养技术规程2025-12-08发布 2025-12-08实施石河子农产品流通协会 发布T/SNLT0045-2025T/SNLT0045-2025PAGE\*ROMANPAGE\*ROMANII目 次前 言 II范围 1规范性引用文件 1术语和定义 1生产环境和设备要求 2生产环境 2生产设备 2培养基 2一般要求 2种子培养基 2发酵培养基 2固体培养基 3发酵工艺流程 3发酵生产流程 3菌种要求 3灭菌方法 3接种方法 4发酵工艺参数 4发酵液处理 4指标检测 4抽检检测 4感官检测 5有效活菌数测定 5杂菌率测定 5储运 5附录A（资料性）发酵生产用培养基 6前 言本文件按照GB/T1.12020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》给出的规则起草。本文件由石河子农产品流通协会提出并归口。本文件起草单位：中国农业大学、阿克苏嘉邦肥业有限公司、石河子大学。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。T/SNLT0045-2025T/SNLT0045-2025PAGEPAGE1农用芽孢杆菌发酵培养技术规程范围本文件适用于农用芽孢杆菌发酵培养，微生物肥料生产企业和其他相关单位参照使用。规范性引用文件（包括所有的修改单适用于本文件。GB3095 环境空气质量标准GB3838 地表水环境质量标准GB20287 农用微生物菌剂GB4789.28 食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求GB/T41727 农用微生物菌剂功能评价技术规程NY/T1109 微生物肥料生物安全通用技术准则SN/T2632 微生物菌种常规保藏技术规程术语和定义GB20287、GB/T41727界定的以及下列术语和定义适用于本文件。Bacillusinoculantsappliedinagriculture芽孢杆菌科、芽孢杆菌属，革兰氏阳性菌，一种需氧菌。菌体杆状，无荚膜，周生鞭毛，能运动。straindissolvedoxygen生产环境和设备要求生产环境应符合如下条件：——厂区空气质量达到GB3095中二类环境空气质量标准要求。——发酵生产用水应符合GB3838中III类水质要求，其他用水应符合GB3838中IV类水质要求。——发酵生产场地及发酵相关设施应符合安全、环保、消防等条件要求。——生产设备采用不锈钢发酵罐，设备体积根据生产规模自定。主要生产设备有种子罐、液体发酵罐、补料罐、冷水机、配料机、空压机、蒸汽锅炉等。培养基一般要求培养基所使用的原材料应满足菌液生产要求，具体按GB4789.28的规定执行。对于首次使用的发酵原料应通过摇瓶或小型发酵试验后再用于发酵生产。种子培养基AA.1。发酵培养基发酵培养基原料主要包括淀粉、淀粉糖、蔗糖、葡萄糖、糖蜜、甘油等为主要碳源，豆粕粉、pH缓冲剂等。高含菌量发酵培养基配方需要以发酵菌量为目标，通过单因子实验、正交实验和响应面实验等实验优化培养基的原料和用量。高活性代谢物发酵培养基配方需要以代谢产物合成量为目标，通过单因子实验、正交实验和响应面实验等实验优化培养基的原料和用量。固体培养基用于农用芽孢菌种分离、鉴定及活菌计数使用。固体培养基见附录A中的表A.2。发酵工艺流程发酵生产流程孢芽杆菌发酵生产流程见图1。图1 芽孢杆菌发酵生产流程图菌种要求GB20287GB/T41727NY/T1109SN/T2632的要求。灭菌方法种子培养基、发酵培养基、固体培养基、菌种培养器材、发酵罐等均需采用高压湿热灭菌，灭菌条件为115℃～121℃，0.1MPa～0.15MPa，灭菌20min～30min。灭菌后无菌操作取培养基染色镜检，无微生物说明灭菌彻底。接种方法在超净工作台内，采用接种针经火焰灭菌,待冷却后沾取少量初级菌种，转接至装有种子培养基的发酵工艺参数发酵工艺参数一般要求设置如下a） 发酵罐装液量为60%～80%;b） 发酵温度为28℃～35℃;c） 初始搅拌转速为250rpm～300d） 接种量为装液量的2%～5%;pH7.2～7.5pH值;0.3～1.0个发酵液体积向培养基中连续补充无菌空气。h）发酵周期为18h～481.2x1010cfu/mL高含菌量发酵工艺参数需要以发酵菌量为目标，通过单因子实验、正交实验和响应面实验等实验优化发酵工艺中的装液量、发酵温度、搅拌速度、通气量等发酵工艺参数。高活性代谢物发酵培养基配方需要以代谢产物合成量为目标，通过单因子实验、正交实验和响应面实验等实验优化培养基的原料和用量。发酵液处理GB20287GB20287的要求制作粉剂和颗粒剂微生物菌剂。指标检测抽检检测每批次产品随机抽样检测，抽样率不低于10%，检测指标包括感官、有效活菌数、杂菌率等，检验合格后方可出厂使用。感官检测有效活菌数测定GB20287执行。杂菌率测定3个连续适宜稀释倍数的样本，进行杂菌数量的测定,具体GB20287执行。储运附 录 A（资料性）发酵生产用培养基种子培养基用于与表A.1中种子培养基的各项指标的参照。表A.1 种子培养基指标名称酵母提取物（g）蛋白胨（g）氯化钠（g）蒸馏水（L）p