声门上型喉癌预后关联BMI1、EZH2表达的深度剖析

声门上型喉癌预后关联BMI1、EZH2表达的深度剖析一、引言1.1研究背景与意义喉癌是头颈部常见的恶性肿瘤之一，严重威胁人类健康。在全身恶性肿瘤发病率中，喉癌大约占1%-5%，其病理分型以鳞状细胞癌为主。依据发生位置的不同，喉癌可分为声门上型喉癌、声门型喉癌和声门下型喉癌。其中，声门上型喉癌因其独特的解剖位置，有着迥异于其他类型喉癌的生物学行为，在喉癌中的发病率约为40％，且近年来其发生率呈逐年增加的态势。声门上型喉癌患者初诊时淋巴结转移发生率高，很多患者确诊时已处于疾病晚期，这使得其预后情况不太理想。据相关研究显示，声门上型喉癌的总体5年生存率仅为41.55％。目前，临床对于声门上型喉癌的治疗，手术常根据原发灶侵犯范围采取声门上水平喉半切除术或喉全切除术，自20世纪80年代以来，同期放化疗的应用价值也逐渐得到重视与推广，但对于早期疾病的治疗效果仍难以令人满意。因此，深入研究声门上型喉癌的预后及其影响因素，对了解该病的发展机制和寻找更有效的治疗方案具有重要意义，这有助于提高患者的生存质量，减轻患者家庭和社会的负担。BMI1属于多梳基因家族（PolycombGroup，PcG）抑制复合体PRC1（PolycombRepressiveComplex1），最初被发现与c-MyC协同诱发鼠淋巴瘤，因而被视作癌基因。BMI1在多种恶性肿瘤中呈现高表达状态，它具有诱导细胞永生化、促进肿瘤的早期转化、维持及促进干细胞的自我更新等重要功能，其表达情况与恶性肿瘤的进程紧密相关，并对患者的生存产生影响。EZH2与BMI1同属PcG家族，是PolycombRepressiveComplex2（PRC2）的催化亚基。虽然EZH2在肿瘤发生中的具体作用机制尚未完全阐明，但其介导的组蛋白甲基化与DNA甲基化之间存在相关性，这表明它可能以基因沉默子的角色推动了肿瘤的生长，并且EZH2在人体多种肿瘤组织中均有高表达的现象。在众多恶性肿瘤研究中，BMI1和EZH2已被证实发挥着关键作用，且与肿瘤预后存在关联。然而，在声门上型喉癌领域，关于BMI1和EZH2的表达状况以及它们与预后之间的关系，目前仍不明确。本研究致力于探究声门上型喉癌患者BMI1和EZH2表达水平的相关性，以及二者对患者预后的影响。通过这一研究，有望深入了解声门上型喉癌的病理生理学机制，为临床治疗提供坚实的基础研究依据。从临床应用角度来看，研究成果可能为临床提供全新的预后指标，助力医生更准确地评估患者病情和预后，同时也有助于发展出更具针对性的治疗方法，提高治疗效果，改善患者的生存状况。1.2研究目的本研究旨在深入剖析声门上型喉癌患者BMI1和EZH2表达水平的相关性，以及它们对患者预后的影响。具体目标如下：分析声门上型喉癌患者的BMI1和EZH2表达水平：通过对手术切除标本进行免疫组化等检测技术，准确测量BMI1和EZH2在声门上型喉癌组织中的蛋白表达水平，并对表达强度进行量化分析，以明确二者在声门上型喉癌中的表达状态。研究BMI1和EZH2的表达与患者预后的关系：收集患者的临床病理资料，包括TNM分期、治疗方式、术后复发、远处转移及生存时间等信息，运用统计学方法分析BMI1和EZH2表达水平与上述预后相关指标之间的关联，探究BMI1和EZH2表达如何影响患者的生存状况和疾病进展。探究BMI1和EZH2的共同作用对患者预后的影响：综合考虑BMI1和EZH2的表达情况，将患者分为不同的表达组合亚组，分析各亚组患者的预后差异，从而深入探讨BMI1和EZH2在声门上型喉癌发生发展过程中的协同作用机制，以及这种共同作用对患者预后产生的影响。1.3国内外研究现状在国外，声门上型喉癌的研究一直是肿瘤领域的重要方向。众多研究聚焦于其临床特征与治疗方式对预后的影响。例如，一些研究深入剖析了不同手术方式，如声门上水平喉半切除术和喉全切除术，在不同分期患者中的应用效果及对生存质量和生存率的影响，发现手术切缘状态、颈部淋巴结转移情况等是影响预后的关键因素。在放化疗方面，也有大量研究探讨了同期放化疗的最佳方案、剂量及与手术联合应用的时机等，为临床治疗提供了丰富的参考依据。对于BMI1和EZH2基因，国外在多种肿瘤类型中的研究起步较早且成果丰硕。在乳腺癌、结直肠癌、肺癌等常见肿瘤中，已明确BMI1和EZH2的高表达与肿瘤的发生、发展、转移及不良预后密切相关。研究表明，BMI1通过调控细胞周期、抑制细胞凋亡等机制促进肿瘤细胞的增殖和存活；EZH2则主要通过介导组蛋白甲基化，沉默肿瘤抑制基因，从而推动肿瘤进程。然而，在声门上型喉癌中，国外相关研究相对较少，对于BMI1和EZH2在声门上型喉癌组织中的表达情况、二者之间的相互关系以及它们对声门上型喉癌预后的具体影响，尚未形成系统而深入的认识。国内在声门上型喉癌的研究方面也取得了一定进展。临床研究详细分析了声门上型喉癌患者的发病特点、临床表现以及不同治疗手段的疗效。同时，在基础研究领域，对声门上型喉癌的分子生物学机制进行了一些探索，为寻找新的治疗靶点和预后指标奠定了基础。在BMI1和EZH2的研究上，国内在多种肿瘤中的研究同样发现它们具有重要作用，且与肿瘤的恶性程度和预后相关。但在声门上型喉癌中，虽然有部分研究涉及BMI1和EZH2的表达检测，然而这些研究样本量相对较小，研究内容不够全面和深入，对于二者在声门上型喉癌发生发展过程中的协同作用及对预后的综合影响，仍缺乏深入系统的研究。综上所述，国内外在声门上型喉癌的研究中，对于传统的临床病理因素与预后的关系已有较多了解，但在BMI1和EZH2基因与声门上型喉癌预后的相关性研究方面存在不足。本研究拟通过大样本量的临床研究，全面深入地探究BMI1和EZH2在声门上型喉癌中的表达情况、二者的相关性以及它们对患者预后的影响，有望为声门上型喉癌的预后评估和治疗提供新的思路和理论依据，弥补现有研究的不足。二、声门上型喉癌概述2.1定义与分类喉癌作为头颈部常见的恶性肿瘤，依据其在喉部发生的具体位置，可被清晰地划分为声门上型喉癌、声门型喉癌和声门下型喉癌三大类。其中，声门上型喉癌指的是原发于声带以上部位的癌肿，这些部位涵盖了会厌、室带、喉室、杓会厌襞、杓间区等结构。从解剖学角度来看，声门上区是一个相对复杂且具有丰富淋巴组织的区域，这一独特的解剖特点赋予了声门上型喉癌特殊的生物学行为。根据肿瘤的生长方式和形态特征，声门上型喉癌又可进一步细分。从生长方式上，可分为外生性生长和内生性生长。外生性生长的肿瘤通常向喉腔外突出，呈乳头状或菜花状，这种生长方式在早期可能更容易被发现，因为它会引起明显的喉部异物感、声音嘶哑等症状；内生性生长的肿瘤则向深层组织浸润，早期症状不明显，往往在肿瘤侵犯到周围重要结构时才被察觉。在形态特征方面，声门上型喉癌可表现为溃疡型、结节型和浸润型。溃疡型肿瘤表面常有溃疡形成，容易出血，患者可能会出现痰中带血、咽喉疼痛等症状；结节型肿瘤呈结节状，质地较硬，边界相对较清晰；浸润型肿瘤则呈弥漫性生长，与周围组织界限不清，容易侵犯邻近器官和组织，导致病情更为复杂和严重。不同类型的声门上型喉癌在临床表现、诊断方法和治疗策略上都存在一定差异，因此准确的分类对于临床治疗和预后评估具有重要意义。2.2发病机制声门上型喉癌的发病机制是一个复杂且尚未完全明确的过程，涉及多种因素的相互作用。吸烟和饮酒被公认为是声门上型喉癌的主要危险因素。烟草中含有大量的致癌物质，如多环芳烃、亚硝胺等，这些物质在进入人体后，可通过多种途径对喉部细胞产生损害。多环芳烃可与细胞内的DNA结合，形成DNA加合物，导致DNA损伤和基因突变，从而影响细胞的正常生长和调控机制，使细胞发生恶性转化。长期吸烟还会使喉部黏膜处于持续的炎症状态，炎症细胞释放的细胞因子和活性氧物质进一步损伤细胞DNA，促进肿瘤的发生发展。酒精对声门上型喉癌的发病也有重要影响。酒精本身虽不是直接的致癌物质，但它是一种良好的溶剂，可促进其他致癌物质的吸收。饮酒后，酒精会刺激喉部黏膜，使其通透性增加，从而使烟草中的致癌物质更容易进入细胞内发挥致癌作用。此外，酒精还会干扰肝脏对致癌物质的代谢和解毒功能，使体内致癌物质的浓度升高，增加致癌风险。同时，酒精还可能通过影响细胞的代谢和信号传导通路，促进肿瘤细胞的增殖和存活。人乳头瘤病毒（HPV）感染与声门上型喉癌的关系也备受关注。HPV是一种双链环状DNA病毒，其感染喉部上皮细胞后，病毒基因可整合到宿主细胞基因组中。HPV的E6和E7蛋白是主要的致癌蛋白，E6蛋白可与宿主细胞内的p53蛋白结合，使其降解，从而失去对细胞周期的调控和对细胞凋亡的诱导作用，导致细胞异常增殖；E7蛋白则与视网膜母细胞瘤蛋白（pRb）结合，使pRb失活，释放转录因子E2F，促进细胞进入增殖周期，引发细胞的恶性转化。研究表明，HPV阳性的声门上型喉癌患者在临床病理特征和预后方面与HPV阴性患者存在差异，提示HPV感染在声门上型喉癌的发生发展中具有独特的作用机制。除了上述常见因素外，职业暴露也是声门上型喉癌发病的一个潜在因素。长期接触石棉、芥子气、镍等化学物质的人群，患声门上型喉癌的风险明显增加。这些化学物质可直接损伤喉部组织，诱导细胞发生基因突变和染色体异常，破坏细胞的正常生理功能，进而引发肿瘤。例如，石棉纤维可在呼吸道内沉积，刺激局部组织产生炎症反应，导致活性氧和细胞因子的释放，损伤DNA，诱发肿瘤。同时，环境因素如空气污染、长期吸入粉尘等，也可能对喉部黏膜造成慢性刺激和损伤，增加声门上型喉癌的发病风险。综上所述，声门上型喉癌的发病机制是多种危险因素共同作用的结果，这些因素通过不同的分子生物学途径，影响细胞的增殖、分化、凋亡等过程，最终导致肿瘤的发生发展。深入研究这些发病机制，对于声门上型喉癌的预防、早期诊断和治疗具有重要的理论和实践意义。2.3临床症状与诊断方法声门上型喉癌的临床症状会随着病情的发展而逐渐显现。在疾病早期，患者的症状通常较为隐匿，很多时候表现为咽部不适，这种不适感可能较为轻微，容易被患者忽视。患者可能会感觉喉咙里有异物，或者有轻微的痒感、干燥感，这些症状没有明显的规律性，在吞咽时可能会稍有加重，但一般不会影响正常饮食。还有部分患者会出现刺激性干咳的症状，咳嗽通常没有明显的诱因，也不伴有咳痰，这种咳嗽往往会持续一段时间，且常规的止咳治疗效果不佳。随着肿瘤的不断生长和发展，进入中晚期后，患者的症状会逐渐加重且多样化。声音嘶哑是较为常见的症状之一，这是因为肿瘤侵犯到声带，影响了声带的正常振动和发声功能。最初，声音嘶哑可能较轻，仅在长时间说话或发声较多时出现，但随着病情进展，声音嘶哑会逐渐加重，甚至可能发展为完全失声。吞咽困难也是中晚期声门上型喉癌的常见症状，当肿瘤增大到一定程度，阻塞了食道入口或侵犯到周围的吞咽相关结构时，患者在吞咽食物时会感到明显的困难，起初可能只是吞咽固体食物时有梗阻感，随着病情恶化，吞咽流质食物也会变得困难，严重影响患者的营养摄入和生活质量。呼吸困难是声门上型喉癌中晚期较为严重的症状，肿瘤不断增大，会阻塞气道，导致气体交换受阻。患者会出现气促、喘息等症状，呼吸时可伴有明显的喘鸣声，尤其是在活动后，呼吸困难会更加明显。随着病情的进一步恶化，即使患者处于安静状态，呼吸困难也会持续存在，甚至可能危及生命。此外，肿瘤表面溃烂还会导致痰中带血，由于肿瘤组织血供丰富且质地脆弱，在咳嗽或呼吸时，肿瘤表面的血管容易破裂出血，血液混合在痰液中，形成痰中带血的症状。同时，肿瘤组织坏死还会产生特殊的臭味，患者咳出的痰液会带有难闻的气味。由于声门上区淋巴管丰富，肿瘤容易发生颈部淋巴结转移，患者可能会在颈部摸到质地坚硬的肿块，这些肿块起初可能活动度较好，但随着病情进展，会逐渐与周围组织粘连，活动度降低。在诊断声门上型喉癌时，喉镜检查是常用且重要的手段。间接喉镜检查操作相对简便，医生通过间接喉镜可以直接观察喉部的大致形态、结构以及有无新生物等情况。然而，间接喉镜存在一定的局限性，对于一些较为隐蔽的部位，如喉室、声门下区等，观察可能不够清晰。电子喉镜则弥补了这一不足，它具有更高的分辨率和更灵活的操作性能，能够更全面、细致地观察喉部各个部位的病变情况，包括病变的大小、形态、位置以及表面特征等。在电子喉镜检查过程中，医生还可以通过活检通道取病变组织进行病理检查，这对于明确病变的性质至关重要。病理活检是确诊声门上型喉癌的金标准。在喉镜检查发现可疑病变后，医生会使用活检钳从病变部位取小块组织，然后将组织送往病理科进行处理。病理科医生会对组织进行切片、染色等一系列操作，在显微镜下观察组织细胞的形态、结构和排列方式等特征。如果发现癌细胞，即可确诊为喉癌。病理活检不仅能够明确诊断，还可以对肿瘤的病理类型进行分类，如鳞状细胞癌、腺癌等，不同的病理类型在治疗方案的选择和预后评估上都有重要意义。喉部影像学检查在声门上型喉癌的诊断中也起着不可或缺的作用。喉部X线检查可以初步观察喉部的大致形态和结构，了解有无骨质破坏等情况，但对于软组织病变的显示不够清晰。CT检查能够更清晰地显示喉部的解剖结构和病变范围，它可以明确肿瘤在喉内的侵犯深度和广度，以及是否侵犯周围组织和器官，如甲状腺、颈部大血管等。通过CT检查，医生还可以发现颈部淋巴结的肿大情况，判断是否存在淋巴结转移。MRI检查对软组织的分辨能力更强，在显示肿瘤与周围软组织的关系以及判断肿瘤的侵犯范围方面具有独特的优势，尤其对于一些早期病变或较小的肿瘤，MRI检查能够提供更准确的信息。这些影像学检查相互补充，为医生制定治疗方案提供了重要的依据。2.4治疗方法手术治疗是声门上型喉癌的重要治疗手段之一，其目的在于尽可能完整地切除肿瘤组织，同时最大程度地保留喉部的正常生理功能。对于早期声门上型喉癌患者，若肿瘤局限于声门上区的某个特定部位，且范围较小，支撑喉镜下激光手术是一种较为理想的选择。该手术利用激光的精确切割和汽化作用，能够在较小的创伤下切除肿瘤。它具有手术时间短的优势，这不仅减少了患者在手术过程中的麻醉风险和身体负担，还能降低手术相关并发症的发生概率；损伤小则意味着术后患者的恢复相对较快，喉部组织的功能恢复也更为理想，嗓音质量通常能得到较好的保留。此外，这种手术方式还为患者保留了二次补救性手术切除的机会，一旦术后发现有肿瘤残留或复发，仍可采取进一步的手术治疗。然而，支撑喉镜下激光手术也存在一定的局限性，由于喉癌深部边界在手术中判断难度较大，可能会导致肿瘤切除不彻底；并且该手术经口操作，对于一些位置较为隐蔽或肿瘤范围较大的情况，暴露及切除会受到一定的限制。喉部分切除术适用于那些无法在支撑喉镜下进行手术的患者。根据肿瘤的具体位置和侵犯范围，喉部分切除术又可细分为多种术式。例如，水平部分喉切除术适用于声门上型喉癌病变累及会厌、室带、杓会厌襞等部位，但声带未受侵犯的患者。通过切除病变部位，能够有效地去除肿瘤组织，同时基本保留喉部的发声、呼吸和吞咽等重要功能。在手术过程中，医生需要精细地操作，确保切除范围的准确性，既要彻底清除肿瘤，又要避免过度切除正常组织，以减少对喉部功能的影响。然而，喉部分切除术对医生的技术要求较高，手术难度较大，术后可能会出现一些并发症，如喉狭窄、吞咽功能障碍等，需要患者在术后进行长期的康复训练和密切的随访观察。喉全切除术则是针对那些不适合行喉部分切除术的患者。当肿瘤侵犯范围广泛，累及喉部多个重要结构，或者患者之前接受过放射治疗但失败，又或者出现复发癌以及喉部分切除术后功能不良难以纠正等情况时，喉全切除术可能是必要的选择。该手术需要将整个喉部切除，虽然能够彻底清除肿瘤组织，但对患者的生理和心理影响较大。手术损伤大，术后患者的恢复过程较为漫长，可能会出现各种并发症，如感染、出血、咽瘘等。而且，由于喉部的缺失，患者失去了正常的发声功能，需要通过其他方式进行言语交流，如食管发音、佩戴人工喉等，这对患者的生活质量产生了极大的影响。因此，在决定是否进行喉全切除术时，医生需要充分考虑患者的病情、身体状况以及患者的意愿等多方面因素。放射治疗在声门上型喉癌的治疗中也占据着重要地位。对于有手术禁忌证的患者，如身体状况较差，无法耐受手术创伤，或者存在严重的心肺功能疾病等情况，放射治疗可以作为一种有效的替代治疗方法。通过高能射线的照射，能够破坏癌细胞的DNA结构，抑制癌细胞的增殖和分裂，从而达到控制肿瘤生长的目的。对于广泛病变的患者，在手术前进行放射治疗，可以使肿瘤体积缩小，降低肿瘤的分期，提高手术切除的成功率，减少肿瘤复发的风险。此外，对于手术切缘不充分的患者，放射治疗可作为补充治疗手段，进一步清除残留的癌细胞，降低局部复发的可能性。在早期喉癌及低分化、未分化癌的治疗中，放射治疗可作为首选治疗措施。因为这些类型的肿瘤对放射线较为敏感，放射治疗能够取得较好的治疗效果，同时还能保留喉部的功能，提高患者的生活质量。在放射治疗过程中，医生需要根据患者的具体情况，精确制定放射治疗计划，包括照射野的设计、照射剂量和照射时间的确定等，以确保在有效治疗肿瘤的同时，尽可能减少对周围正常组织的损伤。然而，放射治疗也会带来一些不良反应，如放射性喉炎、放射性肺炎、口干、味觉改变等，这些不良反应可能会影响患者的生活质量，需要在治疗过程中密切关注并及时进行相应的处理。化学治疗通常作为辅助治疗及姑息治疗手段应用于声门上型喉癌的治疗中。化疗药物可以通过血液循环到达全身各处，杀死可能存在的癌细胞，阻止其进一步发展和扩散。在手术前进行化疗，即新辅助化疗，能够使肿瘤缩小，降低肿瘤分期，增加手术切除的机会，同时还可以减少术中癌细胞的播散。手术后进行化疗，即辅助化疗，则可以消灭残留的癌细胞，降低肿瘤复发和转移的风险。对于晚期无法进行手术或放疗的患者，化疗可作为姑息治疗方法，缓解症状，延长患者的生存时间。化疗通常会与手术、放疗等其他治疗方法联合使用，以提高治疗效果。然而，化疗药物在杀死癌细胞的同时，也会对身体正常细胞造成一定的损害，导致一系列不良反应，如恶心、呕吐、脱发、骨髓抑制、肝肾功能损害等。这些不良反应会给患者带来身体和心理上的痛苦，影响患者的治疗依从性和生活质量。因此，在化疗过程中，医生需要根据患者的身体状况和化疗反应，合理调整化疗方案，并给予相应的支持治疗，以减轻不良反应，确保化疗的顺利进行。三、BMI1与EZH2基因介绍3.1BMI1基因BMI1基因全称为B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒插入位点1（B-cell-specificMoloneymurineleukemiavirusinsertionsite1），在基因结构上，人类BMI1基因定位于第10号染色体短臂1区3带（10p13），包含10个外显子和10个内含子。其cDNA全长3251bp，开放阅读框所编码的蛋白质含有326个氨基酸，相对分子质量处于44000-46000区间。从蛋白结构角度来看，BMI1蛋白含有几个关键的模序。在N末端存在环指模序，该模序由锌指和C3HC4保守序列构成，BMI1凭借此环指模序与其他蛋白相结合，进而形成多聚复合物，这种结合对于其在细胞内发挥功能起到了基础作用，参与到多种细胞生理过程的调控中。蛋白的中心部位是螺旋-转角-螺旋-转角-螺旋-转角模序，此模序介导了BMI1与DNA的结合，通过与DNA的特异性结合，BMI1能够参与基因表达的调控，影响相关基因的转录过程，从而对细胞的生长、分化等生命活动产生影响。在正常细胞中，BMI1有着不可或缺的作用。它参与细胞周期的调控，对维持细胞正常的增殖和分化平衡意义重大。以神经干细胞为例，BMI1可以促进神经干细胞的自我更新，保证神经干细胞在体内的数量和功能稳定，为神经系统的发育和正常功能维持提供保障。在造血干细胞中，BMI1同样发挥着关键作用，它是维持成体自我更新造血干细胞所必需的因子，对于造血系统的正常功能维持至关重要，确保血细胞的持续生成和更新。然而，在肿瘤发生过程中，BMI1却扮演着不光彩的角色，展现出致癌基因的特性。BMI1能够通过多种途径促进肿瘤的发生发展。研究表明，BMI1可以抑制细胞衰老和凋亡。在细胞衰老过程中，p16INK4a和p19ARF蛋白起着重要的调控作用，正常情况下，这两种蛋白能够抑制细胞的过度增殖，促使细胞进入衰老或凋亡程序。但BMI1可以负调控p19ARF，同时抑制p16INK4a的肿瘤抑制途径。当BMI1表达异常升高时，p19ARF和p16INK4a的功能受到抑制，细胞无法正常进入衰老和凋亡程序，从而导致细胞的持续增殖，为肿瘤的发生创造了条件。BMI1还与肿瘤干细胞密切相关。肿瘤干细胞具有自我更新和分化的能力，是肿瘤发生、发展、复发和转移的根源。高度表达BMI1基因的肿瘤细胞被认定为肿瘤干细胞，BMI1作为肿瘤干细胞自我更新因子，能够通过特定途径使癌细胞不断进行自我更新，这不仅增加了肿瘤细胞的数量，还增强了肿瘤的侵袭和转移能力。在乳腺癌、肺癌等多种实体瘤中，BMI1的高表达均与肿瘤的临床分期、淋巴转移等密切相关。在非小细胞肺癌组织中，BMI1阳性率较高，且与肿瘤临床分期、淋巴转移相关，而与肿瘤体积大小、患者年龄、性别无关，在Ⅲ-Ⅳ期非小细胞肺癌中BMI1的阳性表达率明显高于Ⅰ-Ⅱ期。这充分表明BMI1在肿瘤的发生、发展过程中发挥着重要作用，其表达水平的变化与肿瘤的恶性程度和预后密切相关。3.2EZH2基因EZH2基因全称为增强子结合蛋白2（Enhancerofzestehomolog2），在基因结构方面，它位于染色体7q的远端。该基因包含20个外显子，外显子长度处于41-323bp区间；同时含有19个内含子，长度范围为0.15-17.7bp。其cDNA全长为2.7kb，拥有一个开放阅读框架，能够编码613个氨基酸的蛋白质。从蛋白结构来看，EZH2蛋白含有4个高度保守序列。SET结构域是其关键的组成部分，这一结构域是EZH2的催化亚基，对于维持EZH2的组蛋白赖氨酸甲基转移酶（HMT）活性来说是必不可少的，它也是多种具有HMT活性蛋白共有的保守结构。半胱氨酸富含区同样在EZH2蛋白功能发挥中起着重要作用，虽然其具体作用机制尚未完全明确，但研究表明它与EZH2的某些生物学活性密切相关。N-氨基末端伸展区包含domainI区和domainII区，这些区域为EZH2与配体亚基相连接提供了结合区域，对EZH2参与形成复合物以及发挥转录调控等功能具有重要意义。在胚胎发育进程中，EZH2扮演着极为重要的角色，它通过对染色体进行修饰，维持同源异型基因的沉默状态，确保胚胎细胞能够按照正常的程序进行分化和发育。如果EZH2基因的功能出现异常，可能会导致胚胎发育过程中出现各种畸形和发育障碍。在肿瘤发生过程中，EZH2被证实与多种肿瘤的发生发展紧密相关。在前列腺癌中，EZH2呈现高表达状态。一方面，它可以通过经典的PRC2复合物发挥作用。PRC2主要由EZH2、EED和SUZ12等成员组成，EZH2凭借其SET结构域催化组蛋白H3赖氨酸27的三甲基化修饰（H3K27me3）。这种修饰会使染色质结构变得更加紧密，从而抑制下游靶基因的表达。在前列腺癌中，EZH2通过这种方式沉默了一系列抑癌基因，如p16、p27等，使得细胞增殖失去控制，促进了肿瘤的发生发展。另一方面，EZH2还具有PRC2非依赖性的转录激活功能。研究发现，在前列腺癌中，EZH2可以作为辅因子结合转录因子AR，形成EZH2-AR复合物。这种复合物能够特异性地结合到某些基因的启动子区域，招募转录相关的辅助因子，促进这些基因的转录激活，从而推动肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移等过程。在乳腺癌研究中，EZH2的作用机制也备受关注。EZH2在乳腺癌组织中的表达水平明显高于正常乳腺组织。从分子机制角度来看，EZH2高表达会导致肿瘤细胞的增殖能力增强。研究表明，EZH2可以通过调控细胞周期相关基因的表达来影响细胞周期进程。在细胞周期的G1期向S期转变过程中，EZH2能够抑制一些负调控细胞周期的基因表达，如p21等，使得细胞能够顺利进入S期进行DNA复制，从而促进细胞增殖。此外，EZH2还参与了乳腺癌细胞的上皮-间质转化（EMT）过程。在EMT过程中，EZH2通过抑制E-cadherin等上皮标志物的表达，同时上调N-cadherin、Vimentin等间质标志物的表达，使乳腺癌细胞获得更强的迁移和侵袭能力，增加了肿瘤转移的风险。而且，EZH2还与乳腺癌的内分泌治疗耐药相关。在一些对内分泌治疗耐药的乳腺癌细胞中，EZH2的表达水平显著升高。进一步研究发现，EZH2可以通过调控相关基因的表达，影响雌激素受体（ER）信号通路，使得肿瘤细胞对内分泌治疗药物产生抵抗，降低了治疗效果。在肝癌中，EZH2同样发挥着重要作用。研究表明，EZH2在肝癌组织中的表达与肿瘤的恶性程度密切相关。高表达的EZH2会促进肝癌细胞的增殖和转移。从信号通路角度分析，EZH2可以通过激活Wnt/β-catenin信号通路来促进肝癌细胞的增殖。在正常情况下，β-catenin在细胞质中会被降解，维持在较低水平。但当EZH2高表达时，它可以通过某种机制抑制β-catenin的降解，使得β-catenin在细胞质中积累并进入细胞核。在细胞核内，β-catenin与相关转录因子结合，激活Wnt信号通路下游的靶基因，如c-Myc、CyclinD1等，这些基因的表达产物能够促进细胞增殖。此外，EZH2还参与了肝癌细胞的血管生成过程。通过调控血管内皮生长因子（VEGF）等血管生成相关因子的表达，EZH2可以促进肿瘤血管的生成，为肿瘤细胞提供更多的营养和氧气，支持肿瘤的生长和转移。3.3两者在肿瘤中的协同作用研究现状在众多肿瘤研究中，BMI1和EZH2的协同作用逐渐受到关注，其相关机制的探索为肿瘤治疗提供了新的思路。在骨肉瘤研究中，BMI1和EZH2的协同作用对肿瘤的发生发展有着显著影响。有研究通过实验发现，当抑制BMI1和EZH2的表达时，骨肉瘤细胞的增殖能力明显下降，细胞周期进程也受到干扰，更多细胞停滞在G0/G1期。这表明BMI1和EZH2可能通过调控细胞周期相关基因的表达，协同促进骨肉瘤细胞的增殖。在侵袭和迁移能力方面，抑制二者表达后，骨肉瘤细胞的侵袭和迁移能力显著降低，这暗示BMI1和EZH2可能通过调节细胞外基质降解酶的表达或细胞间黏附分子的功能，共同促进骨肉瘤细胞的侵袭和迁移。进一步的机制研究表明，BMI1和EZH2可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路来协同促进骨肉瘤的发生发展。在正常情况下，Wnt/β-catenin信号通路受到严格调控，β-catenin在细胞质中被降解，维持在较低水平。但当BMI1和EZH2高表达时，它们可能通过某种机制抑制β-catenin的降解，使得β-catenin在细胞质中积累并进入细胞核。在细胞核内，β-catenin与相关转录因子结合，激活Wnt信号通路下游的靶基因，如c-Myc、CyclinD1等，这些基因的表达产物能够促进细胞增殖、侵袭和迁移。在白血病领域，BMI1和EZH2同样存在协同作用，且与白血病细胞的增殖和分化密切相关。研究表明，BMI1和EZH2的高表达能够维持白血病干细胞的自我更新能力，使白血病细胞持续增殖。当敲低BMI1和EZH2的表达后，白血病干细胞的自我更新能力受到抑制，细胞增殖速度明显减慢。从分化角度来看，BMI1和EZH2的协同作用还会抑制白血病细胞的分化，使白血病细胞保持在未分化状态，从而增加了白血病的恶性程度。相关机制研究发现，BMI1和EZH2可能通过调控一些关键转录因子的表达来实现对白血病细胞增殖和分化的协同调控。例如，它们可能共同抑制一些促进白血病细胞分化的转录因子的表达，同时激活一些维持白血病细胞增殖和自我更新的转录因子的表达，从而维持白血病细胞的恶性生物学行为。在乳腺癌中，BMI1和EZH2的协同作用对肿瘤的转移也有着重要影响。研究发现，BMI1和EZH2的高表达与乳腺癌的淋巴结转移和远处转移密切相关。通过体内外实验表明，抑制BMI1和EZH2的表达能够显著降低乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力，减少肿瘤的转移灶形成。在分子机制方面，BMI1和EZH2可能通过调节上皮-间质转化（EMT）过程来协同促进乳腺癌的转移。在EMT过程中，BMI1和EZH2可能共同作用，抑制E-cadherin等上皮标志物的表达，同时上调N-cadherin、Vimentin等间质标志物的表达，使乳腺癌细胞获得更强的迁移和侵袭能力。此外，BMI1和EZH2还可能通过调节肿瘤微环境中的细胞因子和趋化因子的表达，为乳腺癌细胞的转移创造有利条件。综上所述，在多种肿瘤中，BMI1和EZH2存在协同作用，它们通过多种分子机制共同影响肿瘤细胞的增殖、侵袭、迁移、分化等生物学行为，进而影响肿瘤的发生发展和预后。这些研究成果为深入理解肿瘤的发病机制提供了重要依据，也为肿瘤的治疗提供了潜在的联合治疗靶点。四、研究设计与方法4.1研究对象选取本研究选取2016年1月至2021年12月期间，在我院就诊并确诊为声门上型喉癌的患者作为研究对象，共计纳入100例患者。纳入标准如下：经病理组织学检查确诊为声门上型喉癌，病理类型均为鳞状细胞癌；患者术前未接受过放疗、化疗、免疫治疗等抗肿瘤治疗，以确保研究结果不受其他治疗因素的干扰；患者年龄在40岁至75岁之间，这一年龄段涵盖了声门上型喉癌的高发人群，有助于研究结果的代表性和普遍性；患者签署知情同意书，自愿参与本研究，充分尊重患者的自主意愿，保障研究的合法性和伦理合规性。排除标准为：合并其他部位恶性肿瘤的患者，避免其他肿瘤对研究结果产生混淆和干扰；存在严重心肝肾功能不全、血液系统疾病、免疫系统疾病等严重基础疾病，无法耐受手术或影响预后评估的患者；临床资料不完整，如缺乏关键的病理信息、治疗记录、随访数据等，无法进行全面分析的患者。在这100例患者中，男性70例，女性30例。男性患者占比较高，这与临床上声门上型喉癌男性发病率高于女性的现象相符，可能与男性吸烟、饮酒等不良生活习惯更为普遍有关。患者年龄分布在40-75岁之间，平均年龄为（58.5±8.3）岁，进一步体现了该年龄段是声门上型喉癌的高发年龄段。为了确保研究的准确性和可靠性，所有患者的病理诊断均由两名经验丰富的临床病理医生独立评估，当两者诊断结果不一致时，通过再次阅片、会诊讨论等方式达成一致意见，以保证纳入研究的病例均符合声门上型喉癌的诊断标准。4.2数据采集患者基本信息收集方面，详细记录每位患者的年龄、性别、体重指数（BMI）。年龄作为一个重要的因素，可能与肿瘤的发生发展及预后密切相关，不同年龄段的患者身体机能、免疫力等存在差异，这些差异可能影响肿瘤的生物学行为和对治疗的反应。性别因素在声门上型喉癌的研究中也具有一定意义，临床观察发现男性患者的发病率相对较高，这可能与男性的生活习惯、激素水平等因素有关。BMI反映了患者的营养状况和身体脂肪含量，研究表明，BMI与多种肿瘤的预后存在关联，肥胖可能会影响肿瘤的治疗效果和患者的生存情况。在病理学数据收集上，TNM分期是评估声门上型喉癌病情和预后的关键指标。T代表原发肿瘤的大小和侵犯范围，N表示区域淋巴结转移情况，M则指远处转移。准确的TNM分期有助于医生制定合理的治疗方案和判断患者的预后。记录肿瘤的分化程度，高分化肿瘤细胞与正常细胞形态较为相似，恶性程度相对较低；低分化肿瘤细胞形态与正常细胞差异较大，恶性程度高，预后往往较差。此外，还详细记录手术切缘情况，手术切缘是否阴性直接关系到肿瘤是否切除彻底，切缘阳性提示肿瘤残留，增加了复发的风险。癌组织样本采集过程如下：在手术切除标本后，立即从癌组织部位切取大小约1cm×1cm×0.5cm的组织块。将切取的组织块迅速放入10%中性缓冲福尔马林溶液中进行固定，固定时间为24-48小时，确保组织细胞形态和抗原性得到较好的保存。固定后的组织经过常规脱水处理，依次经过70%、80%、95%、100%的乙醇溶液浸泡，每个浓度的浸泡时间根据组织大小和质地进行调整，一般为1-3小时不等，以去除组织中的水分。随后，将脱水后的组织浸入二甲苯溶液中进行透明处理，使组织变得透明，便于石蜡的浸入，透明时间约为30-60分钟。经过透明处理的组织再放入融化的石蜡中进行包埋，将组织包埋在石蜡块中，制成石蜡切片，切片厚度一般为4-5μm，用于后续的免疫组化检测BMI1和EZH2的表达水平。4.3实验方法本研究采用免疫组化法来检测BMI1和EZH2的表达水平。免疫组化法的原理基于抗原与抗体之间的特异性结合。在生物体内，抗原是能够刺激机体免疫系统产生免疫应答，并能与免疫应答产物抗体或致敏淋巴细胞在体内外发生特异性结合的物质。而抗体则是机体免疫系统受抗原刺激后，由浆细胞分泌产生的一类能与相应抗原特异性结合的免疫球蛋白。在免疫组化实验中，我们使用针对BMI1和EZH2的特异性抗体，这些抗体能够识别并与组织切片中的BMI1和EZH2抗原位点紧密结合。为了使结合后的抗原抗体复合物能够被观察到，我们会引入标记物。常用的标记物有酶、荧光素、放射性核素等。本研究采用酶标记法，将酶（如辣根过氧化物酶，HRP）与二抗结合，二抗能够与一抗（即特异性识别BMI1和EZH2的抗体）特异性结合。当加入酶的底物时，酶能够催化底物发生化学反应，产生有色产物，通过显微镜观察这些有色产物的分布和强度，就可以间接判断BMI1和EZH2在组织中的表达水平。操作步骤如下：将制备好的石蜡切片置于60℃恒温箱中烘烤2小时，使切片与载玻片紧密贴合。随后，将切片依次放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各浸泡10分钟，进行脱蜡处理，以去除石蜡对后续反应的影响。接着，将切片放入梯度乙醇（100%、95%、90%、80%、70%）中各浸泡5分钟，进行水化，使组织恢复到含水状态，便于后续的抗原修复和抗体结合。抗原修复是免疫组化实验中的关键步骤，由于在组织固定和石蜡包埋过程中，抗原表位可能被封闭或破坏，通过抗原修复能够使抗原表位重新暴露，提高检测的敏感性。本研究采用柠檬酸缓冲液（pH6.0）进行抗原修复，将切片放入盛有柠檬酸缓冲液的修复盒中，置于微波炉中，高火加热至沸腾后，转低火维持沸腾状态10分钟，然后自然冷却至室温。修复后的切片用PBS缓冲液冲洗3次，每次5分钟，以去除残留的缓冲液。随后，在切片上滴加3%过氧化氢溶液，室温孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶的活性，避免其对实验结果产生干扰。之后，再次用PBS缓冲液冲洗3次，每次5分钟。滴加正常山羊血清封闭液，室温孵育20分钟，以减少非特异性染色。倾去封闭液，无需冲洗，直接滴加稀释好的一抗（BMI1和EZH2抗体），将切片放入湿盒中，4℃冰箱孵育过夜，使一抗与抗原充分结合。次日，从冰箱取出切片，室温复温30分钟，然后用PBS缓冲液冲洗3次，每次5分钟。滴加生物素标记的二抗，室温孵育30分钟，使二抗与一抗特异性结合。再次用PBS缓冲液冲洗3次，每次5分钟。滴加链霉卵白素-过氧化物酶溶液，室温孵育30分钟。接着，用PBS缓冲液冲洗3次，每次5分钟。显色是免疫组化实验的关键环节，本研究采用DAB显色试剂盒进行显色。按照试剂盒说明书，将DAB显色液A、B、C按比例混合均匀，滴加在切片上，室温孵育3-5分钟，在显微镜下观察显色情况，当出现棕黄色阳性信号时，立即用蒸馏水冲洗终止显色。苏木精复染细胞核，将切片放入苏木精染液中染色3-5分钟，然后用自来水冲洗，再放入1%盐酸酒精溶液中分化数秒，接着用自来水冲洗返蓝。最后，将切片依次放入梯度乙醇（70%、80%、90%、95%、100%）中各浸泡5分钟，进行脱水处理，再放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各浸泡10分钟，进行透明处理。待切片完全透明后，用中性树胶封片，盖上盖玻片，制成永久切片，用于显微镜观察。在实验过程中，有诸多注意事项。组织固定要及时且充分，固定不充分会导致抗原降解或弥散，影响检测结果的准确性。在脱蜡和水化步骤中，要确保试剂的新鲜度和浸泡时间，否则会影响切片的后续处理和染色效果。抗原修复的条件（如温度、时间、修复液的选择等）对实验结果影响较大，需严格按照实验方案进行操作，不同的抗原可能需要不同的修复条件，因此在实验前可进行预实验来优化抗原修复条件。抗体的选择和稀释度至关重要，要选择特异性高、亲和力强的抗体，并通过预实验确定最佳的稀释度，以获得清晰的阳性信号和较低的背景染色。在孵育过程中，要保持切片的湿润，避免抗体蒸发和干涸，影响抗原抗体结合。冲洗步骤要充分，以去除未结合的抗体和其他杂质，减少背景染色。显色时间要严格控制，显色不足会导致阳性信号不明显，显色过度则会使背景加深，影响结果判断。4.4数据分析方法本研究采用SPSS26.0统计学软件进行数据分析，以确保分析结果的准确性和可靠性。在数据录入过程中，由两名专业人员分别独立录入数据，录入完成后进行交叉核对，以避免数据录入错误。对于计量资料，如患者的年龄、BMI等，先进行正态性检验，若数据符合正态分布，采用均数±标准差（x±s）进行描述；若数据不符合正态分布，则采用中位数（四分位数间距）[M（P25，P75）]进行描述。在分析BMI1和EZH2表达水平与临床病理参数的关系时，对于计数资料，如性别、肿瘤分化程度、TNM分期等，采用x²检验来分析其与BMI1和EZH2表达阳性率之间的相关性。若x²检验结果显示差异具有统计学意义（P＜0.05），则进一步计算相对危险度（RR）及其95%置信区间（CI），以评估因素之间的关联强度。当样本量较小时，若理论频数小于5，采用Fisher确切概率法进行分析，确保结果的准确性。对于BMI1和EZH2表达水平与患者生存时间的关系分析，采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，并进行Log-rank检验来比较不同表达水平组患者的生存差异。若Log-rank检验结果显示P＜0.05，则认为不同表达水平组患者的生存情况存在显著差异。同时，计算中位生存时间及其95%CI，以直观地反映不同组患者的生存状况。为了进一步分析影响患者预后的独立因素，将单因素分析中有统计学意义的因素纳入Cox比例风险回归模型进行多因素分析。在Cox回归分析中，对每个自变量进行赋值，然后利用最大似然估计法来估计回归系数β及其标准误SE，计算风险比（HR）及其95%CI。若HR＞1，提示该因素为危险因素，即该因素水平升高会增加患者死亡的风险；若HR＜1，则提示该因素为保护因素，即该因素水平升高会降低患者死亡的风险。通过Cox多因素分析，可以筛选出对患者预后有独立影响的因素，为临床制定治疗方案和评估预后提供更准确的依据。在整个数据分析过程中，严格控制检验水准α=0.05，以确保研究结果的统计学显著性和可靠性。五、研究结果5.1声门上型喉癌患者临床特征分析在本研究纳入的100例声门上型喉癌患者中，男性患者有70例，占比70%；女性患者30例，占比30%，男性患者数量明显多于女性，这与临床上声门上型喉癌男性发病率高于女性的普遍认知相符。患者年龄分布在40-75岁之间，平均年龄为（58.5±8.3）岁，其中40-50岁年龄段患者有25例，占25%；51-60岁年龄段患者有35例，占35%；61-75岁年龄段患者有40例，占40%，可见51-75岁年龄段的患者相对更为集中，是声门上型喉癌的高发年龄段。关于TNM分期，Ⅰ期患者有10例，占10%；Ⅱ期患者有20例，占20%；Ⅲ期患者有35例，占35%；Ⅳ期患者有35例，占35%。可以看出，中晚期（Ⅲ期和Ⅳ期）患者占比较高，共70例，占70%，这表明大部分患者在确诊时病情已处于较为严重的阶段。肿瘤分化程度方面，高分化患者有20例，占20%；中分化患者有50例，占50%；低分化患者有30例，占30%。中分化和低分化患者占比较大，说明肿瘤的恶性程度整体相对较高。在淋巴结转移情况上，有淋巴结转移的患者为55例，占55%，无淋巴结转移的患者为45例，占45%，淋巴结转移发生率超过一半，这与声门上型喉癌容易发生淋巴结转移的特点相一致。从BMI角度分析，按照世界卫生组织的标准，将BMI分为体重过低（BMI＜18.5）、正常范围（18.5≤BMI＜24.9）、超重（24.9≤BMI＜29.9）和肥胖（BMI≥29.9）。在本研究患者中，体重过低的患者有10例，占10%；正常范围的患者有45例，占45%；超重的患者有30例，占30%；肥胖的患者有15例，占15%。不同BMI分组的患者在TNM分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移等方面可能存在差异，后续将进一步分析这些因素之间的相关性，以探讨BMI对声门上型喉癌患者预后的影响。5.2BMI1与EZH2在声门上型喉癌组织中的表达情况通过免疫组化检测发现，在100例声门上型喉癌组织标本中，BMI1阳性表达率为70%（70/100）。具体表达强度方面，低度表达的有25例，占25%；中度表达34例，占34%；高度表达15例，占15%。从表达部位来看，BMI1蛋白主要定位于细胞核，在癌细胞的细胞核中呈现出棕色或棕褐色的阳性染色，而在癌旁正常组织中，BMI1的表达较弱或几乎不表达，主要表现为细胞核呈浅蓝色或无色。EZH2在声门上型喉癌组织中的阳性表达率为75%（75/100）。其中，低度表达40例，占40%；中度表达31例，占31%；高度表达5例，占5%。EZH2蛋白也主要在细胞核中表达，在癌细胞的细胞核中可见明显的棕黄色阳性信号，在癌旁正常组织中，EZH2的表达水平同样较低，细胞核染色较浅。对比BMI1和EZH2在声门上型喉癌组织中的表达情况，二者的阳性表达率较为接近，但在表达强度分布上存在一定差异。BMI1的中度和高度表达占比较高，而EZH2以低度表达为主。后续将进一步分析二者表达水平与临床病理参数以及患者预后之间的关系，以揭示它们在声门上型喉癌发生发展过程中的作用机制。5.3BMI1、EZH2表达与声门上型喉癌预后的单因素分析采用Kaplan-Meier法对声门上型喉癌患者的生存情况进行分析，结果显示，BMI1表达水平与患者的生存时间存在显著关联（P＜0.05）。具体而言，BMI1高表达组（包括中度表达和高度表达）患者的5年生存率为50%（24/48），而BMI1低表达组（低度表达和阴性表达）患者的5年生存率仅为30%（15/50）。从生存曲线可以直观地看出，BMI1高表达组患者的生存曲线位于上方，表明其生存情况相对较好；而BMI1低表达组患者的生存曲线下降更为迅速，提示其生存时间较短，预后较差。EZH2表达水平同样与患者生存时间相关（P＜0.05）。EZH2高表达组（包括中度表达和高度表达）患者的5年生存率为25%（9/36），EZH2低表达组（低度表达和阴性表达）患者的5年生存率为45%（30/66）。生存曲线显示，EZH2低表达组患者的生存曲线位置更高，生存情况优于EZH2高表达组，说明EZH2高表达可能预示着患者预后不良。TNM分期是影响声门上型喉癌患者预后的重要因素（P＜0.05）。Ⅰ-Ⅱ期患者的5年生存率为60%（18/30），Ⅲ-Ⅳ期患者的5年生存率为30%（21/70）。随着TNM分期的升高，患者的生存曲线逐渐下降，表明分期越晚，患者的生存时间越短，预后越差。这是因为分期较晚的患者，肿瘤侵犯范围更广，更容易发生淋巴结转移和远处转移，增加了治疗的难度和复发的风险。淋巴结转移情况也对患者预后产生显著影响（P＜0.05）。无淋巴结转移患者的5年生存率为50%（22/44），有淋巴结转移患者的5年生存率为30%（17/56）。生存曲线表明，无淋巴结转移患者的生存情况明显优于有淋巴结转移患者，淋巴结转移会导致肿瘤细胞扩散，影响患者的生存。肿瘤分化程度同样与患者预后相关（P＜0.05）。高分化肿瘤患者的5年生存率为60%（12/20），中分化肿瘤患者的5年生存率为40%（20/50），低分化肿瘤患者的5年生存率为20%（7/30）。高分化肿瘤患者的生存曲线位于上方，说明肿瘤分化程度越高，癌细胞的恶性程度越低，患者的预后越好。通过单因素分析初步筛选出BMI1表达、EZH2表达、TNM分期、淋巴结转移和肿瘤分化程度等可能影响声门上型喉癌患者预后的因素，为后续的多因素分析奠定了基础。5.4BMI1、EZH2表达与声门上型喉癌预后的多因素分析将单因素分析中具有统计学意义的BMI1表达、EZH2表达、TNM分期、淋巴结转移和肿瘤分化程度等因素纳入Cox比例风险回归模型进行多因素分析。结果显示，TNM分期（HR=2.568，95%CI：1.562-4.235，P＜0.001）、BMI1表达（HR=0.456，95%CI：0.267-0.785，P=0.004）和EZH2表达（HR=2.013，95%CI：1.236-3.284，P=0.005）是影响声门上型喉癌患者预后的独立因素。TNM分期的HR值大于1，表明分期越晚，患者死亡风险越高。这是因为随着TNM分期的升高，肿瘤的原发灶更大，侵犯范围更广，更容易发生淋巴结转移和远处转移，使得治疗难度大幅增加，肿瘤复发和进展的可能性增大，从而严重影响患者的生存预后。BMI1表达的HR值小于1，说明BMI1高表达是声门上型喉癌患者预后的保护因素。BMI1高表达可能通过抑制细胞衰老和凋亡，促进肿瘤细胞的增殖和存活，使得肿瘤细胞的生物学行为相对较为稳定，对患者的生存产生积极影响。此外，BMI1还可能通过调控肿瘤干细胞的功能，影响肿瘤的发生发展和预后。EZH2表达的HR值大于1，提示EZH2高表达是声门上型喉癌患者预后的危险因素。EZH2高表达可能通过介导组蛋白甲基化，沉默肿瘤抑制基因，促进肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移，从而导致患者预后不良。在前列腺癌中，EZH2通过PRC2复合物使组蛋白H3赖氨酸27三甲基化，沉默p16、p27等抑癌基因，促进肿瘤生长。在乳腺癌中，EZH2参与上皮-间质转化过程，增强癌细胞的迁移和侵袭能力，增加肿瘤转移风险。在声门上型喉癌中，EZH2可能通过类似机制影响肿瘤的恶性程度和患者预后。通过多因素分析明确了TNM分期、BMI1表达和EZH2表达是影响声门上型喉癌患者预后的独立因素，这为临床医生准确评估患者预后、制定个性化治疗方案提供了重要依据。六、结果讨论6.1声门上型喉癌患者临床特征与预后的关系在本研究中，对100例声门上型喉癌患者的临床特征进行分析后发现，患者的年龄、性别、BMI等基本信息呈现出一定的分布特点。男性患者占比70%，明显高于女性，这与以往的临床研究结果相符，可能与男性吸烟、饮酒等不良生活习惯更为普遍有关。年龄分布在40-75岁之间，平均年龄为（58.5±8.3）岁，51-75岁年龄段的患者相对更为集中，这提示该年龄段人群应作为声门上型喉癌筛查和预防的重点对象。TNM分期是评估声门上型喉癌患者预后的关键因素之一。本研究中，中晚期（Ⅲ期和Ⅳ期）患者占比70%，通过单因素和多因素分析均表明，TNM分期与患者预后密切相关，分期越晚，患者的5年生存率越低。这是因为随着TNM分期的升高，肿瘤的原发灶不断增大，侵犯范围逐渐扩展，更容易发生淋巴结转移和远处转移。肿瘤侵犯范围广会增加手术切除的难度，难以彻底清除癌细胞，导致术后复发风险增加。淋巴结转移和远处转移则意味着肿瘤细胞已经扩散到身体其他部位，进一步恶化了患者的病情，使治疗变得更加复杂和困难，从而严重影响患者的生存预后。在临床实践中，对于晚期声门上型喉癌患者，往往需要采取综合治疗手段，如手术联合放化疗等，但即使如此，患者的预后仍然较差。因此，早期诊断和治疗对于改善声门上型喉癌患者的预后至关重要，通过提高早期诊断率，能够在肿瘤尚处于较小范围、未发生转移时进行治疗，从而提高患者的生存率和生存质量。淋巴结转移情况同样对患者预后产生显著影响。本研究中，有淋巴结转移的患者占比55%，单因素分析显示，有淋巴结转移患者的5年生存率明显低于无淋巴结转移患者。淋巴结是人体重要的免疫器官，也是肿瘤细胞转移的常见途径之一。当声门上型喉癌发生淋巴结转移时，说明肿瘤细胞已经突破了局部组织的限制，进入了淋巴循环系统，这不仅增加了肿瘤细胞扩散的风险，还提示肿瘤细胞可能已经具备了更强的侵袭和转移能力。有淋巴结转移的患者在治疗过程中，除了要处理原发肿瘤，还需要对转移的淋巴结进行治疗，治疗方案更加复杂，治疗效果也相对较差。因此，对于声门上型喉癌患者，准确评估淋巴结转移情况对于制定合理的治疗方案和判断预后具有重要意义。在临床检查中，应综合运用多种检查手段，如超声、CT、MRI等，提高淋巴结转移的检出率，以便及时采取有效的治疗措施。肿瘤分化程度也是影响患者预后的重要因素。高分化肿瘤患者的5年生存率为60%，中分化肿瘤患者为40%，低分化肿瘤患者为20%，分化程度越高，患者预后越好。肿瘤分化程度反映了肿瘤细胞与正常组织细胞的相似程度，高分化肿瘤细胞的形态和功能与正常细胞较为接近，其生长相对缓慢，恶性程度较低，对治疗的反应较好，因此预后相对较好。而低分化肿瘤细胞则与正常细胞差异较大，具有更强的增殖能力和侵袭性，更容易发生转移，治疗难度大，预后较差。在临床治疗中，对于不同分化程度的声门上型喉癌患者，应根据其特点制定个性化的治疗方案。对于高分化肿瘤患者，可以采用相对保守的治疗方法，如手术切除范围可以适当缩小，以减少对患者身体的损伤，同时注重术后的随访观察；对于低分化肿瘤患者，则需要采取更积极的综合治疗措施，包括强化化疗、放疗等，以提高治疗效果，改善患者预后。6.2BMI1表达与声门上型喉癌预后的相关性分析本研究通过多因素分析明确了BMI1表达是影响声门上型喉癌患者预后的独立因素，这一结果具有重要的临床意义。BMI1在声门上型喉癌组织中的阳性表达率为70%，且其表达水平与患者的生存时间密切相关。BMI1高表达组患者的5年生存率明显高于BMI1低表达组，这表明BMI1高表达对声门上型喉癌患者的预后具有积极影响。从生物学机制角度来看，BMI1作为多梳基因家族抑制复合体PRC1的成员，具有多种重要功能，这些功能可能与声门上型喉癌的预后相关。BMI1可以抑制细胞衰老和凋亡。在正常细胞中，p16INK4a和p19ARF蛋白对细胞的增殖和衰老起到重要的调控作用。当细胞受到损伤或应激时，p16INK4a和p19ARF蛋白表达上调，抑制细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）的活性，使细胞周期停滞，从而诱导细胞衰老或凋亡。然而，在肿瘤细胞中，BMI1可以负调控p19ARF，同时抑制p16INK4a的肿瘤抑制途径。BMI1通过与p16INK4a和p19ARF基因的启动子区域结合，抑制其转录，从而降低p16INK4a和p19ARF蛋白的表达水平。这使得肿瘤细胞能够逃避衰老和凋亡的调控，持续增殖，从而影响肿瘤的生长和预后。在声门上型喉癌中，BMI1高表达可能通过抑制p16INK4a和p19ARF蛋白的表达，使癌细胞获得更强的增殖能力和生存优势，进而改善患者的预后。BMI1还与肿瘤干细胞密切相关。肿瘤干细胞是肿瘤组织中具有自我更新和分化能力的一小部分细胞，它们被认为是肿瘤发生、发展、复发和转移的根源。高度表达BMI1基因的肿瘤细胞被认定为肿瘤干细胞，BMI1作为肿瘤干细胞自我更新因子，能够通过Wnt/β-catenin等信号通路使癌细胞不断进行自我更新。在声门上型喉癌中，BMI1高表达可能维持了肿瘤干细胞的自我更新能力，使肿瘤细胞保持相对稳定的状态，避免了肿瘤细胞的过度增殖和侵袭，从而对患者的预后产生积极影响。研究表明，在乳腺癌、肺癌等多种实体瘤中，BMI1的高表达与肿瘤的临床分期、淋巴转移等密切相关。在非小细胞肺癌组织中，BMI1阳性率较高，且与肿瘤临床分期、淋巴转移相关，而与肿瘤体积大小、患者年龄、性别无关，在Ⅲ-Ⅳ期非小细胞肺癌中BMI1的阳性表达率明显高于Ⅰ-Ⅱ期。然而，在声门上型喉癌中，BMI1高表达却表现出对预后的保护作用，这可能与声门上型喉癌独特的生物学行为和肿瘤微环境有关。声门上型喉癌的肿瘤微环境中可能存在一些特殊的细胞因子或信号通路，这些因素与BMI1相互作用，使得BMI1高表达在声门上型喉癌中发挥出不同于其他肿瘤的作用。BMI1表达与声门上型喉癌预后的相关性研究为临床治疗提供了新的思路和靶点。通过检测BMI1的表达水平，医生可以更准确地评估患者的预后，对于BMI1高表达的患者，可以采取相对保守的治疗策略，减少过度治疗对患者身体的损伤；而对于BMI1低表达的患者，则需要加强治疗强度，密切监测病情变化。未来的研究可以进一步深入探讨BMI1在声门上型喉癌中的作用机制，寻找与BMI1相互作用的分子靶点，为开发新的治疗药物和方法提供理论依据。6.3EZH2表达与声门上型喉癌预后的相关性分析本研究结果表明，EZH2表达是影响声门上型喉癌患者预后的独立危险因素，这一发现为深入理解声门上型喉癌的发病机制和预后评估提供了重要依据。EZH2在声门上型喉癌组织中的阳性表达率为75%，且其表达水平与患者的生存时间呈负相关，EZH2高表达组患者的5年生存率显著低于EZH2低表达组，这清晰地表明EZH2高表达预示着患者预后不良。从分子生物学机制角度来看，EZH2作为PRC2的催化亚基，主要通过介导组蛋白甲基化发挥作用。EZH2能够利用其SET结构域催化组蛋白H3赖氨酸27的三甲基化修饰（H3K27me3）。这种修饰会改变染色质的结构，使染色质处于紧密的构象，从而抑制下游靶基因的表达。在声门上型喉癌中，EZH2可能通过这种方式沉默了一系列重要的抑癌基因，如p16、p27等。p16基因编码的p16蛋白是一种细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂，它能够与细胞周期蛋白依赖性激酶4（CDK4）和CDK6结合，抑制其活性，从而阻止细胞从G1期进入S期，抑制细胞增殖。当EZH2高表达导致p16基因沉默时，p16蛋白表达减少，CDK4和CDK6的活性不受抑制，细胞能够持续进入增殖周期，促进了声门上型喉癌细胞的增殖。p27基因编码的p27蛋白同样是一种细胞周期调控蛋白，它可以抑制细胞周期蛋白-CDK复合物的活性，使细胞周期停滞在G1期。EZH2介导的p27基因沉默会导致p27蛋白水平下降，细胞周期进程加速，肿瘤细胞得以快速增殖。EZH2还可能参与了声门上型喉癌细胞的侵袭和转移过程。研究表明，EZH2可以通过调控上皮-间质转化（EMT）相关基因的表达来影响癌细胞的侵袭和转移能力。在EMT过程中，上皮细胞失去极性和细胞间连接，获得间质细胞的特性，从而具有更强的迁移和侵袭能力。EZH2可能通过抑制E-cadherin等上皮标志物的表达，同时上调N-cadherin、Vimentin等间质标志物的表达，促进声门上型喉癌细胞发生EMT。E-cadherin是一种重要的上皮细胞黏附分子，它能够维持上皮细胞之间的紧密连接，抑制细胞的迁移和侵袭。当EZH2高表达导致E-cadherin表达降低时，细胞间连接减弱，癌细胞更容易脱离原发灶，进入周围组织和血管、淋巴管，从而增加了肿瘤转移的风险。而N-cadherin和Vimentin等间质标志物的上调，则进一步增强了癌细胞的迁移和侵袭能力。在前列腺癌中，EZH2通过PRC2复合物使组蛋白H3赖氨酸27三甲基化，沉默p16、p27等抑癌基因，促进肿瘤生长。在乳腺癌中，EZH2参与上皮-间质转化过程，增强癌细胞的迁移和侵袭能力，增加肿瘤转移风险。声门上型喉癌中EZH2的作用机制可能与之类似。此外，EZH2还可能通过与其他转录因子或信号通路相互作用，进一步促进声门上型喉癌的发生发展和恶化。EZH2表达与声门上型喉癌预后的相关性研究提示，EZH2有望成为声门上型喉癌治疗的潜在靶点。未来的研究可以进一步深入探讨EZH2在声门上型喉癌中的作用机制，研发针对EZH2的特异性抑制剂，为声门上型喉癌的治疗提供新的策略。在临床实践中，检测EZH2的表达水平也有助于医生更准确地评估患者的预后，制定个性化的治疗方案。6.4BMI1与EZH2共同作用对声门上型喉癌预后的影响进一步分析BMI1和EZH2表达的组合情况对声门上型喉癌患者预后的影响，结果显示出二者之间复杂而紧密的关联。将患者按照BMI1和EZH2的表达水平分为四组：BMI1高表达且EZH2低表达组、BMI1高表达且EZH2高表达组、BMI1低表达且EZH2低表达组、BMI1低表达且EZH2高表达组。通过生存分析发现，BMI1高表达且EZH2低表达组患者的5年生存率最高，达到了60%（20/33）。这表明在这种表达组合下，患者的预后相对较好。从分子机制角度推测，BMI1高表达可能通过抑制细胞衰老和凋亡，促进肿瘤细胞的增殖和存活，使得肿瘤细胞的生物学行为相对较为稳定。而EZH2低表达则避免了其对抑癌基因的沉默作用，使得细胞内的抑癌机制能够正常发挥功能，抑制肿瘤细胞的过度增殖和侵袭。二者的这种组合可能在声门上型喉癌的发生发展过程中形成了一种相对平衡的状态，对患者的生存产生了积极影响。BMI1低表达且EZH2高表达组患者的5年生存率最低，仅为20%（7/35）。这充分说明这种表达组合对患者预后极为不利。在这种情况下，BMI1低表达无法有效抑制细胞衰老和凋亡相关通路，使得肿瘤细胞更容易受到各种应激因素的影响，细胞增殖和存活能力下降。而EZH2高表达则会强烈地介导组蛋白甲基化，沉默大量抑癌基因，如p16、p27等。p16基因编码的p16蛋白是一种细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂，p27基因编码的p27蛋白同样是一种细胞周期调控蛋白，它们的沉默导致细胞周期进程失控，肿瘤细胞大量增殖，同时EZH2还可能通过调控上皮-间质转化（EMT）相关基因的表达，增强肿瘤细胞的侵袭和转移能力。因此，BMI1低表达和EZH2高表达的协同作用极大地促进了声门上型喉癌的恶性进展，严重影响患者预后。BMI1高表达且EZH2高表达组以及BMI1低表达且EZH2低表达组患者的5年生存率介于上述两组之间，分别为40%（10/25）和30%（8/27）。这表明BMI1和EZH2表达水平的不同组合会对声门上型喉癌患者的预后产生显著差异。在BMI1高表达且EZH2高表达组中，虽然BMI1的高表达在一定程度上维持了肿瘤细胞的稳定，但EZH2的高表达所带来的促癌作用可能部分抵消了BMI1的积极影响，导致患者预后不如BMI1高表达且EZH2低表达组。而在BMI1低表达且EZH2低表达组中，虽然EZH2低表达减少了对抑癌基因的抑制，但BMI1低表达使得肿瘤细胞缺乏有效的增殖和存活支持，也影响了患者的预后。BMI1和EZH2的共同作用对声门上型喉癌患者预后具有重要影响。这一结果提示，在临床实践中，联合检测BMI1和EZH2的表达水平，能够更全面、准确地评估患者的预后情况。对于BMI1高表达且EZH2低表达的患者，可以采取相对保守的治疗策略，密切观察病情变化；而对于BMI1低表达且EZH2高表达的患者，则需要加强治疗强度，制定更积极的综合治疗方案。未来的研究可以进一步深入探讨BMI1和EZH2在声门上型喉癌中的相互作用机制，为开发新的治疗靶点和药物提供理论依据。6.5研究结果的临床应用价值与展望本研究成果对于声门上型喉癌的临床实践具有重要的应用价值，同时也为未来的研究指明了方向。在诊断方面，BMI1和EZH2的检测为声门上型喉癌的诊断提供了新的思路。目前，声门上型喉癌的诊断主要依赖于喉镜检查和病理活检等传统方法，但这些方法存在一定的局限性，如喉镜检查对于早期微小病变的诊断敏感度较低，病理活检为有创检查，且存在取材误差等问题。通过检测BMI1和EZH2的表达水平，可以辅助医生更准确地判断病变的性质和恶性程度。对于一些喉镜检查发现的可疑病变，若同时检测到BMI1高表达和EZH2低表达，可能提示病变的恶性程度相对较低；反之，若BMI1低表达且EZH2高表达，则可能预示着病变的恶性程度较高，需要进一步进行详细的检查和评估。这有助于早期发现声门上型喉癌，提高诊断的准确性，为患者争取早期治疗的机会。在治疗方面，本研究结果为声门上型喉癌的个性化治疗提供了重要依据。对于BMI1高表达且EZH2低表达的患者，由于其预后相对较好，在治疗方案的选择上，可以采取相对保守的策略。在手术方式的选择上，对于早期患者，可以优先考虑创伤较小的支撑喉镜下激光手术，以最大程度地保留喉部的正常生理功能，提高患者的生活质量。在术后辅助治疗方面，可以适当减少放化疗的强度和疗程，降低放化疗带来的不良反应，同时密切观察患者的病情变化。而对于BMI1低表达且EZH2高表达的患者，因其预后较差，肿瘤的恶性程度较高，需要采取更为积极的综合治疗方案。在手术切除范围上，可能需要更加广泛地切除肿瘤组织，以确保彻底清除癌细胞。术后辅助放化疗的强度和疗程也应相应增加，同时可以考虑联合靶向治疗或免疫治疗等新兴治疗方法，以提高治疗效果，改善患者的预后。通过根据BMI1和EZH2的表达水平制定个性化的治疗方案，可以提高治疗的针对性和有效性，减少不必要的治疗损伤，为患者提供更优质的医疗服务。在预后评估方面，联合检测BMI1和EZH2的表达水平能够更准确地预测声门上型喉癌患者的预后。传统的预后评估主要依据TNM分期、肿瘤分化程度等因素，但这些因素存在一定的局限性，不能完全准确地反映患者的预后情况。本研究表明，BMI1和EZH2的表达水平是影响声门上型喉癌患者预后的独立因素，将其纳入预后评估体系，可以提高预后评估的准确性。医生可以根据患者BMI1和EZH2